楊 華 (內(nèi)蒙古包頭市一機(jī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古包頭014030)

0 引言

腸道菌數(shù)是一種Gram陰性桿菌，存在于人和動(dòng)物的腸道中，機(jī)體免疫力下降時(shí)，容易發(fā)生腸道桿菌感染.腸道菌是人體中一種重要的調(diào)控元件，能夠幫助機(jī)體進(jìn)行能量管理、代謝調(diào)控及免疫應(yīng)答.隨著肥胖問題逐漸出現(xiàn)，兒童肥胖問題甚得關(guān)注.自1980年以來，全球肥胖發(fā)病率不斷上升，其中肥胖/超重的成年人比率增長了28%，兒童增長了47%［1］.導(dǎo)致肥胖的因素多是患者腸道菌屬分布存在問題.據(jù)相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，兒童肥胖與腸道菌群的分布存在著密切的聯(lián)系.為了進(jìn)一步明確腸道菌分布情況與兒童肥胖的關(guān)系，本研究對(duì)124例不同體質(zhì)量學(xué)齡兒童腸道菌屬分布特征進(jìn)行研究和分析.

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取本地區(qū)2013-12/2014-12分層隨機(jī)抽樣出的124例不同體質(zhì)量的兒童為研究對(duì)象，兒童年齡7～13(平均10.3)歲.按照體質(zhì)量指數(shù)BMI分為正常組(n=62)和肥胖組(n=62).分別采集所有患者清晨空腹大便樣本，并在30 min之內(nèi)置于-20℃的冰箱中冷凍保存.所有兒童均根據(jù)WHO［2］的肥胖判定標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合我國肥胖工作組標(biāo)準(zhǔn)選擇，排除患有內(nèi)分泌、遺傳及代謝和中樞神經(jīng)等疾病的兒童.

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 肥胖組納入標(biāo)準(zhǔn):兒童年齡在7～13歲，符合我國肥胖工作組標(biāo)準(zhǔn)判定，排除有多重內(nèi)分泌及遺傳和神經(jīng)系統(tǒng)疾病.收集大便樣本前2周內(nèi)未服用抗生素，排除有應(yīng)急狀態(tài)、腹痛、便秘等多種胃腸道癥狀的兒童.

1.3 測定方法 大便基因組DNA提取方法:所有大便樣本均統(tǒng)一使用電子天平秤取，取200 mg置于離心管中，以13，000 r/min的速度在離心機(jī)上做3 min離心，去除渣質(zhì)，除去沉淀物后置于PBS緩沖液中再次進(jìn)行離心.去除上清液直到澄清為止，將樣本放置到5 mL的離心管中并置于-20℃的冰箱保存?zhèn)溆?使用 Omega DNA Stool Mini Kit試劑盒［3］，提取大便基因組的DNA，并通過紫外分光光度法來檢驗(yàn)DNA的純度.

16SrRNA鑒定方法:采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測常見菌屬的數(shù)量，首先，提取大便DNA中的6種細(xì)菌做熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)，每個(gè)樣品要做3個(gè)平行復(fù)孔，并詳細(xì)記錄其Ct值.根據(jù)埃希菌屬、雙歧桿菌屬、擬桿菌屬及乳酸桿菌屬、梭菌屬、腸球菌屬的16SrRNA 的基因 V3-V6 序列，通過 Premier5.0［4］來設(shè)計(jì)相應(yīng)的菌屬PCR引物，并由BLAST基因庫進(jìn)行引物序列特異性對(duì)比，并計(jì)算Ct的值，最后經(jīng)轉(zhuǎn)換后得出菌屬基因拷貝數(shù).

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，行 t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié)果

2.1 兩組兒童6種腸道菌屬的分布特點(diǎn) 肥胖組兒童乳酸桿菌屬、梭菌屬及腸球菌屬基因拷貝數(shù)顯著高于正常組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而兩組埃希菌屬、雙歧桿菌及擬桿菌數(shù)量相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05，表1).

表1 兩組兒童6種腸道菌屬的分布特點(diǎn) (±s)

表1 兩組兒童6種腸道菌屬的分布特點(diǎn) (±s)

aP ＜0.05 vs正常組.

組別 埃希菌屬 雙歧桿菌屬 擬桿菌屬 乳酸桿菌屬 梭菌屬 腸球菌屬正常組 7.03 ±0.687.11 ±0.456.79 ±0.317.45 ±0.125.58 ±0.716.53 ±0.62肥胖組 7.09 ±0.627.25 ±0.416.81 ±0.327.51 ±0.11a5.86 ±0.71a6.81 ±0.63a

2.2 不同性別間腸道菌屬分布特征 124例兒童中，男童77例，女童47例，雙歧桿菌屬在女童中的數(shù)量低于男童，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表2).

表2 不同性別間腸道菌屬分布特征 (±s)

表2 不同性別間腸道菌屬分布特征 (±s)

aP ＜0.05 vs男童.

組別 n 埃希菌屬 雙歧桿菌屬 擬桿菌屬 乳酸桿菌屬 梭菌屬 腸球菌屬男童 77 6.72 ±0.766.84 ±0.496.61 ±0.457.51 ±0.165 6.58 ±0.437.52 ±0.125.90 ±0.656.43 ±0.63.86 ±0.756.45 ±0.62女童 47 6.70 ±0.756.59 ±0.43a

3 討論

人體腸道內(nèi)存在復(fù)雜的生物群落，細(xì)菌數(shù)量超過了1000種，其基因組信息被并稱為“腸道元基因組”，腸道菌屬關(guān)系著人機(jī)體的能量管理、代謝調(diào)控及免疫應(yīng)答.多項(xiàng)研究證明，腸道菌屬不僅是宿主調(diào)節(jié)吸收營養(yǎng)元素的重要因素，更是影響宿主循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)毒素平衡情況以及宿主肥胖的關(guān)鍵［5］.目前，有關(guān)人腸道菌屬與肥胖體質(zhì)之間聯(lián)系的研究逐漸受到更多人的認(rèn)可，但因腸道菌屬群體數(shù)量龐大，對(duì)于其是否會(huì)引起肥胖的相關(guān)問題，目前研究還不成熟.本研究主要是對(duì)學(xué)齡兒童腸道內(nèi)6種常見的重要菌屬分布特征進(jìn)行分析，對(duì)不同體質(zhì)量的兒童肥胖與腸道菌屬分布特征之間的聯(lián)系進(jìn)行研究［6］.

研究結(jié)果顯示，肥胖組兒童的乳酸桿菌屬、梭菌屬及腸球菌屬下相對(duì)數(shù)量高于正常組兒童，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);兩組間埃希菌屬、雙歧桿菌屬及擬桿菌屬比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05).對(duì)兒童的性別、年齡等資料進(jìn)行分層分析，發(fā)現(xiàn)雙歧桿菌屬在女童中的數(shù)量低于男童，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);其余常見腸道菌與性別、年齡之間的關(guān)系比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05).因此，學(xué)齡兒童腸道菌屬分布受兒童性別及年齡的影響較小，而不同體質(zhì)量肥胖與乳酸桿菌屬、梭菌屬、腸球菌屬的分布特征有著密切的關(guān)系.

［1］劉 利，徐佩茹，李 敏，等.新疆伊犁地區(qū)不同體質(zhì)量學(xué)齡兒童腸道菌屬分布特征分析［J］.中華實(shí)用兒科臨床雜志，2014，29(7):502-505.

［2］葛檣檣.腸道內(nèi)和腸道外感染氣單胞菌的分布、基因分類和耐藥性分析［D］.浙江:溫州醫(yī)科大學(xué)，2013.

［3］高志光，高仁元，伍 雯，等.不同結(jié)腸部位腸道菌群分布特征與結(jié)直腸癌的相關(guān)性研究［C］.中華醫(yī)學(xué)會(huì)腸外腸內(nèi)營養(yǎng)學(xué)分會(huì)第八屆全國腸外腸內(nèi)營養(yǎng)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集.2014.

［4］曹歆軼，林 萍，蔣 平，等.兒童孤獨(dú)癥譜系障礙胃腸道細(xì)菌學(xué)研究的系統(tǒng)綜述［J］.上海精神醫(yī)學(xué)，2013，25(6):342-352.

［5］鄭曉皎.腸道菌-宿主代謝物組的分析平臺(tái)的建立及應(yīng)用［D］.上海:上海交通大學(xué)，2013.

［6］陳祥娥.Heparosan的提取分離及其對(duì)腸道菌作用的研究［D］.山東:山東大學(xué)，2012.