譚佐祥　于躍

摘 要：目的：建立水飛薊提取物中水飛薊賓的含量測(cè)定方法。方法：本實(shí)驗(yàn)采用Diamonsi（TM） C18（4.6mm×250mm，5？滋m）色譜柱；流動(dòng)相為甲醇：水：冰醋酸=42：58：0.5；檢測(cè)波長(zhǎng)為288nm；每次進(jìn)樣量20？滋L；流速：0.8mL/min；結(jié)果：水飛薊賓在2.12～64.36？滋g范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系。回歸方程是y=41676X+178737，R2=0.9984。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)采用HPLC測(cè)定水飛薊提取物中主要成分水飛薊賓的含量，方法簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于水飛薊提取物中水飛薊賓的含量測(cè)定方法。

關(guān)鍵詞：水飛薊；水飛薊賓；HPLC

水飛薊中黃酮類物質(zhì)是自菊科植物水飛薊種子中提取的藥用有效成分，是一類以二氫黃酮醇與苯丙素類衍生物縮合而成的具有C-9取代基的黃酮木質(zhì)素類化合物[1，2]。其中主要成分有水飛薊賓、異水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊亭四種同分異構(gòu)體。其中水飛薊賓含量最高，保肝活性最強(qiáng)[3，4]，是水飛薊中黃酮類物質(zhì)含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[5，6]。本文采用Diamonsi（TM） C18（4.6mm×250mm，5？滋m）色譜柱，以甲醇：水：冰醋酸=42：58：0.5為流動(dòng)相；在288nm檢測(cè)波長(zhǎng)下，采用HPLC測(cè)定水飛薊提取物中主要成分水飛薊賓的含量，取得了較理想效果。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

PL203電子天平（上海江儀儀器有限公司）；KQ-100E型超聲波處理器（濟(jì)南華舜儀器有限公司）；Waters 2695高效液相色譜儀（美國(guó)沃特世waters有限公司）；水飛薊賓對(duì)照品（中國(guó)生物藥品檢驗(yàn)所）；水飛薊黃酮類物質(zhì)提取物（東寧縣龍翔中藥飲片有限公司）；其他試劑均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

本實(shí)驗(yàn)采用Diamonsi（TM） C18（4.6mm×250mm，5？滋m）色譜柱；流動(dòng)相為甲醇：水：冰醋酸=42：58：0.5；檢測(cè)波長(zhǎng)為288nm；每次進(jìn)樣量20？滋L；流速：0.8mL/min；理論板數(shù)按水飛薊賓峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。取對(duì)照品溶液及供試品溶液在該色譜條件下分別各進(jìn)樣20？L，記錄色譜。詳見圖1、圖2。由圖可知，水飛薊賓與其它組分分離良好。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取水飛薊賓對(duì)照品50mg（精確至0.01mg），置于500mL容量瓶中，加甲醇制成每1mL含500？滋g的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

精確稱取水飛薊黃酮類物質(zhì)提取物50mg（精確至0.01mg），置50mL容量瓶中，用甲醇溶解，超聲處理30min。冷卻后，加甲醇稀釋至刻度，搖勻并濾過(guò)。精確量取5mL，置50mL容量瓶中，加入流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻備用。

2.3 線性關(guān)系考察

精確量取水飛薊賓對(duì)照品溶液1.0，2.0，4.0，8.0，10.0，12.0，14.0，16.0

mL，分別置50mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。各精密量取20？滋L，分別注入高效液相色譜儀，以水飛薊賓峰面積為縱坐標(biāo)，以水飛薊賓濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸處理。結(jié)果說(shuō)明，水飛薊賓在2.12～64.36？滋g范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系?；貧w方程是y=41676X+178737，R2=0.9984。

2.4 精密度試驗(yàn)

取水飛薊賓濃度約為20？滋g/mL的對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，RSD=0.84%，結(jié)果說(shuō)明該法精密度良好。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取樣品，按供試品溶液制備方法制成6份，照水飛薊賓方法測(cè)定含量， RSD=1.33%，結(jié)果說(shuō)明該法重現(xiàn)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取濃度約為50？滋g/mL的水飛薊賓對(duì)照品液適量，每隔2h進(jìn)行測(cè)定一次，共進(jìn)行6次，測(cè)定峰面積，RSD=0.21%，結(jié)果說(shuō)明本品12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品（水飛薊提取物：含水飛薊賓34.16%，批號(hào)為131026）適量（約相當(dāng)于水飛薊賓2.5mg）共6份，精密加入對(duì)照品水飛薊賓2.5mg，置250mL量瓶中，按供試品溶液的制備方法制備，按上述色譜條件測(cè)定。計(jì)算水飛薊黃酮類提取物中水飛薊賓的含量及回收率。平均回收率為101.0%，RSD=1.5%，結(jié)果表明該法具有良好回收率。

3 結(jié)束語(yǔ)

該實(shí)驗(yàn)中通過(guò)線性關(guān)系考察制定回歸方程，得出水飛薊中水飛薊賓含量測(cè)定的計(jì)算方法，并進(jìn)行了精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性和加樣回收率試驗(yàn)。精密度試驗(yàn)中6次重復(fù)測(cè)定按對(duì)照品溶液峰面積計(jì)算RSD=0.15%，結(jié)果說(shuō)明，精密度良好；6次穩(wěn)定性試驗(yàn)按對(duì)照品溶液峰面積計(jì)算，RSD=0.15%，結(jié)果說(shuō)明，12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好；6次重現(xiàn)性試驗(yàn)，RSD=1.33%，結(jié)果說(shuō)明，重現(xiàn)性良好。最終結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于水飛薊提取物中水飛薊賓的含量測(cè)定方法。

參考文獻(xiàn)

[1]張淑麗，楊世海，張海 .水飛薊有效成分及其提取方法研究進(jìn)展[J].人參研究，2012（4）.

[2]董巖，孔春燕.水飛薊有效成分的提取研究[J].中成藥，2010（7）.

[3]劉洪玲.水飛薊素的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2008（7）.

[4]張立海，慈慧.水飛薊素保肝的藥理作用及臨床應(yīng)用[J].首都醫(yī)藥，2012（8）.

[5]周采菊，黃華瑞.HPLC法測(cè)定水飛薊素及制劑中水飛薊賓的含量[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2008，9（3）.

[6]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：76.