幾種殺菌劑對(duì)番茄青枯病菌的毒力測(cè)定及田間藥效

王梅+尹顯慧+龍友華+吳小毛+楊再福+田雪蓮+李靜

摘要：為了篩選出有效防治番茄青枯病的藥劑，采用抑菌圈法測(cè)定10種殺菌劑對(duì)番茄青枯病菌的抑制作用，并選擇其中防效較好的4種藥劑進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)。結(jié)果表明：3%中生菌素可濕性粉劑、0.5%氨基寡糖素水劑、72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可濕性粉劑、0.1億CFU/g多黏類芽孢桿菌細(xì)粒劑對(duì)青枯病菌的抑菌效果好，其EC50值分別為 1.308 mg/L、2.180 mg/L、5.202 mg/L、0.071億CFU/L;3%中生菌素可濕性粉劑 800倍液對(duì)番茄青枯病的防效最好，達(dá)90.53%，其次為0.5%氨基寡糖素水劑400倍液，防效為79.24%。

關(guān)鍵詞：化學(xué)殺菌劑;生物殺菌劑;番茄青枯病;抑菌效果;EC50;毒力測(cè)定;田間藥效

中圖分類號(hào)： S482.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2015）04-0151-03

收稿日期：2014-05-14

基金項(xiàng)目：貴州省農(nóng)業(yè)攻關(guān)（編號(hào)：黔科合NY字[2010]3066、黔科合NY字[2012]3010、黔科合NY字[2014]3034）。

作者簡(jiǎn)介：王 梅（1989—），女，貴州甕安人，碩士研究生，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究。E-mail： 421036605@qq.com。

通信作者：尹顯慧，博士，副教授，主要從事有害生物綠色防控及農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究。E-mail： agr.xhyin@gzu.edu.cn。

番茄是貴州省主要蔬菜栽培品種，種植面積（含復(fù)種）達(dá)1.33萬(wàn)hm2以上，當(dāng)前各種番茄病害已成為貴州省番茄產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。番茄青枯病是一種由茄科勞爾氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的世界范圍的毀滅性土傳細(xì)菌病害，高溫、高濕環(huán)境下，病原細(xì)菌經(jīng)土傳由根部傷口侵入寄主[1]。一般連種3～5年番茄，該病害就會(huì)嚴(yán)重發(fā)生。發(fā)病初期，植株上部葉片葉柄出現(xiàn)下垂，以后葉片漸次枯萎，同時(shí)莖部出現(xiàn)不定根，植株快速萎蔫并逐漸枯死[2]。該病害一旦發(fā)生就難以控制，往往造成作物大面積萎蔫死亡甚至絕收，導(dǎo)致番茄產(chǎn)量嚴(yán)重下降，嚴(yán)重制約著番茄產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和經(jīng)濟(jì)效益的提高[3-4]。筆者通過(guò)3年調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在貴州省獨(dú)山縣、關(guān)嶺縣、修文縣、清鎮(zhèn)市、貴陽(yáng)市白云區(qū)等番茄主產(chǎn)區(qū)，番茄青枯病發(fā)生普遍，而且有逐年加重的趨勢(shì)。目前，該病的防治仍然是世界難題，生產(chǎn)上使用的防治藥劑主要為農(nóng)用鏈霉素、新植霉素、硫酸銅等，因使用多年，防效不理想。本研究通過(guò)測(cè)定10種殺菌劑對(duì)青枯病病菌的室內(nèi)毒力，并對(duì)其中抑菌效果較好的4種殺菌劑開(kāi)展田間藥效試驗(yàn)，以期篩選出可用于番茄青枯病防治的農(nóng)藥品種，從而增加青枯病防治藥劑的選擇性。

1 材料與方法

1.1 病原菌分離純化

在修文縣番茄青枯病重發(fā)田采集番茄青枯病病株的地上莖稈部位，在室內(nèi)用NA培養(yǎng)基分離純化鑒定，采取柯赫氏法則測(cè)定菌落致病性，挑選出具有較強(qiáng)致病性的菌落保存于 4 ℃ 冰箱中備用。

1.2 供試藥劑

選取3種已登記用于青枯病防治的藥劑和7種未登記藥劑（表1）。

1.3 10種殺菌劑對(duì)番茄青枯病菌室內(nèi)毒力測(cè)定

采用改進(jìn)抑菌圈法[5-6]，用微量加樣器吸取 1億CFU/mL 細(xì)菌懸液1 mL至直徑為9 cm的培養(yǎng)皿上，倒入冷卻溶化的9 mL NA瓊脂的固體培養(yǎng)基混勻凝固。用打孔器將濾紙打成直徑為5 mm的圓片，分別浸入含系列濃度的藥液里，移到平板上，等距放置，每個(gè)處理3皿，每皿3片，設(shè)無(wú)菌水為對(duì)照。將培養(yǎng)皿置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱里培養(yǎng) 36 h 后，用十字交叉法測(cè)量抑菌圈直徑，然后運(yùn)用農(nóng)藥室內(nèi)

表1 供試藥劑

登記情況 藥劑名稱 生產(chǎn)廠家

已登記 0.1億CFU/g多黏類芽孢桿菌細(xì)粒劑 上海澤元海洋生物技術(shù)有限公司

20%噻森銅懸浮劑 浙江東風(fēng)化工有限公司

3%中生菌素可濕性粉劑 廣東省東莞市瑞德豐生物科技有限公司

未登記 72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可濕性粉劑 北京中農(nóng)弘露科技發(fā)展有限公司

20%葉枯唑可濕性粉劑 沙星達(dá)隆有限公司

80%代森錳鋅可濕性粉劑 先正達(dá)作物保護(hù)有限公司

50%喹啉銅可濕性粉劑 浙江海正化工股份有限公司

0.5%氨基寡糖素水劑 貴州道元生物技術(shù)有限公司

1.5%噻霉酮濃乳劑 陜西西大華特科技實(shí)業(yè)有限公司

57.6%氫氧化銅干粒劑 澳大利亞新農(nóng)有限公司

生物測(cè)定數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件[7]算出各種殺菌劑對(duì)番茄青枯病病菌的抑制濃度EC50及其95%置信區(qū)間、相關(guān)系數(shù)（r）。

1.4 4種殺菌劑對(duì)番茄青枯病田間藥效試驗(yàn)

2013年開(kāi)展4種殺菌劑對(duì)番茄青枯病田間藥效試驗(yàn)。試驗(yàn)地點(diǎn)在修文縣農(nóng)場(chǎng)鎮(zhèn)建新村農(nóng)戶的露地番茄田里，面積 1 332 m2，土質(zhì)為潮泥田，肥力水平中等，試驗(yàn)地多年種植番茄，前茬為青枯病重發(fā)地。番茄品種為鴻福8號(hào)，在2013年5月12日播種，6月5日移栽，株行距為56 cm×65 cm，29 070株/hm2。試驗(yàn)設(shè)3%中生菌素可濕性粉劑800倍液、0.5%氨基寡糖素水劑 400倍液、72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可濕性粉劑1 000倍液、0.1億CFU/g多黏類芽孢桿菌細(xì)粒劑 300倍液、清水對(duì)照等5個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，每小區(qū)面積 25 m2，隨機(jī)區(qū)組排列。

分別于6月12日、6月19日、7月9日、7月24日灌根，每株每次灌根藥液量為0.25 kg。第1次施藥時(shí)全田均未有病害發(fā)生，于第4次灌根后7 d（7月31日）、15 d（8月8日）調(diào)查各小區(qū)內(nèi)全部植株發(fā)病情況，觀察各小區(qū)植株長(zhǎng)勢(shì)。計(jì)算病株率和防治效果。用DPS 2000數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行分析和差異顯著性檢驗(yàn)（Duncans新復(fù)極差法）。endprint

病株率=病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)×100%;

防治效果=（對(duì)照區(qū)病株率-處理區(qū)病株率）/對(duì)照區(qū)病株率×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑對(duì)青枯病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

2.1.1 番茄青枯病病原物 鏡檢可見(jiàn)，菌體為短桿狀單細(xì)胞，單生或雙生，兩端圓，極生1～2根鞭毛。在瓊脂培養(yǎng)基上菌落為圓形或不規(guī)則，外緣為白色，中央為淡粉紅色，革蘭氏染色為陰性。

2.1.2 供試殺菌劑對(duì)青枯病菌的EC50比較 從表2可以看出，除0.1億CFU/g多黏類芽孢桿菌細(xì)粒劑以外，在其他供試殺菌劑（6種化學(xué)藥劑和4種生物制劑）中，已登記的3種殺菌劑的EC50值普遍比未登記的7種殺菌劑的EC50值低，而且生物殺菌劑的抑菌效果均好于化學(xué)藥劑。其中以3%中生菌素可濕性粉劑對(duì)番茄青枯病菌的抑菌效果最好，EC50值為1.308 mg/L;未登記的殺菌劑中，0.5%氨基寡糖素水劑是D-氨基葡萄糖以β-1，4糖苷鍵連接的低聚糖，可誘導(dǎo)植物的抗病性[8]，其EC50值稍高于3%中生菌素可濕性粉劑的EC50值，低于20%噻森銅懸浮劑的EC50值，對(duì)番茄青枯病菌的抑制作用顯著;同時(shí)，在未登記的殺菌劑中，72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可濕性粉劑的抑菌效果良好，優(yōu)于已登記的殺菌劑20%噻森銅懸浮劑;0.1億CFU/g多黏類芽孢桿菌細(xì)粒劑是活體細(xì)菌類微生物殺菌劑，其EC50值為0.071億CFU/L。

表2 不同殺菌劑對(duì)番茄青枯病菌的毒力測(cè)定結(jié)果

是否登記 供試殺菌劑 毒力回歸方程 EC50

（mg/L） EC50的95%置信區(qū)間

（mg/L） 相關(guān)系數(shù)

（r）

已登記 3%中生菌素可濕性粉劑 y=3.940+0.949x 1.308 0.673～7.444 0.991

20%噻森銅懸浮劑 y=0.268+2.219x 20.454 18.565 1～24.354 0.988

0.1億CFU/g多黏類芽孢桿菌細(xì)粒劑 y=1.324+3.819x 0.071* 0.018～0.562 0.930

未登記 0.5%氨基寡糖素水劑 y=2.424+1.748x 2.180 1.851～4.130 0.982

72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可濕性粉劑 y=0.824+2.433x 5.202 4.166～7.418 0.992

53%喹啉銅可濕性粉劑 y=0.986+1.107x 42.114 30.470～51.500 0.994

20%葉枯唑可濕性粉劑 y=1.676+1.224x 51.959 5.471～493.455 0.920

1.5%噻霉酮濃乳劑 y=1.176+1.259x 108.988 118.542～1 002.038 0.969

57.6%氫氧化銅干粒劑 y=1.324+1.119x 120.879 114.653～1 125.654 0.975

80%代森錳鋅可濕性粉劑 y=0.413+1.186x 745.601 118.962～4 673.097 0.924

注：標(biāo)注“*”數(shù)字的單位為億CFU/L。

2.2 供試殺菌劑對(duì)番茄青枯病的田間藥效

所有藥劑處理在試驗(yàn)期間對(duì)番茄無(wú)藥害現(xiàn)象。從表3可以看出，4種藥劑按常規(guī)推薦濃度灌根處理對(duì)番茄青枯病均具有良好的防治效果，防治效果是59.29%～90.54%。其中采用3%中生菌素可濕性粉劑 800倍液在番茄移栽后灌根4次，對(duì)番茄青枯病具有理想的防治效果，第4次灌根后7 d（移栽后56 d）和15 d（移栽后64 d），平均防效分別高達(dá)9054%、85.20%，顯著優(yōu)于72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可濕性粉

表3 不同藥劑處理對(duì)番茄青枯病的防治效果

處理 數(shù)量

（株）

第4次藥后7 d 第4次藥后15 d

病株數(shù)

（株） 病株率

（%） 防效

（%） 病株數(shù)

（株） 病株率

（%） 防效

（%）

3%中生菌素可濕性粉劑800倍液 441 27 6.14 90.54a 48 10.84 85.20a

0.5%氨基寡糖素水劑400倍液 466 63 13.47 79.25ab 78 16.65 77.27a

72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可濕性粉劑1 000倍液 470 108 22.74 64.97bc 139 29.51 59.73b

0.1億CFU/g多黏類芽孢桿菌細(xì)粒劑300倍液 458 121 26.42 59.29c 123 26.85 63.34b

清水對(duì)照 436 283 64.94 — 319 73.27 —

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示在0.05水平差異顯著。

劑和0.1億CFU/g多黏類芽孢桿菌細(xì)粒劑的防效;0.5%氨基寡糖素水劑防治效果較好，盡管第4次以400倍液灌根后7、15 d的防效分別比3%中生菌素可濕性粉劑的防效要低，但差異不顯著;盡管0.1億CFU/g多黏類芽孢桿菌細(xì)粒劑的防效與生產(chǎn)上常用藥劑72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可濕性粉劑的防效不顯著，但從表3可以看出第4次藥后15 d的防效要高于72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可濕性粉劑，因此0.1億CFU/g多黏類芽孢桿菌細(xì)粒劑的持效期要優(yōu)于72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可濕性粉劑。

3 結(jié)論與討論

目前在番茄青枯病上登記的殺菌劑為中生菌素、噻森銅、多黏類芽孢桿菌。國(guó)內(nèi)關(guān)于殺菌劑對(duì)青枯病菌毒力測(cè)定和田間防效的研究報(bào)道較少，主要集中在土壤改良和生物防治尤其是拮抗菌的研究[3，9]，2種方法雖對(duì)病害的發(fā)生起到一定的控制作用，但田間防效不夠理想。endprint

本研究選用生產(chǎn)上常用的10種殺菌劑測(cè)定其對(duì)番茄青枯病菌的室內(nèi)毒力，同時(shí)選取毒力較強(qiáng)的4種藥劑進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)。結(jié)果表明，已登記產(chǎn)品中生菌素對(duì)番茄青枯病菌的抑制作用和防效最好。中生菌素是一種農(nóng)用抗生素，對(duì)水稻白葉枯病、白菜軟腐病、柑橘潰瘍病等農(nóng)作物細(xì)菌性病害具有良好的防治效果，通過(guò)抑制病原細(xì)菌蛋白質(zhì)的肽鍵生成，最終導(dǎo)致細(xì)菌死亡，同時(shí)可刺激植物體內(nèi)植保素及木質(zhì)素的前體物質(zhì)的生成，從而提高植物的抗病能力[10]，因此中生菌素為番茄青枯病防治中的優(yōu)選。

另外登記產(chǎn)品中多黏類芽孢桿菌為細(xì)菌性活體生物制劑，其代謝產(chǎn)物中含有多種可利用的生物活性物質(zhì)，可以通過(guò)與病原菌在生態(tài)位競(jìng)爭(zhēng)生存空間和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)病害因素的解毒以及產(chǎn)生多種代謝產(chǎn)物達(dá)到抑制、殺死或溶解病原的作用，其對(duì)植物青枯病具有良好的防治效果已見(jiàn)諸報(bào)道[11]。本研究也發(fā)現(xiàn)多黏類芽孢桿菌的持效性比生產(chǎn)上常用藥劑農(nóng)用硫酸鏈霉素好。而病原菌對(duì)噻森銅已表現(xiàn)出中抗水平，應(yīng)引起重視，在生產(chǎn)中要注意交替用藥和限制用藥。

氨基寡糖素由幾丁質(zhì)降解得殼聚糖后再降解制得，或由微生物發(fā)酵提取的低毒殺菌劑，通過(guò)對(duì)植物細(xì)胞的作用，誘導(dǎo)植物體產(chǎn)生酚類化合物、木質(zhì)素、植保素、病程相關(guān)蛋白等抗病物質(zhì)，并提高與抗病代謝相關(guān)的防御酶和活性氧清除酶系統(tǒng)的活性，還可以溶解真菌、細(xì)菌等病原體細(xì)胞壁，干擾病毒RNA的合成，達(dá)到防治病害的目的[12]，對(duì)西瓜枯萎病、棉花黃萎病、番茄晚疫病、煙草病毒病、黃瓜白粉病、生菜立枯病、辣椒疫病等均有很好的防效[13]?？椎掠⒌葓?bào)道了氨基寡糖素對(duì)番茄青枯病具有良好的防治作用[4]，但還其沒(méi)有被登記為番茄青枯病的防治藥劑。本研究中番茄青枯病菌對(duì)氨基寡糖素表現(xiàn)敏感，田間防效與中生菌素差異不顯著，可以與中生菌素輪換使用。農(nóng)用硫酸鏈霉素對(duì)番茄青枯病的防效也相對(duì)較好，而且作為一種農(nóng)用抗生素，其作用機(jī)制與常用化學(xué)殺菌劑不同，因此可作為青枯病防治時(shí)交替用藥的選擇。

近年來(lái)，生防制劑作為有害生物綜合治理（integrated pest management，IPM）的重要組成部分，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。中生菌素、氨基寡糖素、多黏類芽孢桿菌、農(nóng)用硫酸鏈霉素均屬于生物殺菌劑，具有人畜安全，對(duì)自然環(huán)境安全、無(wú)污染，病原菌不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)，本研究中4種生物殺菌劑均對(duì)番茄青枯病表現(xiàn)出良好的防效，因此今后在修文地區(qū)防治番茄青枯病時(shí)，可交替施用4種藥劑，以保證番茄的綠色安全生產(chǎn)。

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