劉德華 秦海燕 胡大春 盧贊 任寶軍 王霞 尹麗民 錢凈

（昆明市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南 昆明 650211）

463株血培養(yǎng)陽性病原菌分布及耐藥分析

劉德華 秦海燕 胡大春 盧贊 任寶軍 王霞 尹麗民 錢凈

（昆明市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南 昆明 650211）

目的：分析我院2014年檢出的463株血培養(yǎng)陽性菌的分布及耐藥狀況。方法：回顧經(jīng)BD 9240和Bact/A l ert 3D 240血培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行培養(yǎng)，使用V i t ec2 com pact對(duì)分離菌株鑒定及藥敏試驗(yàn)。數(shù)據(jù)分析采用W honet 5.6軟件。結(jié)果：463株非重復(fù)分離菌中革蘭陰性菌286株（61.77%）；革蘭陽性菌156株（33.69%）；真菌21株（4.54%）。本研究共檢出金黃色葡萄球菌29株，其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（M RSA）7株（24.14%）；甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（M SSA）22株（75.86%）；凝固酶陰性葡萄球菌（CN S）92株，其中耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌（M RCN S）81株（88.04%），甲氧西林敏感凝固酶陰性葡萄球菌（M SCN S）11株（11.96%）。M SSA與M RSA在慶大霉素、利福平、萬古霉素、利奈唑胺、替考拉寧、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星耐藥率方面有差異（P＜ 0.05）。M RCN S與M SCN S在萬古霉素、利奈唑胺、替考拉寧、慶大霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、復(fù)方磺胺甲唑耐藥率方面有差異（P＜ 0.05）。屎腸球菌對(duì)青霉素耐藥率為90.9%，未檢出對(duì)萬古霉素耐藥的屎腸球菌。產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌占比52.59%。產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌占比40.32%。產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌菌株與非產(chǎn)ESBLs菌株在氨曲南、頭孢他啶、氯霉素、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢唑林及左氧氟沙星耐藥率方面有差異（P＜ 0.05）。產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌菌株與非產(chǎn)ESBLs菌株在氨曲南、頭孢他啶、氯霉素、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢唑林、左氧氟沙星、頭孢西丁及氨芐西林-舒巴坦耐藥率方面有差異（P＜ 0.05）。銅綠假單胞菌檢出3株泛耐藥菌株（15.78%），鮑曼不動(dòng)桿菌泛耐藥菌株4株（22.22%），沙門氏菌耐藥率均低于6.5%。結(jié)論：血培養(yǎng)陽性分離菌分布廣泛，不同病原菌間耐藥性亦不相同。應(yīng)加強(qiáng)對(duì)血培養(yǎng)病原菌分布和耐藥性的監(jiān)測(cè)。

血培養(yǎng)；病原菌分布；耐藥性

血流感染包括菌血癥和敗血癥，是致病菌或條件致病菌侵入血液中生長(zhǎng)繁殖并釋放毒素和代謝產(chǎn)物而引起的急性重癥感染性疾病，其發(fā)病率和致死率都較高。隨著各種血管留置導(dǎo)管技術(shù)的快速發(fā)展，各種侵襲性操作的推行、移植手術(shù)的開展以及臨床抗菌藥物的廣泛應(yīng)用和大量免疫受損宿主的出現(xiàn)，條件致病菌所致的血流感染有增長(zhǎng)的趨勢(shì)，對(duì)抗菌藥物的耐藥性也發(fā)生了變化。為此回顧我院2014年血培養(yǎng)陽性菌株分布及耐藥資料，旨在為臨床治療血流感染提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源

昆明市第一人民醫(yī)院2014年全年住院及門診患者送檢的血培養(yǎng)標(biāo)本中連續(xù)分離的不重復(fù)病原菌463株。

1.2 標(biāo)本采集與培養(yǎng)方法

參照《血培養(yǎng)檢測(cè)規(guī)范化操作》[1]進(jìn)行標(biāo)本的正確采集，并將其快速置于BD 9240或Bact/A l ert 3D 240血培養(yǎng)儀中進(jìn)行連續(xù)震蕩培養(yǎng)和檢測(cè)，儀器報(bào)警有陽性瓶時(shí)，取出后無菌操作抽取培養(yǎng)液立即革蘭染色作初級(jí)報(bào)告，并快速轉(zhuǎn)種血平板、巧克力平板、麥康凱平板等進(jìn)行五區(qū)劃線方式培養(yǎng)，待其菌落生長(zhǎng)良好備用。如7天儀器未報(bào)陽性，則盲種后觀察有無細(xì)菌生長(zhǎng)，若有細(xì)菌生長(zhǎng)，則進(jìn)一步做菌株鑒定。

1.3 儀器與試劑

血培養(yǎng)使用BD 9240和 Bact/A l ert 3D 240血培養(yǎng)儀，細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)使用V i t ec2 com pact。試劑使用與儀器配套的相應(yīng)培養(yǎng)基、鑒定卡。

1.4 質(zhì)控菌株

金黃色葡萄球菌A TCC25923，糞腸球菌A TCC 29212，大腸埃希菌 A TCC25922，肺炎克雷伯菌A TCC700603，銅綠假單胞菌 A TCC27853和白色念珠菌A TCC66027等由國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心提供。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

判斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)CLSI M 100-S24[2]，細(xì)菌菌譜及耐藥性分析采用W honet 5.6軟件和SPSS l 6.0軟件。針對(duì)抗菌藥的耐藥率差異，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（當(dāng)檢出菌株數(shù)小于40時(shí)用確切概率法計(jì)算概率），P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血培養(yǎng)陽性標(biāo)本菌株的分布及構(gòu)成

11 423份血培養(yǎng)標(biāo)本中陽性標(biāo)本 925份，陽性率8.10%，剔除重復(fù)菌株（雙瓶或多瓶培養(yǎng)出同一細(xì)菌），共檢出病原菌463株，其中革蘭陰性菌286株（61.77%）；革蘭陽性菌156株（33.69%）；真菌21株（4.54%）。463份陽性菌株數(shù)量排序依次為大腸埃希菌（135株，29.16%）、凝固酶陰性葡萄球菌（92株，19.87%）、肺炎克雷伯菌（62株，13.39%）、沙門氏菌（34株，7.34%）、金黃色葡萄球菌（29株，6.26%）、銅綠假單胞菌（19株，4.10%）、鮑曼不動(dòng)桿菌（18株，3.89%）、屎腸球菌（11株，2.38%）等。

2.2 革蘭陽性球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析

本研究共檢出金黃色葡萄球菌29株，其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（M RSA）7株，占24.14%；甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（M SSA）22株，占75.86%；凝固酶陰性葡萄球菌（CN S）92株，其中耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌（M RCN S）81株，占 88.04%；甲氧西林敏感凝固酶陰性葡萄球菌（M SCN S）11株，占11.96%。M SSA與M RSA在慶大霉素、利福平、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星耐藥率方面有差異（P＜0.05）。M RCN S與M SCN S在慶大霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、復(fù)方磺胺甲耐藥率方面有差異（P＜0.05）。屎腸球菌對(duì)青霉素耐藥率為90.9%，未檢出對(duì)萬古霉素耐藥的屎腸球菌。詳見表1。

2.3 革蘭陰性桿菌耐藥率分析

大腸埃希菌共檢出135株，其中產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌為 71株，占比52.59%。肺炎克雷伯菌共檢出62株，其中產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌25株，占比40.32%。產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌菌株與非產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌菌株在氨曲南、頭孢他啶、氯霉素、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢唑林及左氧氟沙星耐藥率方面有差異（P＜0.05）。產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌菌株與非產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌菌株在氨曲南、頭孢他啶、氯霉素、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢唑林、左氧氟沙星、頭孢西丁及氨芐西林-舒巴坦耐藥率方面有差異 （P＜0.05）。銅綠假單胞菌檢出3株泛耐藥菌株，占比15.78%。鮑曼不動(dòng)桿菌泛耐藥菌株4株，占比22.22%。詳見表2。沙門氏菌檢出34株，對(duì)常規(guī)檢測(cè)藥物耐藥率如下：氨芐青霉素3.2%，頭孢曲松3.2%，左氧氟沙星0.3%，復(fù)方磺胺甲6.5%，氯霉素6.5%。

表1 革蘭陽性球菌對(duì)抗菌藥物的耐藥率 （%）

表2 革蘭陰性桿菌對(duì)抗菌藥物的耐藥率 （%）

3 討論

本研究顯示，血培養(yǎng)陽性檢出菌中革蘭陰性菌占 61.77%，革蘭陽性菌占 33.69%，真菌 4.54%。張凱等[3]報(bào)道的四川地區(qū)也是革蘭陰性菌檢出數(shù)量占優(yōu)，然而凌華志等[4]研究顯示檢出數(shù)量上陽性菌占優(yōu)。菌株檢出前幾位也與張凱等[3]的報(bào)道接近，只是本研究中陰溝腸桿菌檢出數(shù)量較少。說明病原菌的分布具有地域性特征。國(guó)外G al es A C等[5]報(bào)道血流感染中最常見的病原菌與本文基本一致。

本研究中M RSA檢出率24.14%；比呂媛等[6]報(bào)道的54.5%要低。M RCN S檢出率與呂媛等[6]報(bào)道相當(dāng)。表明我院在金黃色葡萄球菌菌血癥治療上選擇β-內(nèi)酰胺類抗菌藥壓力相對(duì)較小。據(jù)報(bào)道[7-8]在美國(guó)、日本等已發(fā)現(xiàn)耐萬古霉素的葡萄球菌，我國(guó)目前雖未檢出對(duì)萬古霉素耐藥的金黃色葡萄球菌，但此項(xiàng)感染防控工作依然應(yīng)得到重視。本研究中屎腸球菌對(duì)青霉素耐藥率高達(dá)90.9%，對(duì)萬古霉素未發(fā)現(xiàn)耐藥，與李曉琴等[9]的研究結(jié)論相似。

本研究中產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌菌株檢出率為52.59%；產(chǎn) ESBLs肺炎克雷伯菌菌株檢出率為40.32%；上述兩菌未發(fā)現(xiàn)有耐碳青霉烯酶的情況。董海新等[10]也有相同研究結(jié)論。K ai ser RM[11]認(rèn)為耐碳青霉烯酶的腸桿菌特別是肺炎克雷伯菌逐年快速上升，本文雖未檢出此類細(xì)菌，但可能由于數(shù)據(jù)有限未揭示出規(guī)律，還應(yīng)加強(qiáng)數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)。泛耐藥銅綠假單胞菌及鮑曼不動(dòng)桿菌發(fā)生率分別為15.78%及22.22%，泛耐藥菌株的出現(xiàn)造成臨床治療困難，多黏菌素單劑及其聯(lián)合治療可能成為新的解決手段[12]。

[1] 徐英春，倪語星，王金良.血培養(yǎng)檢測(cè)規(guī)范化操作[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2012.

[2] Cl i ni cal and Laborat ory St andards Inst i t ut e．Perform ance St andards for A nt i m i crobi alSuscept i bi l i t y Test i ng[S].CLSI docum ent M 100-S24，2014.

[3] 張凱，喻華，黃湘寧，等.8548例血流感染病原菌分布及耐藥性分析[J].中國(guó)執(zhí)業(yè)藥師，2014，11（9）：3-8.

[4] 凌華志，沈繼錄，王中新，等.血培養(yǎng)陽性分離菌的分布和耐藥性分析[J].中國(guó)感染與化療雜志，2014，14（5）：420-424.

[5] G al es A C，Cast anei ra M，Jones RN，et al.A nt i m i crobi al resisance am ong G ram-negat i ve baci l l ii sol at ed from l at i n A m eri ca：resul t s from Sent ry A nt i m i crobi al Survei l l ance Program.Lat i n A m eri ca，2008-2010[J].D i agn M i crobi ol Infect D i s，2013，73（4）：354-360.

[6] 呂媛，李耘，薛峰，等.衛(wèi)生部全國(guó)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)（M ohnari n）2011-2012年度血流感染細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)報(bào)告[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2014，30（3）：278-288.

[7] Rahkonen M，Lut t i nen S，K oskel a M，et al.True bact erem i as aused by coagul ase negat i ve St aphyl ococcus are di ffi cul t t o di st i ngui sh from bl ood cul t ure cont am i nant s[J].Eur J Cl i n M i crobi olInfectD i s，2012，31（10）：2639-2644.

[8] H eal y CM，Baker CJ，Pal azzi D L，et al.D i st i ngui shi ng t rue coagul ase-negat i ve St aphyl ococcus i nfect i ons from cont am i nant s i n t he neonat ali nt ensi ve care uni t[J].J Peri nat ol m，2013，114（11）：113-121.

[9] 李曉琴，王焱，覃珊.醫(yī)院獲得性血流感染患者病原菌分布及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2014，24（11）：2629-2631.

[10] 董海新，胡小行，金呈強(qiáng).血流感染病原菌種類及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2014，24（9）：2104-2106.

[11] K ai ser RM，Cast anhei ra M，Jones RN，et al.Trends i n K l ebsi el l a Pneum oni a carbapenem ase-posi t i ve K.pneum oni ae i n U S hospi t al s：reportfrom t he 2007-2009 SEN TRY A nt i m i crobi al Survei l l ance Program [J].D i agn M i crobi ol Infect D i s，2013，76（4）：356-360.

[12] 劉立凡，陳佰義.多粘菌素B與美羅培南聯(lián)合用藥對(duì)泛耐藥銅綠假單胞菌體外抗菌活性的研究[J].中國(guó)生化藥物雜志，2014，34（2）：40-41.（收稿日期：2014-12-12）

Analysis of Pathogen Distribution and Drug Resistance of 463 Strains of Blood Culture Positive

Li u D ehua，Q i n H ai yan，H u D achun，Lu Zan，Ren Baoj un，W ang X i a，Y i n Li m i n，Q i an Ji ng（D epart m ent of Cl i ni cal Laborat ory of t he Fi rst Peopl e’s H ospi t al of K unm i ng Ci t y，Y unnan K unm i ng 650211，Chi na）

Objective：To i nvest i gat e and anal yze t he pat hogen di st ri but i on and drug resi st ance of 463 st rai ns of bl ood cul t ure posi t i ve det ect ed i n our hospi t al i n 2014.Methods：BD 9240 and Bact/A l ert 3D 240 bl ood cul t ure syst em s w ere used.Ident i fi cat i on and drug sensi t i ve t est of t he i sol at ed bact eri al st rai ns w ere conduct ed usi ng V i t ec2 com pact.D at a w as anal yzed by W honet 5.6 soft w are.Results：In t he st udy 286 st rai ns（61.77%）w ere det ect ed as t he G ram-negat i ve bact eri a，156 st rai ns （33.69%）w ere G ram-posi t i ve，and 21 st rai ns （4.54%）w ere fungi. A bout 29 st rai ns w ere det ect ed as Staphylococcus aureus，i ncl udi ng 7 M RSA st rai ns （24.14%），22 M SSA st rai ns（75.86%）and 92 st rai ns of coagulase-negative staphylococcus，w i t h 81 M RCN S st rai ns（88.04%）and 11 M SCN S st rai ns（11.96%）.Si gni fi cant di fference of resi st ant rat es（P＜ 0.05）of M RSA and M SSA w ere show ed t o gent am yci n，ri fam pi n and vancom yci n，l i nezol i d，t ei copl ani n，ci profl oxaci n and l evofl oxaci n and si gni fi cant di fference ofresi st antrat es ofM RCN S and M SCN S （P＜0.05）w ere found i n vancom yci n，l i nezol i d，t ei copl ani n，gent am yci n，ci profl oxaci n，l evofl oxaci n and com pound sul fam et hoxazol e.The resi st ant rat e of Enterococcus faecium t o peni ci l l i n w as 90.9%butno resi st ance w as det ect ed t o vancom yci n.The st rai ns of ESBLs i n E.coli w ere account ed for 52.59% and 40.32% w as ESBLs i n Klebsiella pneumoniae.There w ere di fferent resi st ant rat es（P＜ 0.05）of E.coli（ESBLs+）and E.coli（ESBLs-）i n azt reonam，ceft azi di m e，chl oram pheni col，ci profl oxaci n，ceft ri axone，cefot axi m e，cefepi m e，l evofl oxaci n and cefazol i n.The di fferentresi st antrat es （P＜0.05）of Klebsiella pneumoniae （ESBLs+）and Klebsiella pneumoniae（ESBLs-）w ere show ed i n azt reonam，ceft azi di m e，chl oram pheni col，ci profl oxaci n，ceft ri axone，cefot axi m e，cefepi m e，cefoxi t i n，am pi ci l l i n/sul bact am，l evofl oxaci n and cefazol i n.Three st rai ns （15.78%）of pan-drug resi st ant Pseudomonas aeruginosa and 4 st rai ns （22.22%）of pan-drug resi st ant Acinetobacter baumannii w ere det ect ed.The resi st ant rat e of salmonella w as l ess t han 6.5%.Conclusion：There i s a w i de di st ri but i on of posi t i ve i sol at es from bl ood cul t ure and t he resi st ance rat es of di fferent bact eri a vari ed.The m oni t ori ng of pat hogeni c di st ri but i on of bl ood cul t ure and drug resi st ance shoul d be st rengt hened.

Bl ood Cul t ure；Pat hogen D i st ri but i on；D rug Resi st ance

10.3969/j.i ssn.1672-5433.2015.04.003

衛(wèi)生部公益性行業(yè)科研基金（201002021）；云南省教育廳科學(xué)研究基金項(xiàng)目（2010C097）

劉德華，男，碩士，主治醫(yī)師。研究方向：細(xì)菌耐藥機(jī)制及流行病學(xué)研究。E-m ai l：l i udehua12340244@si na. com.cn