許妍妮，張 鍵，李 婧，張 燕

(1.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中心, 陜西西安 710061；2.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部地方病研究所，環(huán)境與疾病相關(guān)基因教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西西安 710061)

·臨床研究·

盤狀結(jié)構(gòu)域受體2在前列腺癌組織標(biāo)本中的表達(dá)及臨床意義

許妍妮1,2，張 鍵1，李 婧1，張 燕1

(1.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中心, 陜西西安 710061；2.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部地方病研究所，環(huán)境與疾病相關(guān)基因教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西西安 710061)

目的 探討盤狀結(jié)構(gòu)域受體2(DDR2)蛋白在前列腺癌組織標(biāo)本中的表達(dá)，分析其與其臨床病理特征的關(guān)系，初步明確DDR2在前列腺中的作用，為探尋新的治療靶點(diǎn)提供基礎(chǔ)。方法 采用免疫組化檢測46例前列腺癌和18例良性前列腺增生組織標(biāo)本中DDR2的表達(dá)情況。結(jié)果 前列腺癌組織的DDR2陽性表達(dá)率(82.61%)明顯高于良性前列腺增生組織的DDR2的陽性表達(dá)率(11.11%，P<0.05)。Gleason 5～7分組和8～10分組前列腺癌組織的DDR2陽性表達(dá)率明顯高于Gleason 2～4分組前列腺癌組織DDR2陽性表達(dá)率 (P<0.05)。DDR2蛋白陽性表達(dá)與TNM分期比較，TNM分期越晚，DDR2陽性表達(dá)率越高(P<0.05)。血清PSA水平≤20 μg/L組前列腺癌組織的DDR2陽性表達(dá)率明顯低于PSA>20 μg/L組(P<0.05)。而DDR2陽性表達(dá)率與患者的年齡因素?zé)o關(guān)(P>0.05)。結(jié)論 DDR2在前列腺癌中高表達(dá)，提示其在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用。

前列腺癌；盤狀結(jié)構(gòu)域受體2；免疫組化；蛋白表達(dá)；治療靶點(diǎn)

前列腺癌為男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見惡性腫瘤[1]，發(fā)病率居男性腫瘤第二位，占男性全部癌癥例數(shù)的14%[2]。前列腺癌發(fā)病率有顯著的區(qū)域性差異，發(fā)達(dá)國家的發(fā)生率和致死率均高于發(fā)展中國家[3]。雖然目前我國前列腺癌發(fā)生率不高，但隨著人口老齡化、生活方式及飲食結(jié)構(gòu)的西化，其將持續(xù)快速增長，嚴(yán)重影響我國男性健康[4]。因此，研究前列腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的關(guān)鍵分子，對于開發(fā)靶向藥物有重要意義。盤狀結(jié)構(gòu)域受體2 (discoidin domain receptor 2，DDR2)是一種受體型蛋白酪氨酸激酶，其配體為膠原[5-6]，在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[7-9]。本研究采用免疫組化檢測DDR2在前列腺癌組織中的表達(dá)，分析其表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性，為進(jìn)一步研究DDR2在前列腺癌中的作用提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本 收集我院2010～2013年46例前列腺癌組織標(biāo)本(其中32例前列腺穿刺活檢標(biāo)本、14例前列腺切除術(shù)標(biāo)本)，均經(jīng)病理切片證實(shí)為前列腺癌。納入標(biāo)準(zhǔn)為癌組織長度超過1 mm，且術(shù)前未接受放化療。收集我院同期18例良性前列腺增生手術(shù)切除標(biāo)本，經(jīng)病理切片證實(shí)為良性前列腺增生。上述標(biāo)本均為常規(guī)石蠟包埋的存檔蠟塊。

1.1.2 臨床病理資料 前列腺癌患者年齡46～77歲，平均(60.3±2.8)歲。病理類型：按照Gleason評分進(jìn)行病理分級：Gleason評分2～4分為高分化，5～7分為中分化，8～10分為低分化癌。46例全部為腺癌，其中Gleason 2 ～ 4分11例、5～7分18例、8～10分17例。TNM臨床分期：T1期15例、T2期11例、T3期15例、T4期5例；N0期42例、N1期4例；M0期41例、M1期5例。前列腺增生患者年齡59～81歲，平均(69.1±3.2)歲。

1.1.3 試劑 免疫組化鏈霉親合素-生物素酶復(fù)合物(strept avidinbiotin complex，SABC)即用型試劑盒購自武漢博士德公司，DDR2抗體購自美國Santa公司。

1.2 方法

1.2.1 染色方法 標(biāo)本經(jīng)4%(體積分?jǐn)?shù))中性甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)切片。切片用二甲苯脫蠟，梯度乙醇和蒸餾水水化，PBS沖洗5 min×3次，每張切片加100 μL 3%過氧化氫溶液, 室溫下孵育30 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗5 min×3次后，滴加5%BSA封閉液室溫孵育20 min。甩去多余液體滴加DDR2一抗37 ℃孵育30 min，4 ℃冰箱過夜。PBS洗滌后滴加二抗37 ℃孵育30 min，洗滌后滴加SABC試劑孵育30 min。DAB顯色，蘇木素復(fù)染。梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。

1.2.2 結(jié)果判定 以細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒狀物為DDR2染色陽性。①按陽性細(xì)胞率：陽性細(xì)胞<5%為0分，5%～<10%為1分，10%～<30%為2分，30%～<70%為3分，≥70%為4分；②按細(xì)胞染色強(qiáng)度：無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。以上兩項(xiàng)幾分之積判定染色結(jié)果：0～1分為陰性(-)，2～ 4分為弱陽性(+)，6～8分為陽性(++)，9～12分為強(qiáng)陽性(+++)。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

免疫組化結(jié)果顯示，DDR2蛋白陽性反應(yīng)主要位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，呈棕黃色顆粒狀染色(圖1)。46例前列腺癌組織中，DDR2陽性表達(dá)率為82.61% (38/46)；18例前列腺增生組織中，DDR2陽性表達(dá)率為11.11% (2/18)。前列腺癌組織與前列腺增生組織的DDR2陽性表達(dá)率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05，表1)。結(jié)果提示DDR2可能在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。

圖1 DDR2在前列腺增生、前列腺癌組織中的表達(dá)差異(DAB，×40)

表1 前列腺癌、前列腺增生組織中DDR2的表達(dá)情況 [例(%)]

為了進(jìn)一步明確DDR2在前列腺癌病理進(jìn)程中的作用，我們分析了DDR2表達(dá)與前列腺癌組織標(biāo)本臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果表明，Gleason分級5～7分組、8～10分組的前列腺癌組織DDR2陽性率明顯高于Gleason分級2～4分組的前列腺癌組織DDR2陽性表達(dá)率，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表2)。DDR2蛋白陽性表達(dá)與TNM分期比較，TNM分期越晚，DDR2蛋白陽性表達(dá)率越高(P<0.05，表2)。T1期和T2期前列腺癌組織的DDR2陽性表達(dá)率分別為73.33%和72.33%，而T3期和T4期前列腺癌組織的DDR2陽性表達(dá)率則高達(dá)93.33%和100%。N0期前列腺癌組織的DDR2陽性表達(dá)率為80.95%，而N1期前列腺癌組織的DDR2陽性表達(dá)率則高達(dá)100%。M0期前列腺癌組織的DDR2陽性表達(dá)率為80.49%，而M1期前列腺癌組織的DDR2陽性表達(dá)率則高達(dá)100%。患者血清PSA水平≤20 μg/L組的前列腺癌組織DDR2陽性表達(dá)率明顯低于PSA>20 μg/L組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表2)。而DDR2蛋白陽性表達(dá)率與患者的年齡因素?zé)o關(guān)(P>0.05，表2)。

表2 46例前列腺癌組織中DDR2的表達(dá)情況 [例(%)]

3 討 論

近年來，我國前列腺癌的發(fā)生率越來越高，已成為影響我國男性健康的重要因素[2]。前列腺癌的分子生物學(xué)研究表明，多種癌基因、抑癌基因和其他調(diào)節(jié)基因共同參與了前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展，與其預(yù)后評價(jià)有著非常密切的關(guān)系[3]。

DDR2基因定位于1q23.3，編碼一個(gè)含有855個(gè)氨基酸、分子質(zhì)量約為120 ku的膜受體蛋白[6]。它屬于DDRs家族，是一類受體型蛋白酪氨酸激酶。DDR2的配體是膠原，其胞外段DS結(jié)構(gòu)域與膠原結(jié)合后，其胞內(nèi)段的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域內(nèi)的酪氨酸發(fā)生磷酸化，介導(dǎo)下游信號分子發(fā)生活化[7]。DDR2參與多種腫瘤的進(jìn)展過程。DDR2促進(jìn)乳腺癌發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)，促進(jìn)乳腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移[10]；DDR2促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞A375向肝轉(zhuǎn)移[11]，促進(jìn)肝癌細(xì)胞[12]、結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和遷移[13]；此外DDR2還與鼻咽癌、甲狀腺癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[14-15]。

我們采用免疫組化染色技術(shù)研究了DDR2在前列腺癌組織及良性前列腺增生組織中的表達(dá)情況，比較了兩種組織中DDR2表達(dá)水平的差異，發(fā)現(xiàn)DDR2在前列腺癌組織中的表達(dá)水平明顯高于前列腺增生組織。我們分析了DDR2表達(dá)水平與前列腺癌標(biāo)本臨床病理特征的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)Gleason評分越高、TNM分期越晚、PSA水平越高的前列腺癌標(biāo)本的DDR2表達(dá)水平越高。本研究初步提示DDR2可能在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中起促進(jìn)作用，為進(jìn)一步研究DDR2在前列腺癌中的作用提供了理論基礎(chǔ)。

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(編輯 何宏靈)

西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院面向全國招收泌尿外科進(jìn)修醫(yī)師的通知

西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院泌尿外科是國家重點(diǎn)學(xué)科。近年來形成了鮮明的學(xué)科內(nèi)亞專業(yè)，成立了腫瘤、結(jié)石、前列腺疾病、小兒泌尿、女性與神經(jīng)泌尿、男科疾病等不同學(xué)組。2010年起本學(xué)科與臺(tái)灣陽明大學(xué)泌尿外科(臺(tái)北榮民總醫(yī)院泌尿外科)建立開展長期合作，每年邀請4～5批臺(tái)灣著名泌尿外科專家來學(xué)科交流、講學(xué)、指導(dǎo)臨床工作。

為了給全國泌尿外科同道，特別是青年泌尿外科醫(yī)師提供良好的進(jìn)修鍛煉機(jī)會(huì)，本學(xué)科面向全國招收泌尿外科進(jìn)修醫(yī)師。熱誠歡迎全國各地泌尿外科醫(yī)生來我科進(jìn)修學(xué)習(xí)、共同進(jìn)步。

來本學(xué)科進(jìn)修學(xué)習(xí)實(shí)行導(dǎo)師制，每位進(jìn)修醫(yī)師根據(jù)條件和實(shí)際需求配備一位高年資醫(yī)師擔(dān)任導(dǎo)師，具體指導(dǎo)臨床實(shí)踐、臨床科研論文書寫等。進(jìn)修期限一般為1年。在全面進(jìn)修各亞專業(yè)基礎(chǔ)上，根據(jù)本人意愿可對部分亞專業(yè)進(jìn)行重點(diǎn)培養(yǎng)。學(xué)習(xí)期滿，經(jīng)考核合格者，將頒發(fā)專科進(jìn)修證書。

報(bào)名條件：1.大學(xué)本科以上學(xué)歷； 2.已取得執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格； 3.具有2年外科臨床工作經(jīng)驗(yàn)，或1年以上泌尿外科工作經(jīng)驗(yàn)。

申請程序：1.填寫《進(jìn)修申請表》； 2.將《進(jìn)修申請表》、三證復(fù)印件(學(xué)歷證書、執(zhí)業(yè)資格證書、醫(yī)師資格證書)、醫(yī)院證明等寄回。詳細(xì)情況請致電或發(fā)E-mail垂詢。

聯(lián)系方式：710061 西安市雁塔西路277號西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院泌尿外科

聯(lián)系人：吳大鵬(029-85323945；15102968258；wudapeng1974@yahoo.com)

Expression of discoidin domain receptor 2 in prostate cancer tissue and its clinical significance

XU Yan-ni1,2, ZHANG Jian1, LI Jing1, ZHANG Yan1

(1.Center for Translational Medicine,the First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061; 2.Institute of Endemic Diseases, Xi’an Jiaotong University Health Science Center, Xi’an 710061, China)

Objective To investigate the expression of discoidin domain receptor 2 (DDR2) in human prostate cancer and its correlation with the clinicopathologic parameters. Methods Immunohistochemistry assay was performed to detect the expression of DDR2 in 46 cases of prostate cancer and 18 cases of benign prostate hyperplasia. Results The positive expression of DDR2 in prostate cancer (82.61%) was significantly higher than that in benign prostate hyperplasia (11.11%,P<0.05). The positive expression of DDR2 in Gleason 5～7 group and 8～19 group was obviously higher than that in Gleason 2～4 group (P<0.05). The expression of DDR2 was positively related to the TNM stages and increased with tumor progression (P<0.05). The expression of DDR2 was significantly related to serum level of PSA (P<0.05), but not to age.Conclusion The overexpression of DDR2 may play an important role in the pathogenesis of prostate cancer.

prostate cancer; discoindin domain receptor 2; immunohistochemistry; protein expression; therapeutic target

2015-06-18

2015-07-01

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81300716)；教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金項(xiàng)目(No.20120201120089)；陜西省衛(wèi)生廳科研基金項(xiàng)目(No.2012D59)

張燕，助理研究員.E-mail：zyyan1114@163.com

許妍妮(1982-)，女(漢族)，學(xué)士，主管檢驗(yàn)師.研究方向:疾病早期診斷標(biāo)志. E-mail：xuyanni448@163.com

R737.25

A

10.3969/j.issn.1009-8291.2015.10.003