趙亞君趙騰蛟李明玉譚亞納李紅玲

作者單位：730000 蘭州1甘肅中醫(yī)藥大學臨床醫(yī)學院；2甘肅省人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科

臨床經(jīng)驗

NF-kB在B細胞淋巴瘤組織中的表達及臨床意義

趙亞君1趙騰蛟1李明玉1譚亞納1李紅玲2

作者單位：730000 蘭州1甘肅中醫(yī)藥大學臨床醫(yī)學院；2甘肅省人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科

目的探討核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）在B細胞淋巴瘤組織中的表達及其與臨床病理特征的關系。方法采用免疫組化法檢測42例B細胞淋巴瘤組織（B細胞淋巴瘤組）及20例淋巴結(jié)反應性增生組織（對照組）中NF-κB蛋白的表達。分析NF-κB表達與B細胞淋巴瘤臨床病理特征的關系。結(jié)果NF-κB在B細胞淋巴瘤組織和淋巴結(jié)反應性增生組織中的陽性表達率分別為78.57%（33/42）和20%（4/20），兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。NF-κB的表達與惡性程度、臨床分期有關（P<0.05）；而與年齡、性別、乳酸脫氫酶（LDH）水平無關（P>0.05）。結(jié)論NF-κB在B細胞淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，有望成為判斷淋巴瘤患者預后的指標。

淋巴瘤；核轉(zhuǎn)錄因子-κB；免疫組織化學；表達；臨床意義

淋巴瘤是淋巴造血系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，是一種異質(zhì)性疾病，根據(jù)WHO（2008）造血和淋巴組織腫瘤分類將其分為霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤［1］。B細胞淋巴瘤是一組發(fā)病率和惡性程度高的非霍奇金淋巴瘤。隨著基因組學和分子生物學等研究的深入開展，部分淋巴瘤的發(fā)病機制已明確，靶向治療的研究和臨床新藥的應用使其具有部分治愈的可能，但仍有部分淋巴瘤易復發(fā)，難以治愈。研究表明，核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）信號通路在淋巴瘤的發(fā)生中扮演著重要的角色。NF-κB是一類廣泛存在于細胞中的多顯性核轉(zhuǎn)錄因子，屬于Rel基因家族。其激活參與炎癥、細胞增殖、細胞凋亡等基因的調(diào)節(jié)。在腫瘤細胞中具有調(diào)控腫瘤細胞凋亡和免疫活性的作用［2］。本研究利用免疫組化法檢測NF-κB在B細胞淋巴瘤組織中的表達情況，探討NF-κB的表達與B細胞淋巴瘤臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2012年8月至2015年5月甘肅省人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科確診的B細胞淋巴瘤42例為B細胞淋巴瘤組，其中男性22例，女性20例；年齡16～78歲，中位年齡47歲。選取反應性增生淋巴組織20例為對照組，中位年齡50歲。淋巴瘤的診斷符合《淋巴瘤病理診斷》標準［3］，全組病例資料完整。按照2008年WHO淋巴瘤相關病理分型、臨床分期及惡性程度進行分類，其中病理分型：彌漫性大B細胞淋巴瘤27例，邊緣區(qū)淋巴瘤7例，套細胞淋巴瘤1例，Burkitt淋巴瘤2例，濾泡性淋巴瘤5例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期16例，Ⅲ～Ⅳ期26例；惡性程度：侵襲性淋巴瘤30例，惰性淋巴瘤12例。所有患者標本采集已征得醫(yī)院倫理委員會批準及患者知情同意，病理活檢前均未進行抗腫瘤治療。所有組織標本均經(jīng)過10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋切片，片厚4μm，行HE和免疫組化染色。

1.2 主要試劑

鼠抗人NF-κB單克隆抗體購自美國Santa Cruz公司（北京中杉金橋生物技術(shù)公司進口分裝），Envision兩步法免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司，Envision兩步法免疫組化染色按試劑盒說明書操作，NF-κB工作濃度為1∶100，所有切片均采用微波修復抗原。以PBS替代一抗作陰性對照。

1.3 免疫組化染色

將片厚為4μm石蠟切片脫蠟至水，3%過氧化氫10 min阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，胰酶修復20 min，10%山羊血清室溫封閉20 min，NF-κB抗體（1∶100）于濕盒中4℃冰箱過夜，滴加二抗、三抗室溫下濕盒內(nèi)孵育各20 min，DAB顯色，蘇木精復染，常規(guī)脫水，封片。

1.4 結(jié)果判定

采用雙盲法進行計數(shù)。結(jié)果判定由兩位資深病理學專家進行雙盲法評估。細胞計數(shù)在高倍鏡視野（×400）下，每張切片上隨機選擇5個視野，每個視野計數(shù)100個細胞數(shù)，每個標本計數(shù)3張切片。NF-κB的表達以陽性細胞百分率及染色強度之積進行判定。NF-κB：細胞核和（或）細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒為陽性細胞。陽性細胞百分率：≤5%計0分，6%～25%計1分，26%～50%計2分，≥51%計3分；無陽性細胞計0分。細胞染色強度：無染色計0分，弱染色（淺黃色）計1分，中等染色（金黃色）計2分，強染色（棕黃色）計3分。兩項得分相乘：0分為陰性（-），1～9分為陽性，其中1～3分為弱陽性（+），4～6分為中等陽性（++），7～9分為強陽性（+++）。

1.5 統(tǒng)計學分析

應用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學處理。組間比較用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 NF-κB在B細胞淋巴瘤組織中的表達

在顯微鏡（×400）下觀察細胞形態(tài)及腫瘤細胞的病理變化。NF-κB陽性表達位于細胞核和細胞質(zhì)，在細胞質(zhì)內(nèi)明顯表達，呈棕黃色或者棕褐色。B細胞淋巴瘤組NF-κB的陽性表達率為78.57%，對照組為20%，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。見圖1、表1。

圖1 NF-κB在B細胞淋巴瘤組織中的表達（Envision×400）

表1 NF-κB在B細胞淋巴瘤組和對照組中的表達［n（%）］

2.2 NF-κB的表達與B細胞淋巴瘤患者臨床病理特征的關系

NF-κB的表達與B細胞淋巴瘤患者臨床分期及惡性程度有關（P<0.05），而與性別、年齡、乳酸脫氫酶（LDH）水平無關（P>0.05）。見表2。

3 討論

腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移是癌基因與抑癌基因共同參與調(diào)節(jié)的一個復雜過程，通過腫瘤發(fā)生與轉(zhuǎn)移相關基因過度表達，以及一系列基因產(chǎn)物的參與，對腫瘤發(fā)生與轉(zhuǎn)移全過程進行調(diào)控［4］。NF-κB是一類普遍存在的、通常以同源或者異源二聚體的形式存在的核轉(zhuǎn)錄因子，其家族共有5個成員，包括p65（Rel A）、c-Rel、Rel B、p50/p105（NF-κB1）、p52/p100（NF-κB2），其中最常見的形式為p50/p65組成的二聚體［5］，它可引起基因轉(zhuǎn)錄激活。細胞在非刺激狀態(tài)下，NF-κB與它的抑制物核轉(zhuǎn)錄因子抑制因子（IKB）結(jié)合，以一種未被激活的形式存在于細胞質(zhì)，當細胞受到損傷等刺激后，IKB降解，活性NF-κB釋放并轉(zhuǎn)移至細胞核，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄活性，故細胞核的NF-κB蛋白的表達可認為是NF-κB激活的標志［6］。激活的NF-κB可促進凋亡基因的轉(zhuǎn)錄，從而導致腫瘤細胞的增生。多數(shù)研究認為，NF-κB調(diào)節(jié)凋亡可能通過以下途徑：⑴通過調(diào)節(jié)細胞S周期，間接影響細胞對凋亡信號的反應；⑵通過和一些蛋白相互作用影響凋亡；⑶直接調(diào)節(jié)凋亡基因［7］。

臨床上對于NF-κB在其他腫瘤組織中的表達及臨床意義已有報道。秦陽等［8］檢測100例甲狀腺癌組織、30例甲狀腺腺瘤組織、30例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織和30名健康人甲狀腺組織中的NF-κB p50蛋白陽性表達情況，結(jié)果顯示NF-κB p50蛋白的陽性表達率分別為73%、30%、33.33%和6.67%，NF-κB p50蛋白在甲狀腺非癌組織中的表達率顯著低于癌組織。Sasaki等［9］和李亞平等［10］對胃癌組織進行研究，發(fā)現(xiàn)NF-κB陽性表達與腫瘤大小、淋巴結(jié)侵犯、腫瘤侵犯深度及腹腔轉(zhuǎn)移有關。另有學者［11］研究發(fā)現(xiàn)NF-κB在乳腺癌細胞和癌組織中呈高表達，認為NF-κB在監(jiān)測乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展方面發(fā)揮重要作用。也有學者［12，13］研究發(fā)現(xiàn)卵巢癌細胞及其組織NF-κB/p65陽性表達率明顯高于良性上皮細胞腫瘤和交界性腫瘤。董佑紅等［14］檢測62例彌漫性大B細胞淋巴瘤組織中NF-κB的水平，結(jié)果陽性表達率為63%（39/62）。上述結(jié)果說明NF-κB陽性表達與腫瘤生長、侵犯及轉(zhuǎn)移相關。目前，在臨床研究中，有學者已將NF-κB作為婦科腫瘤治療的重要目標，如Mabuchi等［15］聯(lián)合應用順鉑和NF-κB的抑制劑（SN50）治療卵巢癌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過阻斷NF-κB激活，有利于細胞凋亡，從而增強順鉑化療作用，提高療效。

本研究通過免疫組化檢查發(fā)現(xiàn)NF-κB在B細胞淋巴瘤組織中呈高表達，陽性表達率為78.57%。進一步分析發(fā)現(xiàn)，隨著B細胞淋巴瘤的臨床分期越晚及惡性程度越高，NF-κB的陽性表達率越高（P<0.05），而與性別、年齡、LDH水平無關（P>0.05），表明NF-κB的表達與B細胞淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展有關。本文未對以上患者進行隨訪，中位生存期未知，但發(fā)現(xiàn)NF-κB與臨床分期、惡性程度有關，從而證實了NF-κB陽性表達可以作為B細胞淋巴瘤患者不良預后的指標，有助于指導個體化藥物治療。

綜上所述，NF-κB與淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關，NF-κB有望成為判斷淋巴瘤預后新的標志物。為進一步了解NF-κB家族蛋白在淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及臨床應用打下了基礎。

［1］ 李向紅.淋巴瘤病理診斷的標準化［J］.中華病理學雜志，2013，42（4）：217-219.

［2］ Hayden MS，Ghosh S.Shared principles in NF-κB signaling［J］.Cell，2008，132（12）：344-362.

［3］李小秋.淋巴瘤病理研究新進展［J］.中國癌癥雜志，2014，24（10）：721-726.

［4］ 王瑞海，崔大為，孫國貴.DMBT1在鼻咽癌中的表達及臨床意義［J］.臨床腫瘤學雜志，2014，19（9）：838-841.

［5］ Gong H，Zuliani P，Komuravelli A，et al.Analysis and verification of the HMGBl signaling pathway［J］.BMC Bioinformatics，2010，11（Suppl7）：S10.

［6］ Yoshizaki A，Komura K，Iwata Y，et al.Clinical significance of serum HMGB-1 and sRAGE levels in systemic sclerosis：association with disease severity［J］J Clin Immunol，2009，29（2）：180-189.

［7］ Hao Q，Zhang C，Gao Y，et al.FOXP3 inhibits NF-κB activity and hence COX2 expression in gastric cancer cells［J］.Cell Signal，2014，26（3）：564-569.

［8］ 秦陽，王玲，呂曉娟.NF-κB p50、NF-κB p65在甲狀腺癌中的表達及意義［J］.中國生化藥物雜志，2014，34（8）：148-153.

［9］ Sasaki N，Morisaki T，Hashizume K，et al.Nuclear factor-kappa B P65（Rel A）transcription factor is constitutively activated in human gastric carcinoma tissue［J］.Clin Cancer Res，2001，7（12）：4136-4142.

［10］李亞平，劉振勝，黃冠男，等.NF-κB、IκBα在胃癌組織中的表達及臨床意義［J］.中國癌癥防治雜志，2015，7（1）：45-48.

［11］楊明峰，李志國，孫紅崗，等.乳腺癌組織血清NF-κB p65表達分析及臨床意義［J］.醫(yī)學研究雜志，2012，41（6）：78-81.

［12］宋思幽，吳英杰，李冬華.Raf激酶抑制蛋白、NF-κB p65及VEGF-C在卵巢上皮性腫瘤中的表達及相關性［J］.中國臨床研究，2013，26（6）：525-527.

［13］郭冰沁，俞嵐，武世伍，等.HE4、NF-κBp65和MMP-9在卵巢上皮性腫瘤中的表達及其臨床意義［J］.中國組織化學與細胞化學雜志，2011，20（6）：578-583.

［14］董佑紅，伍鋼，王濤，等.NF-κB p50和VEGF在彌漫性大B細胞淋巴瘤組織中的表達及其臨床意義［J］.中華腫瘤防治雜志，2007，14（6）：436-439.

［15］Mabuchi S，Ohmichi M，Nishio Y，et al.Inhibition of NF kappaB increase the efficacy of cisplatin in vitro ovarian cancer models［J］.J Bioe Chem，2004，5（6）：12-16.

［2015-10-09收稿］［2015-10-23修回］［編輯 江德吉］

Expression of NF-κB in B cell lymphoma carcinoma and its clinical significance

Zhao Yajun1，Zhao Tengjiao1，Li Mingyu1，Tan Yana1，Li Hongling2（1Gansu University of Traditional Chinese Medical College；2Department ofMedical Oncology，Gansu Provincial People′s Hospital，Lanzhou 730000，P.R.China）

Li Hongling.E-mail：15002681915@163.com

ObjectiveTo investigate the expression of nuclear transcription factorκB（NF-κB）in B cell lymphoma，and analyze possible relationships between expression and clinicopathological characteristics.MethodsImmunohistochemistry was used to detect NF-κB protein expression in tissues from 42 patients with B cell lymphoma and 20 patients with reactive lymph node hyperplasia.Relationships between NF-κB expression and clinicopathological characteristics were analyzed.ResultsThe rate of NF-κB-positive tissue was significantly higher among patients with B cell lymphoma（78.57%，33/42）than among those with reactive lymph node hyperplasia（20%，4/20；P<0.001）.Level of NF-κB protein expression correlated with Ann-Arbor clinical stage and histology grade（P<0.05），but not with sex，age or lactate dehydrogenase（LDH）level（P>0.05）.ConclusionNF-κB plays an important role in the development of B cell lymphoma，and it may serve as a prognostic indicator.

Lymphoma；Nuclear factor kappa B；immunohistochemistry；Expression；Clinical significance

R733.4

A

1674-5671（2015）06-04

10.3969/j.issn.1674-5671.2015.06.08

國家自然科學基金資助項目（30960438，81260342，81560498）；蘭州市科技計劃項目（2009-1-56）

李紅玲。E-mail：15002681915@163.com