鄧洪均(重慶市渝北區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科 401147)

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·論 著·

住院患者分離的紋帶棒狀桿菌耐藥性及同源性研究

鄧洪均(重慶市渝北區(qū)中醫(yī)院檢驗(yàn)科 401147)

目的 分析研究住院患者分離的紋帶棒狀桿菌耐藥性及同源性。方法 選取于2013年10月至2014年4月在該院住院患者58例，對(duì)患者不同部位分離的紋帶棒狀桿菌58株，采用肉湯微量稀釋法對(duì)患者進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)，對(duì)紋帶棒狀桿菌陽性患者的周邊環(huán)境采用鹽水棉拭子法進(jìn)行采樣，對(duì)分離的紋帶棒狀桿菌進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)；對(duì)58株紋帶棒狀桿菌采用脈沖場(chǎng)凝膠電泳法(PFGE)進(jìn)行分子分型。結(jié)果 紋帶棒狀桿菌聚集分布于2013年12月至2014年3月。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，四環(huán)素、紅霉素、克林霉素、環(huán)丙沙星和青霉素這5種抗菌藥物的最小抑菌濃度(MIC)≥64 μg/mL；萬古霉素、利福平和慶大霉素的MIC均為0.5 μg/mL；只有1株分離的紋帶棒狀桿菌對(duì)除克林霉素之外的所用抗菌藥物全部敏感。PFGE分型結(jié)果顯示，50株紋帶棒狀桿菌共分為7個(gè)不同基因型，其中0002型和0006型這兩種基因型為優(yōu)勢(shì)型。從同期住院的同一病房患者身上分離出的紋帶棒狀桿菌同源性高。環(huán)境采樣結(jié)果顯示，紋帶棒狀桿菌分離陽性率達(dá)43.48%(10/23)。結(jié)論 住院患者分離紋帶棒狀桿菌呈多重耐藥性，且從不同患者身上分離出的菌株同源性極高。

棒狀桿菌屬； 耐藥性； 同源性； 分子分型

棒狀桿菌屬是因?yàn)槠渚w一端或者兩端膨大，類似棒狀而得名，它屬于無芽孢的革蘭陽性桿菌[1]。棒狀桿菌大多數(shù)是致病菌，容易在機(jī)體抵抗力低下時(shí)引發(fā)機(jī)體感染。近年來，抗菌藥物大量運(yùn)用于臨床，甚至出現(xiàn)濫用抗菌類藥物狀況，導(dǎo)致細(xì)菌出現(xiàn)耐藥性或多重耐藥性，大大增加了臨床治療的困難度[2]。據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，紋帶棒狀桿菌能夠在醫(yī)院傳播，尤其對(duì)于長期住院患者，該病菌滋生速度極快。本文旨在研究住院患者分離的紋帶棒狀桿菌耐藥性及同源性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取于2013年10月至2014年4月在本院住院的患者58例，其中男30例，女28例，年齡18～85歲、平均年齡(54.3±2.5)歲，住院5～35 d、平均住院(9.1±2.1)d。

1.2 儀器與試劑 采用VITEK2全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定，鑒定卡選用厭氧菌-棒狀桿菌鑒定卡；采用天津金章有限公司的氧化發(fā)酵管進(jìn)行氧化發(fā)酵試驗(yàn)；選用ATCC經(jīng)黃色葡萄球菌進(jìn)行協(xié)同溶血試驗(yàn)；血瓊脂平板以及藥敏試驗(yàn)板均選自天津金章有限公司；選用美國bio-rad公司的脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)系統(tǒng)；添加2.5%～5.0%溶解的馬血進(jìn)肉湯，根據(jù)Plassmeier等[3]研究選擇如下8種抗菌藥物：四環(huán)素、紅霉素、克林霉素、環(huán)丙沙星、青霉素、萬古霉素、利福平和慶大霉素，對(duì)紋帶棒狀桿菌陽性患者的周邊環(huán)境采用鹽水棉拭子法進(jìn)行采樣。

1.3 體外藥敏試驗(yàn) 在血瓊脂平板上對(duì)分離出來的紋帶棒狀桿菌進(jìn)行傳代培養(yǎng)。采用肉湯微量稀釋法對(duì)所有菌株的最小抑菌濃度(MIC)值進(jìn)行測(cè)定。按梯度將8種抗菌藥物分布于96孔板中[4]，對(duì)四環(huán)素、紅霉素、環(huán)丙沙星、青霉素、萬古霉素、利福平和慶大霉素設(shè)置8個(gè)梯度濃度；對(duì)克林霉素設(shè)置7個(gè)梯度濃度。最高濃度均為64 μg/mL，最低濃度為0.5 μg/mL。另外設(shè)置一個(gè)不含任何抗菌藥物的空白生長孔。以肺炎鏈球菌ATCC49619為質(zhì)控菌株。藥敏平板溫度控制在35 ℃，培養(yǎng)24～48 h。觀察試驗(yàn)結(jié)果。

1.4 分子分型 制備好菌懸液和膠塊，進(jìn)行細(xì)胞裂解，做好膠塊內(nèi)DNA的酶切，再進(jìn)行電泳，電泳時(shí)長為19 h，完畢后，用0.1 μg/mL EB液染色30 min，純水脫色20 min。用凝膠成像儀成像，每塊膠塊上的DNA均用ATCC33591菌株以及相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，方便對(duì)比。

1.5 聚類分析 采用第5版BioNumerics軟件處理膠塊間圖像的對(duì)比。采用1.5%的條帶差異容許度。菌株間相似性系數(shù)大于90%則歸為一類。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本次研究采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 菌株分布情況 對(duì)患者不同部位分離的紋帶棒狀桿菌58株，其中12株從重癥病房患者身上分離，15株從精神外科患者身上分離，5株從精神內(nèi)科患者身上分離，14株從呼吸內(nèi)科患者身上分離，7株從普通外科病房患者身上分離，3株從泌尿內(nèi)科患者身上分離，2株從口腔科患者身上分離。58株分離的紋帶棒狀桿菌標(biāo)本中有41株下呼吸道標(biāo)本，5株膿液標(biāo)本，7株尿液標(biāo)本和5株腦脊液標(biāo)本。58例患者在分離紋帶棒狀桿菌前正在使用不少于1種抗菌藥物，使用頻率最高的是β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物，其次是喹諾酮類抗菌藥物。2013年10月紋帶棒狀桿菌有2株，2013年11月有3株，2013年12月有15株，2014年1月有12株，2014年2月有11株，2014年3月有13株，2014年4月有2株。紋帶棒狀桿菌主要集中分布于2013年12月至2014年3月。

2.2 細(xì)菌鑒定結(jié)果 氧發(fā)酵試驗(yàn)檢驗(yàn)紋帶棒狀桿菌的氧化型為100%。本組58株菌中有57株CAMP為陽性，占98.27%。VITEK-2鑒定率達(dá)到94%，Bionumber為7323120600001，與其他棒狀桿菌無重碼。

2.3 體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果 四環(huán)素、紅霉素、克林霉素、環(huán)丙沙星和青霉素這5種抗菌藥物的MIC≥64 μg/mL；萬古霉素、利福平和慶大霉素的MIC均為0.5 μg/mL；只有1株分離的紋帶棒狀桿菌對(duì)除克林霉素之外的所用抗菌藥物全部敏感。詳見表1。

2.4 耐藥性分析 根據(jù)脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型結(jié)果，按90%相似度進(jìn)行劃分，58株菌共有7個(gè)不同基因型，每種不同的基因型菌株都具有一定的耐藥性。其中0002型(除C13和C14之外)為優(yōu)勢(shì)耐藥型，耐藥型與0001型、0003型和0004型以及除C9和C8之外的0006型、0007型耐藥型相同。在0002型中，優(yōu)勢(shì)耐藥型C4和C13、C14的主要區(qū)別為青霉素敏感以及慶大霉素敏感。在0006型中，C9 和C1菌株的差異為紅霉素、青霉素、環(huán)丙沙星以及四環(huán)素敏感。C18和C1菌株的差異在于慶大霉素耐藥。詳見表2。

2.5 環(huán)境采樣結(jié)果 菌株集中出現(xiàn)在呼吸內(nèi)科病房、神經(jīng)外科病房以及重癥監(jiān)護(hù)病房。根據(jù)23份有效環(huán)境標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果，紋帶棒狀桿菌分離率達(dá)43.48%(10/23)。對(duì)2個(gè)疑似紋帶棒狀桿菌菌落進(jìn)行進(jìn)一步鑒定，并進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)20株環(huán)境標(biāo)本分離出的紋帶棒狀桿菌中有17株(85%)和從相應(yīng)的患者身上分離出的菌株耐藥型相同。

表1 58株紋帶棒狀桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果(μg/mL)

表2 不同PFGE型紋帶棒狀桿菌MIC值分析(ng/mL)

3 討 論

紋帶棒狀桿菌能夠在醫(yī)院內(nèi)通過異體傳播，引發(fā)患者傷口、呼吸道等部位感染。但由于棒狀桿菌生長較緩慢，臨床中往往忽視其危害性。然而不斷有研究表明紋帶棒狀桿菌在醫(yī)院傳播能力強(qiáng)，而且具有多重耐藥性[5]。臨床上正確對(duì)待并重視紋帶棒狀桿菌的特征，有利于更好地防止其滋生，降低其耐藥性[6]。

本組研究中，紋帶棒狀桿菌在一定的時(shí)間段集中分布，且分布地點(diǎn)也較集中。根據(jù)PFGE分型顯示，同期住院的同一病房患者身上分離出的紋帶棒狀桿菌同源性高，存在交叉感染的可能。而且，根據(jù)環(huán)境采樣結(jié)果顯示，環(huán)境標(biāo)本中紋帶棒狀桿菌陽性率為43.48%，其耐藥型和從相應(yīng)的患者身上分離出的菌株耐藥型相同。這表明紋帶棒狀桿菌在醫(yī)院的傳播能力較強(qiáng)，然而，臨床上對(duì)其傳播機(jī)制尚不清楚[7]。

這需要臨床上對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步研究。

綜上所述，住院患者分離紋帶棒狀桿菌呈多重耐藥性，且從不同患者身上分離出的菌株同源性極高，臨床上應(yīng)對(duì)紋帶棒狀桿菌高度重視，分析其對(duì)臨床用藥的影響。

[1]王俊瑞,杜小莉,崔晶花，等.住院患者分離紋帶棒狀桿菌耐藥性及同源性分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2014,100(32):2501-2505.

[2]李瑋,張正.66株棒狀桿菌臨床分離株的鑒定及其藥物敏感性分析[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2007,11(7):932-936.

[3]Plassmeier JK,Busche T,Molck S，et al.A propionate-inducible expression system based on the Corynebacterium glutamicum prpD2 promoter and PrpR activator and its application for the redirection of amino acid biosynthesis pathways[J].J Biol,2013,163(2):225-232.

[4]陳東科,許宏濤,胡付品，等.紋帶棒桿菌醫(yī)院內(nèi)感染狀況分析[J].中華流行病學(xué)雜志,2013,34(9):947-948.

[5]蘇瑞蕊.棒狀桿菌細(xì)胞壁中的主要成分的合成過程[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(7):853-855.

[6]Brune I,Goetker S,Schneider J，et al.Negative transcriptional control of biotin metabolism genes by the TetR-type regulator BioQ in biotin-auxotrophic Corynebacterium glutamicum ATCC 13032[J].J Biol,2012,159(3):225-234.

[7]謝愛香.棒狀桿菌臨床分離株藥物敏感性及同源性分析[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(7):782-783.

Study on drug resistance and homology of Corynebacterium striatum isolated from inpatients

DENGHong-jun

(DepartmentofClinicalLaboratory,YubeiDistrictHospitalofTraditionalChineseMedicine,Chongqing401147,China)

Objective To analyze the drug resistance and homology of Corynebacterium striatum isolated from inpatients.Methods 58 inpatients in our hospital from 2013 October to 2014 April were selected.58 strains Corynebacterium striatum were isolated from different parts.The in vitro drug susceptibility test was performed by using the broth microdilution method.The surround environment in the patients with Corynebacterium striatum positive were sampled by saline cotton swab.The isolated Corynebacterium striatum was performed the in vitro drug susceptibility test;58 strains of Corynebacterium striatum were performed the molecular typing by using the pulsed field gel electrophoresis (PFGE).Results Corynebacterium striatum aggregation was distributed in December 2013,January,February and March 2014.The results of drug susceptibility test showed that the minimal inhibitory concentrations(MIC) of the 5 kinds of antibacterial drugs,tetracycline,erythromycin,clindamycin,ciprofloxacin and penicillin,were more than or equal to 64 μg/mL;MIC of vancomycin,rifampicin and gentamicin all were 0.5 μg/mL;only 1 isolated strain of Corynebacterium striatum was sensitive to all antibacterial drugs except for clindamycin.The pulsed field gel electrophoresis typing results showed that 50 strains of Corynebacterium striatum were divided into 7 different genotypes,in which 0002 genotype and 0006 genotype were predominant type.Corynebacterium striatum isolated from the patients in the same ward during the corresponding period had high homology.The environmental sampling results showed that the isolation positive rate of Corynebacterium striatum reached 43.48%(10/23).Conclusion Corynebacterium striatum isolated from inpatients presents multi-drug resistance,and which isolated from different in patients has extremely high homology.

Corynebacterium; drug resistance; homology; molecular typing

鄧洪均，女，專科，主管檢驗(yàn)師，主要從事臨床微生物研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.18.037

A

1672-9455(2015)18-2741-02

2015-03-17

2015-04-19)