李志超,丁向陽,魏森林,郗慧
(1.河南超杰園林設(shè)計工程有限公司,河南 鄭州 450000;2.河南省林業(yè)科學(xué)研究院,河南 鄭州 450008;3.方城縣林業(yè)技術(shù)指導(dǎo)站,河南 方城 473200;4.河南科技大學(xué),河南 洛陽 471003)
柿(Diospyros kaki Thunb.)為柿科(Ebenaceae)柿屬(Diospyros L.)植物,作為重要的木本糧食樹種,在人民生活中占有重要地位,在我國已有兩千多年的栽培歷史。近年來,柿被廣泛用于醫(yī)療保健、特色食(飲)品等,如在韓國頗受歡迎的化妝品中多含有柿成分,其加工產(chǎn)品包括柿酒、柿醋、柿餅、柿霜糖等[1],不同的應(yīng)用方面都產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。
但是近年來,中國柿主產(chǎn)區(qū)炭疽病發(fā)生嚴(yán)重,尤其是 2009年,陜西富平縣柿炭疽病引起柿果大量脫落,柿樹死亡,極大地挫傷了柿農(nóng)的積極性;福建省永泰縣柿炭疽病發(fā)病果園近520 hm2,占全縣種植面積的 65%左右,病葉率為 15.6%;病果率平均6.3%,病情指數(shù)3.05[2,3];柿炭疽病嚴(yán)重發(fā)生的情況在其他主產(chǎn)區(qū)也有類似報道,經(jīng) 2013-2014年調(diào)查,河南省南陽地區(qū)的西峽縣、南召縣和洛陽地區(qū)的欒川縣均有柿炭疽病的發(fā)生[4]。為了掌握柿炭疽病菌的發(fā)生發(fā)展規(guī)律,有必要人為地進(jìn)行炭疽病菌的接種試驗(yàn)。本試驗(yàn)使用從柿樹炭疽病樣本分離出的病菌配制成濃度為1×106/mL孢子懸浮液,采用有傷接種和無傷接種兩種方法,對選自河南省、陜西省的9個柿品種進(jìn)行接種試驗(yàn),通過對比分析不同接種方法的接種效果及不同柿品種的感病情況,以及不同柿栽培品種對炭疽病的抗性,為研究柿炭疽病的發(fā)病規(guī)律提供依據(jù),對柿生產(chǎn)及炭疽病的綜合防治具有科學(xué)指導(dǎo)意義。
1.1.1 盆栽柿苗
(1)接種試驗(yàn)所用柿苗選自陜西富平、河南澠池、平頂山魯山等地的9個品種,90株盆栽柿苗進(jìn)行接種試驗(yàn),所有盆栽苗均為2 a生嫁接苗,砧木為君遷子或本砧。(2)苗木假植:將苗木假植在土中。假植穴的規(guī)格為1 m2左右,深40 cm左右;(3)盆土配制:先將草炭與泥炭、松針土及園土(土層距地面20 cm以上部分的土)按照1︰1︰1︰1的比例攪拌混勻,敲碎碾細(xì),并加入少量煤爐渣和有機(jī)肥,將混合后的土壤充分混勻,噴灑多菌靈 100倍液后,堆成山包狀,表面覆蓋一層薄膜,在陽光下暴曬堆漚24 h以上,備用;(4)柿苗定植:對假植苗根系進(jìn)行修剪。先在花盆盆底部放置1 cm~2 cm厚的爐渣、碎石子或砂子,以利排水通氣,然后加入少量盆土。柿苗根部浸泡在1 000 mg/L生根粉溶劑(40%萘乙酸)溶液中5~10 s后取出。將柿苗放在盆中央,加入盆土,將土輕輕壓實(shí),使土與根密接,澆透水,標(biāo)記盆號及品種。(5)定干:盆栽苗成活后,在嫁接處上方20~30 cm處定干,保留飽滿芽3~5個。
1.1.2 接種菌株(1)接種菌株:菌株為分離自恭城水柿發(fā)病枝條、葉片的炭疽菌 GXGCLMLL-1;(2)制備分生孢子懸浮液:將菌株配置成濃度為 1×106/mL(用孢子計數(shù)器顯微鏡下觀察計算得出)的孢子懸浮液作為接種體備用。
1.2.1 有傷接種:用消毒的大頭針在接種植物表面扎孔,標(biāo)記后用移液器吸取孢子懸浮液5滴,滴加到孔上,套袋保濕,以無菌水為對照。每株接種 1枝新梢以及3片葉柄。
1.2.2 無傷接種:用記號筆標(biāo)記接種中心,吸取孢子懸浮液滴在中心處5滴,套袋保濕,以無菌水做對照。每株接種1枝新梢及3片葉柄,隔離保存[5,6]。接種試驗(yàn)設(shè)計見表1。
表1 接種試驗(yàn)設(shè)計
1.2.3 統(tǒng)計觀察:接種后,每隔12 h觀察1次,測量病斑大小。比較同種接種方法不同品種間接種病情差異,比較相同品種不同接種方法的接種效果區(qū)別,計算病斑生長速率。
病斑生長速率(cm/d)=(最大病斑 cm/最大病斑出現(xiàn)時間h)×24 h。
無傷接種接種部位未出現(xiàn)發(fā)病癥狀,但在非接種部位會出現(xiàn)輕微病斑。
通過統(tǒng)計有傷接種發(fā)病時間及病斑生長,試驗(yàn)結(jié)果見表2。
表2 接種后不同品種的感病情況
從表2可以看出,不同柿樹品種對炭疽病的抗性不同,最大病斑的大小及出現(xiàn)時間也存在差異,其中尖柿發(fā)病最早,在接種后 24 h就開始出現(xiàn)病癥,枝條部位病斑最大為2.4 cm,葉片上病斑最大為2.3 cm,而牛心柿與蓋柿發(fā)病最晚,在接種后60 h才開始出現(xiàn)病癥,其余品種則主要在接種36~48 h后開始發(fā)病。病情發(fā)展最快的尖柿病斑在48 h后出現(xiàn)顯著增長,最慢的為澠池牛心柿96 h后才開始出現(xiàn)顯著增長,試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)多數(shù)品種在接種144 h后均出現(xiàn)了落葉現(xiàn)象。
進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn),不同器官對病菌的敏感性不同,所有柿樹品種葉片都較枝條先發(fā)病,而且葉片上最大病斑均大于枝條上病斑。葉片病斑擴(kuò)展速率普遍在0.34~0.5 cm/d之間,其中貢柿、次郎擴(kuò)展最快,達(dá)到0.5 cm/d,其次為禪寺丸、西村早生、西村早生、尖柿病斑擴(kuò)展率也都在0.40~0.44 cm/d之間,而牛心柿、蓋柿、斤柿病斑擴(kuò)展速率較慢,其中牛心柿病斑擴(kuò)展速率最低,為0.34 cm/d。
觀察發(fā)現(xiàn),葉片有傷侵染過程中接種24 h后,在接種部位會出現(xiàn)黑褐色小斑點(diǎn),隨后斑點(diǎn)會沿葉柄逐漸伸長,呈不規(guī)則橢圓形或長條形,不同品種最大病斑長度在1.7~2.2 cm之間,寬度約為0.2 cm。發(fā)病部位中心處為深黑色,周邊為黑褐色。被侵染枝條于48 h后在接種部位出現(xiàn)輕微黑褐色斑點(diǎn),斑點(diǎn)逐漸擴(kuò)大,沿植株生長方向蔓延;接種96 h后,開始在接種部位周圍出現(xiàn)大量密集不規(guī)則的分布黑點(diǎn);于接種144 h后會出現(xiàn)連片狀病斑;個別品種在發(fā)病部位斷裂。
由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出,牛心柿、蓋柿接種炭疽病病菌后,病斑擴(kuò)展速率較慢,病斑較小,感病時間較晚,推測這些品種可能對炭疽病抗病性較高。而尖柿、貢柿、次郎病斑擴(kuò)展速率快,病斑較大,感病時間早,發(fā)病快,表明這些品種可能對炭疽病抗性較低,由此可見,柿樹不同品種間對炭疽病菌的抗性存在差異[7]。有傷接種后,病情表現(xiàn)更為明顯和穩(wěn)定,說明有傷接種較無傷接種更為有效。
研究發(fā)現(xiàn)炭疽病在柿樹種間具有嚴(yán)格的寄主?;?,寄主植物為了抵御病原菌,相應(yīng)地形成了物理的、化學(xué)的防衛(wèi)機(jī)制,阻止附著胞發(fā)育、侵染釘穿透和侵染菌絲的定殖[8],由此推測牛心柿、蓋柿等品種具有更強(qiáng)的防御生理功能。
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