李志超，丁向陽，魏森林，郗慧

（1.河南超杰園林設(shè)計工程有限公司，河南 鄭州 450000；2.河南省林業(yè)科學(xué)研究院，河南 鄭州 450008；3.方城縣林業(yè)技術(shù)指導(dǎo)站，河南 方城 473200；4.河南科技大學(xué)，河南 洛陽 471003）

柿（Diospyros kaki Thunb.）為柿科（Ebenaceae）柿屬（Diospyros L.）植物，作為重要的木本糧食樹種，在人民生活中占有重要地位，在我國已有兩千多年的栽培歷史。近年來，柿被廣泛用于醫(yī)療保健、特色食（飲）品等，如在韓國頗受歡迎的化妝品中多含有柿成分，其加工產(chǎn)品包括柿酒、柿醋、柿餅、柿霜糖等[1]，不同的應(yīng)用方面都產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。

但是近年來，中國柿主產(chǎn)區(qū)炭疽病發(fā)生嚴(yán)重，尤其是 2009年，陜西富平縣柿炭疽病引起柿果大量脫落，柿樹死亡，極大地挫傷了柿農(nóng)的積極性；福建省永泰縣柿炭疽病發(fā)病果園近520 hm2，占全縣種植面積的 65%左右，病葉率為 15.6%；病果率平均6.3%，病情指數(shù)3.05[2,3]；柿炭疽病嚴(yán)重發(fā)生的情況在其他主產(chǎn)區(qū)也有類似報道，經(jīng) 2013－2014年調(diào)查，河南省南陽地區(qū)的西峽縣、南召縣和洛陽地區(qū)的欒川縣均有柿炭疽病的發(fā)生[4]。為了掌握柿炭疽病菌的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，有必要人為地進(jìn)行炭疽病菌的接種試驗(yàn)。本試驗(yàn)使用從柿樹炭疽病樣本分離出的病菌配制成濃度為1×106/mL孢子懸浮液，采用有傷接種和無傷接種兩種方法，對選自河南省、陜西省的9個柿品種進(jìn)行接種試驗(yàn)，通過對比分析不同接種方法的接種效果及不同柿品種的感病情況，以及不同柿栽培品種對炭疽病的抗性，為研究柿炭疽病的發(fā)病規(guī)律提供依據(jù)，對柿生產(chǎn)及炭疽病的綜合防治具有科學(xué)指導(dǎo)意義。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 材料

1.1.1 盆栽柿苗

（1）接種試驗(yàn)所用柿苗選自陜西富平、河南澠池、平頂山魯山等地的9個品種，90株盆栽柿苗進(jìn)行接種試驗(yàn)，所有盆栽苗均為2 a生嫁接苗，砧木為君遷子或本砧。（2）苗木假植：將苗木假植在土中。假植穴的規(guī)格為1 m2左右，深40 cm左右；（3）盆土配制：先將草炭與泥炭、松針土及園土（土層距地面20 cm以上部分的土）按照1︰1︰1︰1的比例攪拌混勻，敲碎碾細(xì)，并加入少量煤爐渣和有機(jī)肥，將混合后的土壤充分混勻，噴灑多菌靈 100倍液后，堆成山包狀，表面覆蓋一層薄膜，在陽光下暴曬堆漚24 h以上，備用；（4）柿苗定植：對假植苗根系進(jìn)行修剪。先在花盆盆底部放置1 cm～2 cm厚的爐渣、碎石子或砂子，以利排水通氣，然后加入少量盆土。柿苗根部浸泡在1 000 mg/L生根粉溶劑（40%萘乙酸）溶液中5～10 s后取出。將柿苗放在盆中央，加入盆土，將土輕輕壓實(shí)，使土與根密接，澆透水，標(biāo)記盆號及品種。（5）定干：盆栽苗成活后，在嫁接處上方20～30 cm處定干，保留飽滿芽3～5個。

1.1.2 接種菌株（1）接種菌株：菌株為分離自恭城水柿發(fā)病枝條、葉片的炭疽菌 GXGCLMLL-1；（2）制備分生孢子懸浮液：將菌株配置成濃度為 1×106/mL（用孢子計數(shù)器顯微鏡下觀察計算得出）的孢子懸浮液作為接種體備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 有傷接種：用消毒的大頭針在接種植物表面扎孔，標(biāo)記后用移液器吸取孢子懸浮液5滴，滴加到孔上，套袋保濕，以無菌水為對照。每株接種 1枝新梢以及3片葉柄。

1.2.2 無傷接種：用記號筆標(biāo)記接種中心，吸取孢子懸浮液滴在中心處5滴，套袋保濕，以無菌水做對照。每株接種1枝新梢及3片葉柄，隔離保存[5,6]。接種試驗(yàn)設(shè)計見表1。

表1 接種試驗(yàn)設(shè)計

1.2.3 統(tǒng)計觀察：接種后，每隔12 h觀察1次，測量病斑大小。比較同種接種方法不同品種間接種病情差異，比較相同品種不同接種方法的接種效果區(qū)別，計算病斑生長速率。

病斑生長速率（cm/d）=（最大病斑 cm/最大病斑出現(xiàn)時間h）×24 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 接種后病情發(fā)展觀察

無傷接種接種部位未出現(xiàn)發(fā)病癥狀，但在非接種部位會出現(xiàn)輕微病斑。

通過統(tǒng)計有傷接種發(fā)病時間及病斑生長，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 接種后不同品種的感病情況

從表2可以看出，不同柿樹品種對炭疽病的抗性不同，最大病斑的大小及出現(xiàn)時間也存在差異，其中尖柿發(fā)病最早，在接種后 24 h就開始出現(xiàn)病癥，枝條部位病斑最大為2.4 cm，葉片上病斑最大為2.3 cm，而牛心柿與蓋柿發(fā)病最晚，在接種后60 h才開始出現(xiàn)病癥，其余品種則主要在接種36～48 h后開始發(fā)病。病情發(fā)展最快的尖柿病斑在48 h后出現(xiàn)顯著增長，最慢的為澠池牛心柿96 h后才開始出現(xiàn)顯著增長，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)多數(shù)品種在接種144 h后均出現(xiàn)了落葉現(xiàn)象。

進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，不同器官對病菌的敏感性不同，所有柿樹品種葉片都較枝條先發(fā)病，而且葉片上最大病斑均大于枝條上病斑。葉片病斑擴(kuò)展速率普遍在0.34～0.5 cm/d之間，其中貢柿、次郎擴(kuò)展最快，達(dá)到0.5 cm/d，其次為禪寺丸、西村早生、西村早生、尖柿病斑擴(kuò)展率也都在0.40～0.44 cm/d之間，而牛心柿、蓋柿、斤柿病斑擴(kuò)展速率較慢，其中牛心柿病斑擴(kuò)展速率最低，為0.34 cm/d。

2.2 接種后癥狀觀察

觀察發(fā)現(xiàn)，葉片有傷侵染過程中接種24 h后，在接種部位會出現(xiàn)黑褐色小斑點(diǎn)，隨后斑點(diǎn)會沿葉柄逐漸伸長，呈不規(guī)則橢圓形或長條形，不同品種最大病斑長度在1.7～2.2 cm之間，寬度約為0.2 cm。發(fā)病部位中心處為深黑色，周邊為黑褐色。被侵染枝條于48 h后在接種部位出現(xiàn)輕微黑褐色斑點(diǎn)，斑點(diǎn)逐漸擴(kuò)大，沿植株生長方向蔓延；接種96 h后，開始在接種部位周圍出現(xiàn)大量密集不規(guī)則的分布黑點(diǎn)；于接種144 h后會出現(xiàn)連片狀病斑；個別品種在發(fā)病部位斷裂。

3 小結(jié)與討論

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，牛心柿、蓋柿接種炭疽病病菌后，病斑擴(kuò)展速率較慢，病斑較小，感病時間較晚，推測這些品種可能對炭疽病抗病性較高。而尖柿、貢柿、次郎病斑擴(kuò)展速率快，病斑較大，感病時間早，發(fā)病快，表明這些品種可能對炭疽病抗性較低，由此可見，柿樹不同品種間對炭疽病菌的抗性存在差異[7]。有傷接種后，病情表現(xiàn)更為明顯和穩(wěn)定，說明有傷接種較無傷接種更為有效。

研究發(fā)現(xiàn)炭疽病在柿樹種間具有嚴(yán)格的寄主?；?，寄主植物為了抵御病原菌，相應(yīng)地形成了物理的、化學(xué)的防衛(wèi)機(jī)制，阻止附著胞發(fā)育、侵染釘穿透和侵染菌絲的定殖[8]，由此推測牛心柿、蓋柿等品種具有更強(qiáng)的防御生理功能。

[1]姚允聰，張玉萍，孔云，等.優(yōu)質(zhì)柿子無公害生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)問答[M].北京：中國林業(yè)出版社，2009：43-46.

[2]高文勝.我國甜柿生產(chǎn)現(xiàn)狀及發(fā)展前景[J].北京農(nóng)業(yè)，2006（8）：33-36.

[3]盧義華.太秋甜柿在福建永定縣的引種表現(xiàn)及栽培技術(shù)[J].中國南方果樹，2013，（03）：39-42.

[4]李曉夢，丁向陽.多效唑?qū)谑辽L的影響[J].林業(yè)科技開發(fā)，2008（5）：61.

[5]牛曉慶，余鳳玉， 符海泉，等.椰子莖瀉血病菌人工接種方法的研究及抗病品種的篩選[J].中國南方果樹，2015（1）：44-46.

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[8]張敬澤，胡東維，徐同.柿樹炭疽菌侵染柿樹葉柄的超微結(jié)構(gòu)觀察[J].植物病理學(xué)報，2005，35（5）：434-441.