花生殼木犀草素的研究進(jìn)展

路立峰，李赫宇，李增緒，鄭丹，呂艷

（1.山東藥品食品職業(yè)學(xué)院，山東威海264210；2.天津市益倍健生物技術(shù)有限公司，天津300457）

花生殼木犀草素的研究進(jìn)展

路立峰1，李赫宇2，李增緒1，鄭丹1，呂艷1

（1.山東藥品食品職業(yè)學(xué)院，山東威海264210；2.天津市益倍健生物技術(shù)有限公司，天津300457）

對(duì)花生殼中木犀草素的提取、純化、含量測(cè)定和藥理活性研究進(jìn)行綜述，并對(duì)其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提出展望。

花生殼；木犀草素；研究進(jìn)展

花生是世界上最重要的5大油料作物之一，其生產(chǎn)遍及世界各地；花生殼是豆科一年生草本植物落花生（Arachishypogaea L.）的干燥果殼，近年來(lái)隨著花生的種植面積在逐年增大，隨之而來(lái)花生殼年產(chǎn)量已達(dá)450萬(wàn)t，但大部分被當(dāng)作燃料燒掉或作廢棄物丟棄，因此花生殼的開(kāi)發(fā)利用潛力巨大，如何合理利用開(kāi)發(fā)花生殼，具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。目前我國(guó)對(duì)花生殼的綜合利用水平有待提高，充分挖掘并利用花生殼中的成分勢(shì)在必行，其將廣泛用于食品、保健品、醫(yī)藥和化工等行業(yè)。

1提取

1.1 回流提取法

王超等［1］首先通過(guò)單因素試驗(yàn)，考察在影響花生殼中木犀草素的5個(gè)提取因素乙醇體積分?jǐn)?shù)、回流溫度、回流次數(shù)、回流時(shí)間、料液比，確定了回流溫度影響最顯著；然后通過(guò)正交試驗(yàn)，研究乙醇回流提取花生殼中木犀草素的因素影響和工藝條件，并對(duì)提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。確定為選擇70%乙醇溶液作溶劑，按照料液比（g/mL）為1∶20，控制溫度85℃，提取1.5 h，木犀草素的提取量可達(dá)7.41 mg/g。

1.2 堿處理法

丁愛(ài)鳳等［2］針對(duì)影響花生殼中木犀草素堿液提取工藝的有關(guān)因素，進(jìn)行單因素分析和正交試驗(yàn)探討，確定最佳優(yōu)化工藝條件為：選擇20倍于花生殼重量的0.2 mol/L氫氧化鈉溶液，在95℃下提取2次，每次時(shí)間1.0 h。堿提酸沉后，沉淀物用乙酸乙酯萃取，減壓濃縮，蒸干，出膏率0.64%，干膏中含木犀草素達(dá)19.50%。

1.3 萃取法

肖淑娟等［3］選用木犀草素、丙烯酰胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯、偶氮二異丁腈分別作模板分子、功能單體、交聯(lián)劑、引發(fā)劑，在一定條件下，采用分子印跡技術(shù)，合成了木犀草素分子印跡聚合物。再用固相萃取柱（SPE）為固定相，上樣，甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，對(duì)洗脫液進(jìn)行印跡聚合物（MIPs）進(jìn)行識(shí)別特性及分離能力的定性分析。結(jié)果表明，該印跡聚合物能較好的吸附并選擇木犀草素，所得到的木犀草素96.2%的純度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高出硅膠柱20%，且MIPs-SPE柱穩(wěn)定性好，洗脫再生后可反復(fù)使用。

1.4 超聲提取法

肖淑娟等［4］報(bào)道超聲波輔助法提取花生殼木犀草素具有高效、節(jié)能、省時(shí)的優(yōu)點(diǎn)，超聲提取后用紫外分光光度法測(cè)定其含量，確定最佳工藝條件為：70%乙醇為提取溶劑，料液比為1∶10（g/mL），提取3次，每次15 min。

李洪娟［5］以40目花生殼粉為原料，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取提取時(shí)間、料液比、提取溫度、乙醇體積分?jǐn)?shù)等為考察因素，采用L9（34）設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定木犀草素含量，計(jì)算提取率，考察了在4個(gè)影響因素中，料液比＞乙醇體積分?jǐn)?shù)＞提取時(shí)間＞提取溫度，并確定了超聲波法提取木犀草素最佳工藝為30倍量70%乙醇60℃下提取30 min。

1.5 纖維素酶法

丁桂峰等［6］用纖維素酶改善花生殼通透性，以乙醇為溶媒，考察了影響因素中的酶解溫度、酶解液pH值、酶用量及酶解時(shí)間，確定了纖維素酶法在酶解溫度50℃，酶解液pH值5.2，酶用量0.10%，酶解時(shí)間1.5 h時(shí)，從花生殼提取的木犀草素比未預(yù)處理法的提高將近2倍。

1.6 微波法

熊清平等［7］研究微波輔助提取花生殼中木犀草素的最佳工藝條件。以木犀草素提取率為指標(biāo)條件，高效液相法測(cè)定其含量，應(yīng)用單因素和正交試驗(yàn)，分別考察影響微波輔助提取的三個(gè)因素：微波時(shí)間、料液比及提取時(shí)間，篩選最佳工藝條件。結(jié)果表明，微波輔助提取木犀草素微波時(shí)間2.0 min，料液比1∶6，提取時(shí)間4 h時(shí)，提取工藝有較好的穩(wěn)定性。在木犀草素含量、提取率及收率方面，微波輔助提取工藝比傳統(tǒng)的乙醇回流提取工藝更具有優(yōu)勢(shì)。

2純化

周萍等［8］選擇Dl01、AB-8、HPD1O0、HPD400、HPD100（藥用級(jí)）、HPD600、DA201等7種型號(hào)的大孔吸附樹(shù)脂為固定相，水為洗脫液，對(duì)花生殼提取液進(jìn)行洗脫，通過(guò)比較洗脫前后總黃酮及木犀草素的含量，考察靜態(tài)吸附容量和洗脫率，篩選確定出7種大孔樹(shù)脂中Dl01型樹(shù)脂對(duì)花生殼提取液進(jìn)行精制純化的效果最佳。Dl01型樹(shù)脂純化后，總黃酮提高了近5倍，含量達(dá)到56.8%；同時(shí)木犀草素提高了近4倍，含量可達(dá)9.65%。

3含量測(cè)定

3.1 分光光度法

楊增明等［9］對(duì)8省17份花生殼藥材利用分光光度法，以木犀草素為對(duì)照品，測(cè)定總黃酮含量，結(jié)果顯示，在17份花生殼藥材中黃酮類成分含量在0.25%～1.42%之間，含量差異較大。

周萍等［10］用三氯化鋁-乙酸鉀比色法測(cè)定總黃酮含量，對(duì)花生殼中總黃酮建立含量測(cè)定方法，結(jié)果顯示總黃酮在1.04 μg/mL～10.4 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 2，平均加樣回收率100.3%（n=9），所建立的方法操作簡(jiǎn)便快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠；并認(rèn)為在11份不同產(chǎn)區(qū)、年份的花生殼中山東產(chǎn)花生殼的含量最高。

3.2 間接原子吸收法

徐文峰等［11］以木犀草素為對(duì)照品，對(duì)花生殼進(jìn)行提取處理后，利用堿式醋酸鉛與木犀草素分子結(jié)構(gòu)上的酚羥基絡(luò)合，生成難溶于水的鉛鹽沉淀，再用原子吸收法對(duì)上清液中剩余的Pb2+測(cè)定濃度，從而間接測(cè)定花生殼中木犀草素的含量。此法簡(jiǎn)單快速。

3.3 高效液相色譜法

唐麗萍等［12］用甲醇作溶劑超聲處理遼寧、山東等7個(gè)省區(qū)18份花生殼樣品，以C18鍵合硅膠為填充劑，柱溫30℃，甲醇∶乙醇∶乙酸（50∶50∶1）為流動(dòng)相，波長(zhǎng)254nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，在0.174 4 μg～1.744 μg范圍內(nèi)木犀草素成良好的線性關(guān)系，并且在7個(gè)省區(qū)中山東，河南產(chǎn)的花生殼含有較高的木犀草素含量。

丁愛(ài)鳳等［13］用高效液相色譜法對(duì)我國(guó)8個(gè)省區(qū)不同品種的120份花生殼樣品（其中45份中間型、31份普通型、23份珍珠豆型、14份龍生型、7份多粒型）進(jìn)行木犀草素的含量測(cè)定。結(jié)果表明，在5種類型的花生殼中，中間型、多粒型和珍珠豆型木犀草素含量比龍生型和普通型含量高。

王晴晴等［14］采用Kromasil C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），乙腈和0.1%甲酸水溶液梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)340 nm，柱溫27℃，同時(shí)測(cè)定花生殼木犀草素、綠原酸和3，4-二咖啡?？崴岷俊＝Y(jié)果表明三種成分質(zhì)量濃度分別在17.25μg/mL～276μg/mL，3.75 μg/mL～60 μg/mL，3.63 μg/mL～58.08 μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，RSD分別為0.71%，1.49%，0.44%。建立和完善了花生殼資源產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)中質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，此方法具有快速、準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。

3.4 熒光法

張志恒等［15］根據(jù)木犀草素與人血清白蛋白（HSA）分子中某些氨基酸結(jié)合后，引起熒光強(qiáng)度降低、熒光峰位變化，確定木犀草素對(duì)HAS的結(jié)合。通過(guò)木犀草素在不同溫度下對(duì)HSA的熒光猝滅作用，遵循Stem-Volmer方程計(jì)算，確認(rèn)靜態(tài)猝滅是HSA熒光強(qiáng)度被猝滅的原因，而且有較強(qiáng)的熒光猝滅作用。根據(jù)Forster理論，通過(guò)計(jì)算木犀草素與HSA間的結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點(diǎn)數(shù)，說(shuō)明木犀草素對(duì)HSA的猝滅能力較強(qiáng)，主要依賴于疏水能力。同時(shí)用同步熒光光譜分析，木犀草素與HSA中的色氨酸結(jié)合后，降低了氨基酸殘基的疏水性，是木犀草素對(duì)HSA構(gòu)象產(chǎn)生的原因。

4藥理活性

4.1 體外抗氧化

楊穎等［16］通過(guò)建立DPPH、TBA和Xan-XOD 3個(gè)體外抗氧化模型，對(duì)用70%乙醇提取的花生殼離心后的上清液進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示，花生殼提取物在清除DPPH試驗(yàn)中優(yōu)于BHT的抗氧化效果，其IC50為7μg/mL；花生殼提取物在抗油脂過(guò)氧化試驗(yàn)中表現(xiàn)出了較高的抗氧化能力，其抗亞麻油脂質(zhì)過(guò)氧化效果明顯高于BHT，IC50大豆油中為0.017%，花生油中為1.19%，亞麻油中為0.027%；花生殼提取物在NH2OH-Xan-XOD系統(tǒng)中顯示出清除過(guò)氧化氫、超氧自由基和OH的能力，IC50為0.2 mg/mL。木犀草素是花生殼提取物中主要的抗氧化物質(zhì)，木犀草素含量越高，抗氧化能力越強(qiáng)，抗氧化能力與木犀草素含量成正相關(guān)關(guān)系。

4.2 體外抗菌

陳春濤等［17］用甲醇回流提取，選取4種有機(jī)溶劑（按極性由小到大順序）進(jìn)行梯度萃取，濾紙片法跟蹤純化組分測(cè)定抑菌活性，結(jié)果表明乙酸乙酯組分中不僅黃酮類成分含量較高，而且抑菌活性較強(qiáng)，酸堿沉淀法、柱層析法純化后，得到1、2、3 3種化合物。其中1號(hào)在3種組分中抑菌范圍最廣、作用最強(qiáng)，2號(hào)木犀草素其次，3號(hào)最弱。1號(hào)在抑制金黃色葡萄球菌、青霉、枯草桿菌和釀酒酵母活性方面作用最強(qiáng)，抑菌譜最廣。而2號(hào)僅對(duì)枯草桿菌和金黃色葡萄球菌起到一定的抑制作用；3號(hào)則對(duì)釀酒酵母、金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出一定的抑菌活性。

4.3 體外抗炎

張毅等［18］以小鼠單核/巨噬細(xì)胞系（RAW264.7細(xì)胞）為研究對(duì)象，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞設(shè)脂多糖（LPS）處理組（模型組），木犀草素低、中、高劑量處理組和空白對(duì)照組，加入藥物后再加入LPS繼續(xù)培養(yǎng)，結(jié)果表明，木犀草素在LPS誘導(dǎo)下，中高劑量組較低劑量組、對(duì)照組能顯著抑制細(xì)胞前列腺素（PGE2）的生成；電泳遷移率變動(dòng)分析（EMSA）檢測(cè)，說(shuō)明中、高劑量木犀草素能顯著抑制NF-kB的DNA結(jié)合活性；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）測(cè)定，說(shuō)明木犀草素愈高，抑制COX-2 mRNA水平愈顯著，Western blot法測(cè)定RAW264.7細(xì)胞中NF-kB和環(huán)氧合酶2（COX-2）蛋白的表達(dá)，觀察木犀草素對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞核因子kB（NF-kB）和COX-2表達(dá)及NF-kBDNA結(jié)合活性的影響。木犀草素的抗炎作用可能與其能抑制核內(nèi)NF-kB的表達(dá)和DNA結(jié)合活性從而下調(diào)COX-2的表達(dá)有關(guān)。

4.4 抗腫瘤

胡春萍等［19］報(bào)道木犀草素對(duì)肺癌細(xì)胞株A549的生長(zhǎng)有顯著的抑制作用，細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)隨木犀草素濃度的增大，周期蛋白cyclin A，p-CDC2和p-Rb的表達(dá)逐漸抑制，木犀草素能將A549阻滯于G2期。就細(xì)胞凋亡率而言，木犀草素處理組明顯高于未處理組，主要依據(jù)是Hoechst 33258核染色，AnnexinVFITC/PI雙染后使A549處于凋亡或壞死。木犀草素在促使受JNK磷酸化控制的BAX進(jìn)入線粒體引起細(xì)胞凋亡的同時(shí)，還可通過(guò)使NF-kB（p65）的磷酸化水平顯著降低，抑制MEKK1使細(xì)胞凋亡。細(xì)胞經(jīng)木犀草素、TNF-α刺激后，用免疫熒光染色顯示木犀草素處理后的A549很好的阻滯了受TNF-α刺激的p65入核，使轉(zhuǎn)錄因子的作用無(wú)法發(fā)揮，加速細(xì)胞凋亡。

王煥等［20］則采用建立模型對(duì)照、5-氟尿嘧啶陽(yáng)性對(duì)照、木犀草素實(shí)驗(yàn)組，以肺癌轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)總數(shù)為指標(biāo)，考察對(duì)小鼠Lewis肺癌和4T1乳腺癌自發(fā)性腫瘤轉(zhuǎn)移和被動(dòng)轉(zhuǎn)移；通過(guò)計(jì)算胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)，考察對(duì)荷瘤免疫的影響。結(jié)果表明，木犀草素能顯著減少小鼠Lewis和4T1肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)，并明顯抑制轉(zhuǎn)移，使小鼠的免疫反應(yīng)得以增強(qiáng)，從而實(shí)現(xiàn)抑制腫瘤細(xì)胞遷移及免疫調(diào)節(jié)，達(dá)到抗癌目的。

4.5 抗抑郁

劉毅等［21］采用10種應(yīng)激方法，對(duì)小鼠進(jìn)行慢性不可預(yù)知性溫和應(yīng)激（CUS），建立了抑郁模型，對(duì)小鼠行為進(jìn)行檢測(cè)及氧化損傷測(cè)定。結(jié)果顯示，糖水消耗實(shí)驗(yàn)反應(yīng)出小鼠“快感缺失”；曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)顯示小鼠緊張程度增加，興趣喪失，表現(xiàn)出對(duì)周圍環(huán)境絕望，活動(dòng)能力下降，經(jīng)木犀草素灌胃后，抑郁樣行為得到改善。氧化損傷測(cè)定顯示，提高超氧物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）活性，降低丙二醛（MDA）含量，使得氧自由基和過(guò)氧化氫清除，小鼠腦組織抗氧化活性提升，氧化/抗氧化平衡改善，應(yīng)激損傷抑制，是木犀草素治療抑郁的機(jī)制。

4.6 鎮(zhèn)痛

劉圓等［22］比較生理鹽水、乙酰水楊酸、木犀草素抗炎鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)，對(duì)小鼠灌胃給予木犀草素（1 mg/kg/d，ig）后，發(fā)現(xiàn)木犀草素能很好地延緩由熱刺激引起的疼痛反應(yīng)的潛伏期（痛閡值）；同時(shí)在10、20 min內(nèi)木犀草素也能明顯減少對(duì)經(jīng)腹腔注射醋酸后的小鼠扭體次數(shù)，抑制率分別為30%、25%；木犀草素能加快吸收，改善血液循環(huán)，通過(guò)抑制神經(jīng)末梢，降低刺激敏感性，使二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹及角叉菜引起的大鼠足腫脹癥狀能明顯減輕，木犀草素抗炎鎮(zhèn)痛效果明顯。

4.7 保護(hù)心血管

印媛君等［23］采用培養(yǎng)1 d～3 d的乳鼠心肌細(xì)胞，作為對(duì)照組、模型組、不同濃度的木犀草素預(yù)處理組，預(yù)處理2 h后，用一定濃度的H2O2氧化損傷2 h，檢測(cè)各組噻唑藍(lán)MTT值，確定選擇木犀草素預(yù)處理組濃度是100 μmol/L。觀察小鼠同組別細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率測(cè)定、Hoechest33342-PI雙染和熒光染料羅丹明Rh123染色，檢測(cè)培養(yǎng)上清液乳酸脫氫酶LDH、丙二醛MDA及超氧化物歧化酶SOD活性，表明木犀草素組大、中劑量能較好地保護(hù)受H2O2損傷的乳鼠心肌細(xì)胞；心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率顯著回升；雙染后呈現(xiàn)藍(lán)色細(xì)胞系，少見(jiàn)碎核、未見(jiàn)壞死細(xì)胞；提高對(duì)Rh123的攝取能力，減少細(xì)胞線粒體損傷程度，保護(hù)氧化損傷的心肌細(xì)胞。影響木犀草素作用機(jī)制的因素有：心肌細(xì)胞活力、心肌細(xì)胞膜、抗氧化損傷能力、細(xì)胞膜損傷、心肌細(xì)胞線粒體膜電位及功能等因素。

4.8 糖尿病

劉濤等［24］對(duì)60只采用高脂高糖飲食加腹腔注射鏈脲霉素建立糖尿病模型的雄性大鼠，隨機(jī)分為5組，每組12只，木犀草素低、中、高劑量組每日分別灌以不同劑量的木犀草素，模型組每日灌以定量生理鹽水，持續(xù)56 d。再建立大鼠大腦中動(dòng)脈永久性缺血模型，術(shù)后24 h斷頭取腦，用細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑法（TUNEL法）觀察大鼠腦細(xì)胞凋亡，原位雜交法測(cè)定腦組織HSP70 mRNA及FasmRNA的表達(dá)。結(jié)果表明，隨木犀草素劑量增大，凋亡細(xì)胞呈下降趨勢(shì)，抑制糖尿病腦梗死大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡能力越強(qiáng)；木犀草素對(duì)大鼠腦組織HSP70 mRNA表達(dá)，與其劑量呈現(xiàn)正相關(guān)，劑量越大，HSP70的表達(dá)越顯著；對(duì)FasmRNA的表達(dá)，則呈負(fù)相關(guān)，劑量越大，F(xiàn)asmRNA表達(dá)越不顯著，可較好地保護(hù)糖尿病后的腦組織，降低腦梗發(fā)生率。

5應(yīng)用前景

花生殼中含有十分豐富的木犀草素，而木犀草素又具有良好的抗氧化、抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗抑郁、保護(hù)心血管等性能，加大對(duì)植物資源花生殼的開(kāi)發(fā)力度，變廢為寶，將木犀草素應(yīng)用在食品中做天然抗氧化劑和防腐劑，具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。

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Research Progress of the Luteolin from Peanutshell

LU Li-feng1，LI He-yu2，LI Zeng-xu1，ZHENG Dan1，Lü Yan1
（1.Shandong Drug and Food Vactional College，Weihai 264210，Shandong，China；2.Tianjin Ubasichealth Nutrition Co.，Ltd.，Tianjin 300457，China）

The extraction，purification，assay and pharmacological studies of the luteolin from peanutshell and the further research were reviewed.

peanutshell；uteolin；further research

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.041

2015-03-02

路立峰（1980—），男（漢），講師，本科，研究方向：中藥質(zhì)量控制研究。