間接免疫熒光法與印跡法檢測(cè)抗核抗體的相關(guān)性研究

易 萍

（開平市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東開平529300）

間接免疫熒光法與印跡法檢測(cè)抗核抗體的相關(guān)性研究

易 萍

（開平市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東開平529300）

抗核抗體（antinuclear antibody，ANA）是以是非特異性自身抗體的總稱，分布于人體的各種體液中，如血清、組織液、尿液、胸水等［1］，用于自身免疫性疾病的診斷、鑒別、療效的評(píng)價(jià)、預(yù)后等環(huán)節(jié)有十余年，自身免疫性疾病是一種病理性的免疫應(yīng)答，表現(xiàn)為自身組織器官等功能障礙［2］。對(duì)于ANA的檢測(cè)，有條帶酶聯(lián)免疫分析法、免疫擴(kuò)散、免疫印跡法、懸浮微陣列及抗原芯片多種方法［3，4］，臨床常用的主要有兩種方法，即間接免疫熒光法（IIF）與印跡法（LIA）。間接免疫熒光法（IIF）檢測(cè)ANA，而印跡法（LIA）檢測(cè)ANA譜。在臨床應(yīng)用這兩種方法檢測(cè)抗核抗體時(shí)，二者的結(jié)果有時(shí)并不完全一致［5］。因此，為研究間接免疫熒光法與印跡法檢測(cè)抗核抗體的診斷效果，探討兩種方法檢測(cè)抗核抗體的一致性及相關(guān)性，以期為臨床自身免疫性疾病的診療提供借鑒，現(xiàn)將研究內(nèi)容報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 選取在2013年10月到2014年7月我院風(fēng)濕科住院及門診疑診為自身免疫性疾病的患者127名為研究對(duì)象，采用間接免疫熒光法與印跡法檢測(cè)抗核抗體，如SLE、RA、干燥綜合征SS、SSc、PM／DM等。

1.2 診斷方法 IIF檢測(cè)ANA，試劑為ANA HEP－2IgG IFA診斷試劑盒（由美國SCIMEDX CORPORATION公司生產(chǎn)），LIA法檢測(cè)抗核抗體譜試劑盒（由蘇州浩歐博生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)），于硝化纖維素膜包被的特異性抗體包括：dsDNA抗體、SmDl抗體、核小體抗體、組蛋白抗體、核糖體P蛋白抗體、UlsnRNP抗體、SSA／60kD抗體、SSB抗體、SSA／52kD抗體、抗著絲點(diǎn)抗體、Scl－70抗體、Jo－1抗體。

1.3 設(shè)備 熒光顯微鏡采用BH2.RFL.3T（日本Olympus），ANA譜蛋白檢測(cè)儀購自上海華諾公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（±s）表示，計(jì)數(shù)資料用（n）或（%）表示，分別采用t檢驗(yàn)與卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測(cè)抗核抗體的結(jié)果比較 通過檢測(cè)結(jié)合臨床表現(xiàn)，127名疑自身免疫性疾病患者最終確診為自身免疫性疾病有96例，排除自身免疫疾病有23例，其余8例為可疑，需日后跟蹤觀察病例。96例確診病例中，IIF檢出陽性88例，LIA檢出陽性81例。一致性76.0%（73／96）。IIF檢測(cè)ANA的陽性率高于LIA檢測(cè)ANA譜的陽性率，但差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝2.13，P＞0.05）。見表1。

表1 兩種方法檢測(cè)抗核抗體的結(jié)果分析

2.2 特異性診斷價(jià)值 印跡法LIA檢測(cè)檢測(cè)出的不同類別的特異性ANA陽性率分布見表2。

表2 LIA檢測(cè)ANA特異性ANA分布情況

3 討論

IIF法檢測(cè)ANA一直被視為AID診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，能夠?qū)?xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞周期、細(xì)胞骨架等進(jìn)行檢測(cè)，且具有檢測(cè)操作方便、檢測(cè)范圍廣的特點(diǎn)［6，7］。設(shè)定陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)（IIF－ANA滴度：1∶160）已被眾多實(shí)驗(yàn)室所認(rèn)同，對(duì)AID臨床診斷有一定的意義［8］。缺點(diǎn)在于診斷特異性較低，由于大多數(shù)AID患者在IIF檢測(cè)中，血清中可見不同熒光染色模型的重疊，表現(xiàn)出較弱的陽性跡象，容易造成診斷的誤判［9］。LIA相對(duì)而言靈敏度、特異度更高，可能與反應(yīng)膜條上平行包被多種高度純化、重組抗原物質(zhì)有關(guān)，判讀會(huì)更加方便，且能夠同時(shí)檢測(cè)多種AID相關(guān)特異性自身抗體［10］。

本文研究中，96例確診病例中，IIF檢出陽性88例，LIA檢出陽性81例。兩種檢測(cè)方法表現(xiàn)出較高的一致性76.0%（73／96）。盡管IIF檢測(cè)ANA的陽性率高于LIA檢測(cè)ANA譜的陽性率，但I(xiàn)IF檢測(cè)方法與LIA檢測(cè)方法陽性檢出率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)于疾病判斷價(jià)值比較，ANA譜優(yōu)于ANA。IIF法檢測(cè)ANA是提高陽性檢測(cè)率的重要方法，但缺乏特異性，LIA法檢測(cè)ANA則是確診AID的重要指標(biāo)。：IIF檢測(cè)過程中采用Hept－2細(xì)胞抗原底物，由于存在分布不均的情況，可能會(huì)造成部分特異性抗體的漏檢誤檢現(xiàn)象。

對(duì)于疾病判斷價(jià)值比較，采用IIF檢測(cè)優(yōu)于LIA檢測(cè)，臨床檢測(cè)中建議采取聯(lián)合應(yīng)用的方式，以提高疾病的診斷率。

［1］高仕萍，楊文勇，資云菊，等.抗核抗體和抗核抗體譜聯(lián)合在自身免疫性疾病診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11（2）：222.

［2］張鐵漢，趙永新，鄭 輝，等.免疫印跡法與間接免疫熒光法檢測(cè)抗核抗體對(duì)照分析［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2008，8（4）：568.

［3］馬作新，廉 娜，鄭 立.3種檢測(cè)方法在診斷自身免疫性疾病中的價(jià)值［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，31（6）：540－541，543.

［4］張道強(qiáng)，隋秀梅，林榮海，等.抗核抗體間接免疫熒光法檢測(cè)結(jié)果與抗核抗體譜免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比分析［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，31（11）：1212－1214，1217.

［5］何 蕊，徐蘭峰，宋秀軍，等.抗核抗體譜檢測(cè)的臨床診斷意義［J］.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2011，27（9）：1017.

［6］夏 勇，李齊光，唐希才，等.間接免疫熒光法與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)抗核抗體對(duì)比分析［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（13）：2449.

［7］田 巧.間接免疫熒光法檢測(cè)抗核抗體與免疫印跡法檢測(cè)抗核抗體譜結(jié)果分析［J］.中國社區(qū)醫(yī)師（醫(yī)學(xué)專業(yè)），2013，15（2）：217.

［8］蘇 榮，唐秀英，張玉蓉，等.間接免疫熒光法檢測(cè)抗核抗體的性能驗(yàn)證［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2013，35（2）：147.

［9］曾燕坤，吳 杰.抗核抗體、抗核抗體譜及抗雙鏈DNA抗體的聯(lián)合檢測(cè)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷價(jià)值［J］.醫(yī)學(xué)臨床研究，2014，31（11）：2081.

［10］秦 雪，陶 瑕，陳志堅(jiān)，等.間接免疫熒光法與ELISA檢測(cè)抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體的比對(duì)分析［J］.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，29（3）：472.

易萍（1976－），女，主管檢驗(yàn)師，研究方向：免疫檢驗(yàn)。

2014－08－06）

1007－4287（2015）06－0981－02