呂海濤，韓惟芳，麻秀萍＊，李 江，邵進(jìn)明

（1．貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院 一附院，貴州 貴陽(yáng)550002；2．貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng)550002）

飛龍掌血［Toddalia asiatica （Linn．）Lam．］系蕓香科飛龍掌血屬的唯一植物［1］，我國(guó)多地均有分布，收載于2003版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》，是貴州苗族常用藥材之一，其入藥部位為干燥根或根皮及葉，藥性辛、微苦、溫，歸脾、胃經(jīng)。根及根皮有小毒，具有散瘀止血、祛風(fēng)止痛、消腫解毒功能；葉具有散瘀止血、祛風(fēng)除濕、消腫解毒功能［2］，可治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷、閉經(jīng)等。飛龍掌血主要含有香豆素類、生物堿類、三萜類等［3－5］。近年來(lái)，關(guān)于其指紋圖譜研究及有效成分含量測(cè)定的研究已有報(bào)道［6－9］。但到目前為此，未見(jiàn)對(duì)飛龍掌血莖皮部化學(xué)成分的研究報(bào)道。為飛龍掌血藥材的全面質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)，擬用莖皮部藥材代替根皮入藥，以期達(dá)到對(duì)資源的保護(hù)和可持續(xù)利用，并為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和研究奠定基礎(chǔ)，為指導(dǎo)合理用藥、完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定等提供參考，筆者對(duì)飛龍掌血的莖皮進(jìn)行高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜構(gòu)建，并對(duì)飛龍掌血莖皮部和根皮部的有效成分白屈菜紅堿含量進(jìn)行測(cè)定。

1 材料與方法

1．1 藥材

供試藥材于2013年8月采自貴州貴陽(yáng)市云巖區(qū)（1）、龍里縣（2）、貴陽(yáng)市花溪區(qū)（3）、興義市馬嶺鎮(zhèn)（4）、興仁縣（5）、貴陽(yáng)市白云區(qū)（6）、貴陽(yáng)市烏當(dāng)區(qū)（7）、關(guān)嶺縣（8）、都勻市平浪鎮(zhèn)（9）、貴陽(yáng)市南明區(qū)（10），經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室孫慶文老師鑒定為蕓香科植物飛龍掌血的干燥莖皮。同時(shí)還采集了貴州不同地區(qū)和云南省紅河州產(chǎn)飛龍掌血的根皮部作對(duì)照。

1．2 試劑與儀器

試劑：白屈菜紅堿（純度97．5%，天津馬克生物技術(shù)有限公司），甲醇（色譜純），磷酸（分析純）等。儀器：日本島津LC－20AT 高效液相色譜儀（二元泵，SPD－20A 紫外可見(jiàn)檢測(cè)器，手動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，Shimadzu LC solution Lite色譜工作站），《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A 版、2004B版）》（國(guó)家藥典委員會(huì)發(fā)行），電子分析天平（AB265S，上海奧豪斯有限公司），超聲清洗儀（HS10260D，天津市恒奧科技有限公司），中草藥粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）等。

1．3 色譜條件

色譜柱：phenomenex Cemini C18柱（250mm×4．6mm×5μm）；流動(dòng)相為甲醇－0．1%磷酸水溶液，梯度洗脫程序見(jiàn)表1；流速1．0 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)320nm，進(jìn)樣體積10μL，柱溫30℃。

表1 色譜流動(dòng)相梯度程序Table 1 The gradient of chromatographic mobile phase

1．4 溶液制備

對(duì)照品溶液：精密稱取適量白屈菜紅堿，加甲醇制成濃度為0．041 6mg／mL的溶液。供試品溶液：精密稱取飛龍掌血莖皮部藥材粉末1 g，置于100mL具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，稱量，超聲提取30min，放冷至室溫，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，過(guò)濾，取續(xù)濾液即得。

1．5 指紋圖譜的構(gòu)建

在圖譜的構(gòu)建前進(jìn)行方法學(xué)考察，精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)均符合構(gòu)建指紋圖譜的要求。分別取1～10號(hào)黔產(chǎn)飛龍掌血莖皮部藥材制備供試品溶液，在確定色譜條件下分別進(jìn)樣并記錄圖譜，采用國(guó)家藥典委員會(huì)《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A 版）》的操作規(guī)范軟件分析后，建立飛龍掌血莖皮部藥材的色譜指紋圖譜共有模式。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004B版）》對(duì)飛龍掌血莖皮部藥材的HPLC 圖譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。

1．6 白屈菜紅堿的含量測(cè)定

［5］的條件，對(duì)黔產(chǎn)10批飛龍掌血莖皮、根皮部藥材樣品的白屈菜紅堿含量進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2．1 指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)

從圖1看出，黔產(chǎn)飛龍掌血莖皮部藥材指紋圖譜有13個(gè)共有峰，與白屈菜紅堿對(duì)照品圖譜比較，確定8號(hào)峰為白屈菜紅堿峰。以8號(hào)峰為參照峰，分別計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積（表2、表3）。

圖1 白屈菜紅堿對(duì)照品及黔產(chǎn)飛龍掌血莖皮部藥材的指紋圖譜Fig．1 The fingerprint spectrum of Chelerythrine sample and T．a(chǎn)siaticastem bark

表2 黔產(chǎn)飛龍掌血莖皮部藥材HPLC指紋圖譜各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間Table 2 Relative retention time of common peak of HPLC fingerprint spectrum of Toddalia asiatica stem bark

表3 黔產(chǎn)飛龍掌血莖皮部藥材HPLC指紋圖譜各共有峰的相對(duì)峰面積Table 3 The relative peak area of common peak of HPLC fingerprint spectrum of T．a(chǎn)siaticastem bark

圖2 10批黔產(chǎn)飛龍掌血莖皮部藥材的疊加指紋圖譜Fig．2 Superposition fingerprint spectrum of T．a(chǎn)siaticastem bark samples from different sources

2．2 指紋圖譜的相似度

以共有模式參照譜計(jì)算1～10 號(hào)樣品的相似度，分 別 為0．992、0．993、0．988、0．988、0．985、0．991、0．990、0．994、0．989和0．973。從相似度數(shù)據(jù)和黔產(chǎn)飛龍掌血莖皮部藥材的疊加指紋圖譜（圖2）可以看出，各批次藥材具有良好的一致性。

從圖3可知，黔產(chǎn)飛龍掌血根皮部圖譜與莖皮部圖譜相似，其共有模式相似度高于0．97，初步判斷莖皮部與根皮部的化學(xué)成分相似。云南產(chǎn)飛龍掌血根皮部與黔產(chǎn)飛龍掌血根皮部的圖譜差異較大，也不同于黔產(chǎn)飛龍掌血莖皮部指紋圖譜，表明兩產(chǎn)地藥材所含化學(xué)成分有較大差異，且化學(xué)成分的含量差異也較大，由此判斷黔產(chǎn)飛龍掌血莖皮部指紋圖譜可區(qū)別于云南產(chǎn)飛龍掌血根皮部藥材。

圖3 飛龍掌血莖皮部與根皮部的HPLC指紋圖譜Fig．3 HPLC fingerprint spectrum of stem bark and root bark of T．a(chǎn)siatica

2．3 白屈菜紅堿含量

經(jīng)測(cè)定，1～10號(hào)黔產(chǎn)飛龍掌血莖皮部白屈菜紅 堿 的 含 量 分 別 為0．18%、0．20%、0．09%、0．06%、0．10%、0．06%、0．15%、0．13%、0．10%和0．12%；貴州飛龍掌血根皮部的白屈菜紅堿平均含量為0．20%，云南產(chǎn)為0．27%，比黔產(chǎn)飛龍掌血莖皮部高。

3 結(jié)論

采用高效液相色譜（HPLC）法，構(gòu)建黔產(chǎn)飛龍掌血莖皮部的指紋圖譜。結(jié)果表明，黔產(chǎn)飛龍掌血根皮部與莖皮部色譜圖共有模式的相似度高于0．9，表明根皮部與莖皮部的化學(xué)成分相似，莖皮部白屈菜紅堿的含量為0．06%～0．20%，根皮部的部分化學(xué)成分含量高于莖皮部，但貴陽(yáng)市云巖區(qū)、龍里縣產(chǎn)飛龍掌血莖皮部的白屈菜紅堿含量分別為0．18%和0．20%，與貴州飛龍掌血根皮部的白屈菜紅堿平均含量（0．20%）相當(dāng)。從資源可持續(xù)開(kāi)發(fā)利用角度看，可進(jìn)一步對(duì)飛龍掌血根皮部與莖皮部藥材進(jìn)行藥理學(xué)、毒理學(xué)等相關(guān)研究，以探明飛龍掌血莖皮部相關(guān)有效成分含量的差異，從而決定能否用飛龍掌血莖皮部代替其根皮部入藥，以保護(hù)該藥材資源及其可持續(xù)利用。

［參 考 文 獻(xiàn)］

［1］ 楚東海．中藥材飛龍掌血研究進(jìn)展［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（34）：19374－19395．

［2］ 貴州省藥品監(jiān)督管理局．貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［M］．貴陽(yáng)：貴州科技出版社，2003．

［3］ 黃 平，Karagianis Gloria，韋善新，等．飛龍掌血中三萜酸成分研究［J］．天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2005，17（4）：404－408．

［4］ 劉志剛，李 瑩，朱芳芳，等．GC－MS法分析貴州產(chǎn)飛龍掌血葉中揮發(fā)油成分［J］．貴陽(yáng)學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2011，6（2）：28－61．

［5］ 徐世霞．HPLC法測(cè)定飛龍掌血中白屈菜紅堿的含量［J］．北方藥學(xué)，2011，8（4）：5－6．

［6］ 徐世霞．HPLC法測(cè)定飛龍掌血中氯化兩面針堿的含量［J］．北方藥學(xué)，2011，8（5）：7－8．

［7］ 郝小燕，曹曉紅，梁 妍，等．高效液相色譜法測(cè)定飛龍掌血中異茴芹香豆素含量［J］．中國(guó)中藥雜志，2004，29（8）：768－769．

［8］ 劉志剛，劉曉燕，秦晉穎．飛龍掌血的HPLC 指紋圖譜研究［J］．中藥材，2010，33（8）：1240－1243．

［9］ 楊 亮，郭 晶，范寶成．苗族藥材飛龍掌血藥材指紋圖譜研究［J］．藥物研究，2011，20（14）：21－22．