吳友茹，陳明勇，朱 靜

(四川省綿陽(yáng)市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科 621000)

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·論 著·

肺纖維化患者血清及誘導(dǎo)痰肺表面活性蛋白水平測(cè)定及意義

吳友茹，陳明勇△，朱 靜

(四川省綿陽(yáng)市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科 621000)

目的 檢測(cè)特發(fā)性肺纖維化患者急性加重期血清及誘導(dǎo)痰肺表面活性蛋白D(SP-D)水平并探討其臨床治療意義。方法 選擇特發(fā)性肺纖維化患者急性加重期住院治療26例，分別收集納入患者入院時(shí)及治療后病情緩解血清及誘導(dǎo)痰液標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清及誘導(dǎo)痰SP-D水平。選擇42例健康人群作為對(duì)照組。結(jié)果 特發(fā)性肺纖維化患者急性加重期及病情緩解期血清SP-D平均水平分別為(196±82)、(125±69)ng/mL，健康對(duì)照組為(96±47)ng/mL，誘導(dǎo)痰SP-D平均水平為(153±71)、(106±64)ng/mL，急性加重期與緩解期及健康對(duì)照組SP-D水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 血清SP-D檢測(cè)可作為特發(fā)性肺纖維化患者急性加重診斷的生物學(xué)指標(biāo)。

特發(fā)性肺纖維化； 急性加重期； 肺表面活性蛋白D； 血清； 誘導(dǎo)痰

特發(fā)性肺纖維化(IPF)是最常見(jiàn)的、致死性的間質(zhì)性肺疾病，是一種病因不明，局限于肺部，慢性進(jìn)行性纖維化間質(zhì)性肺炎的一種特殊形式，組織病理學(xué)和/或高分辨計(jì)算機(jī)層面X線成像術(shù)顯示為普通間質(zhì)性肺炎特征[1]。新近觀點(diǎn)認(rèn)為，IPF的發(fā)生是由于尚未明確的刺激導(dǎo)致序貫性肺損傷，反復(fù)過(guò)度損傷修復(fù)最終導(dǎo)致肺纖維化。肺表面活性蛋白D(SP-D)為肺高度特異性蛋白，參與免疫、炎癥及過(guò)敏反應(yīng)調(diào)節(jié)，近年來(lái)國(guó)內(nèi)、外進(jìn)行的多項(xiàng)研究證明SP-D與慢性氣道炎癥的形成有關(guān)[2-3]。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)IPF急性加重期患者血清及誘導(dǎo)痰液標(biāo)本中SP-D水平，探討血清及誘導(dǎo)痰液標(biāo)本SP-D水平變化及能否作為IPF患者嚴(yán)重程度檢測(cè)的一項(xiàng)生物學(xué)指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年6月至2014年6月在綿陽(yáng)市中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科因IPF急性加重(AEIPF)住院的患者共26例，其中男13例，女13例，年齡51～67歲，平均(62±6)歲。IPF診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2011年3月美國(guó)胸科協(xié)會(huì)/歐洲呼吸協(xié)會(huì)提出的IPF診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]：所有入選患者都行肺部HRCT掃描，HRCT表現(xiàn)為典型的UIP模式，雙側(cè)肺部病灶表現(xiàn)主要分布在胸膜下及基底部的網(wǎng)格狀陰影、蜂窩肺、牽拉性支氣管擴(kuò)張、肺結(jié)構(gòu)扭曲及少磨玻璃影。排除其他已知原因的間質(zhì)性肺疾病，如家庭或職業(yè)環(huán)境暴露，結(jié)締組織疾病和藥物毒性等。AEIPF診斷標(biāo)準(zhǔn)：(1)過(guò)去或現(xiàn)在診斷IPF;(2)1個(gè)月內(nèi)發(fā)生無(wú)法解釋的呼吸困難加重；(3)低氧血癥加重或氣體交換功能?chē)?yán)重受損；(4)新出現(xiàn)的肺泡浸潤(rùn)影，排除肺部感染、肺栓塞、氣胸及心力衰竭等。所有患者入院后都給予糖皮質(zhì)激素抗炎聯(lián)合乙酰半胱氨酸、氧療、肺康復(fù)治療，對(duì)感染誘發(fā)加重的患者同時(shí)予抗感染等治療，病情緩解好轉(zhuǎn)出院時(shí)，收集緩解期血清標(biāo)本。42例健康對(duì)照者來(lái)自醫(yī)院的工作人員及門(mén)診體檢者，均無(wú)呼吸道疾病史及服用藥物，所有對(duì)照者肺功能檢查均正常。

1.2 儀器與試劑 人SP-D酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒購(gòu)于上海豐壽實(shí)業(yè)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 外周血標(biāo)本的采集與處理 所有AEIPF患者入院時(shí)及緩解出院時(shí)清晨采肘靜脈空腹血液標(biāo)本5 mL各1份，靜脈血采集后室溫靜置30 min，3 500 r/min離心10 min，分離血清，于-70 ℃冰箱保存。測(cè)定前將樣本置于室溫復(fù)融，混勻，再次離心，取上清液測(cè)定。采用ELISA測(cè)定血清標(biāo)本中SP-D水平。操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.2 誘導(dǎo)痰的采集與處理 患者入院后清潔漱口后，霧化吸入3%高滲性鹽水5～8 mL，誘導(dǎo)咳痰，將咳出的痰液置于培養(yǎng)皿中。向痰液內(nèi)加入4倍體積的0.1%的二硫蘇糖醇，渦旋振蕩10 min；再加入等量的磷酸鹽緩沖液振蕩5 min，2 000 r/min離心10 min，取上清液分裝，于-70 ℃冰箱保存。采用ELISA測(cè)定痰液標(biāo)本中SP-D水平。操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 IPF患者誘導(dǎo)痰SP-D水平比較 AEIPF患者誘導(dǎo)痰液中SP-D水平為(153±71)ng/mL，緩解期患者誘導(dǎo)痰液中SP-D水平為(106±64)ng/mL，急性加重期較緩解期高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 3組血清SP-D水平比較 IPF患者急性加重期血清SP-D水平為(196±82)ng/mL，緩解期血清SP-D水平為(125±69)ng/mL，經(jīng)治療后血清SP-D水平下降，治療前、后血清SP-D水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。健康對(duì)照組血清SP-D水平為(96±47)ng/mL，AEIPF患者血清SP-D水平顯著高于健康對(duì)照組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

既往臨床研究中發(fā)現(xiàn)，大部分慢性肺疾病患者血清SP-D水平相對(duì)于健康對(duì)照組有增高，這提示血清SP-D水平是慢性肺部疾病的血清學(xué)標(biāo)志。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，健康對(duì)照組和IPF患者組血清SP-D水平具有明顯差異，IPF患者血清SP-D水平明顯高于健康對(duì)照組。Nakamura等[4]對(duì)10例AEIPF患者進(jìn)行180 d隨訪研究，并對(duì)入院當(dāng)天血清Ⅱ型肺泡細(xì)胞表面抗原(KL-6)及SP-D水平進(jìn)行檢測(cè)，研究發(fā)現(xiàn)入院當(dāng)天血清SP-D水平越低的患者其平均生存時(shí)間越長(zhǎng)，認(rèn)為AEIPF患者血清SP-D水平可作為AEIPF患者預(yù)后評(píng)估有價(jià)值的生物學(xué)標(biāo)志。Huang等[5]對(duì)日本IPF患者研究發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測(cè)血清KL-6、SP-A和SP-D對(duì)IPF患者的診斷及預(yù)后判斷意義更大。

本研究也發(fā)現(xiàn)，AEIPF患者血清SP-D水平在入院當(dāng)天較恢復(fù)期出院時(shí)明顯升高，可能與在院治療使用糖皮質(zhì)激素有關(guān)。同樣國(guó)外有研究證實(shí)，IPF患者在疾病惡化時(shí)血清SP-D水平會(huì)升高，當(dāng)全身應(yīng)用糖皮質(zhì)激素后其水平會(huì)下降[6]。Janssen等[7]進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，血清SP-D水平可以作為結(jié)節(jié)病及IPF患者疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志，死亡患者較生存下來(lái)的IPF患者SP-D水平要高，且血清SP-D水平和激素治療的效果呈平行關(guān)系。SP-D在肺主動(dòng)防御中起核心作用，能夠增強(qiáng)抗原清除，調(diào)和過(guò)敏反應(yīng)，有利于炎癥消退。Kucejko等[8]對(duì)27例結(jié)節(jié)病、7例IPF及9例過(guò)敏性肺炎患者支氣管肺泡灌洗液用ELISA檢測(cè)SP-D、Clara細(xì)胞分泌的蛋白-16和白細(xì)胞介素-10水平，發(fā)現(xiàn)SP-D水平為76.49 ng/mL，并發(fā)現(xiàn)其水平與患者第1秒用力呼氣容積及肺活量檢測(cè)水平呈負(fù)相關(guān)。Bonella和Costabel[9]同樣對(duì)結(jié)締組織相關(guān)性間質(zhì)性肺疾病血清源自肺泡上皮蛋白KL-6、SP-D及SP-A等血清學(xué)標(biāo)志物研究發(fā)現(xiàn)其血清水平升高或支氣管肺泡灌洗液水平升高能反映肺纖維化的發(fā)展，以及肺功能損傷和預(yù)后判斷。

本研究對(duì)IPF患者急性加重期及緩解期血清SP-D水平檢測(cè)證實(shí)，AEIPF患者血清SP-D水平明顯高于健康對(duì)照人群及恢復(fù)期患者，監(jiān)測(cè)血清SP-D水平為AEIPF病情及療效評(píng)價(jià)提供了一個(gè)新的生物學(xué)檢測(cè)指標(biāo)。

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The levels and clinical significance of serum and induced sputum sputum pulmonary surfactant protein inpatients with pulmonary fibrosis

WUYou-ru,CHENMing-yong△，ZHUJing

(DepartmentofRespiratoryMedicine，CenterHospitalofMianyang,Mianyang，Sichuan621000,China)

Objective To explore levels and the clinical significance of serum and induced sputum(SP)-D in patients with acute exacerbation of idiopathic pulmonary fibrosis(AEIPF).Methods The contents of serum and induced sputum SP-D for 26 patients with AEIPF and stable IPF were detected by ELISA,42 cases of healthy people were choosen as control group.Results Average serum SP-D levels in patients who experienced an acute exacerbation and remission were (196±82),(125±69)ng/mL,respectively,the control group was (96±47)ng/mL,induced sputum SP-D was(153±71),(106±64)ng/mL.The serum SP-D for patients with COPD in acute exacerbation stage was significantly higher than that for patients in stable stage and controls(P<0.05).Conclusion The serum SP-D may be a potential diagnostic biomarker for AEIPF.

idiopathic pulmonary fibrosis； acute exacerbation； SP-D； serum； induced sputum

吳友茹，女，本科，主任醫(yī)師，主要從事肺間質(zhì)纖維化方面的研究?！?/p>

，E-mail:clzw082005@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.03.025

A

1672-9455(2015)03-0350-02

2014-06-21

2014-11-12)