王傳娟 (山東省臨沂市蘭山區(qū)人民醫(yī)院，山東臨沂276000)

0 引言

黃芩也稱山茶根、黃芩茶，為唇形科植物，多年生草本，主根長(zhǎng)大，略呈圓錐狀，外皮褐色，用作藥物時(shí)具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等作用.常用于濕溫、暑溫胸悶嘔惡、濕熱痞滿、瀉痢、黃疸、肺熱咳嗽、高熱煩渴、血熱吐衄、癰腫瘡毒、胎動(dòng)不安等［1］.用作中藥時(shí)具有抗菌、抗真菌、抗病毒、抗炎抗變態(tài)反應(yīng)、抗血小板聚集及抗凝、降血脂的作用.本研究以超聲法和水煮法對(duì)黃芩抑菌作用及有效化學(xué)成分的提取展開分析.

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑 選用上海予華儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-501，成都艾普瑞實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生產(chǎn)的APR-GM-ZYT-5超凈工作臺(tái)，上海一恒科學(xué)儀器有限公司的DHP-9012電熱恒溫培養(yǎng)箱，深圳市力斯特超聲波設(shè)備有限公司的LST-M1超聲波發(fā)生器，按照20、800 及1100 kHz發(fā)生頻率［2］.

1.2 藥品和試劑 選用寶芝堂購入的黃芩中藥材料，經(jīng)過檢測(cè)具有黃芩的所有作用和功效，符合研究條件.選用廣東環(huán)凱生產(chǎn)的MH肉湯、瓊脂批樣機(jī)，其他試劑均為分析純.

1.3 菌種 選用中國食品藥品檢驗(yàn)所提供的實(shí)驗(yàn)用腸炎沙門氏菌ATCC13076.

1.4 提取方法

1.4.1 超聲法 取50 g以上黃芩飲片，置于60℃的容器中進(jìn)行烘干，取出并粉碎后使用10目篩過濾.用天平精確稱取50 g黃芩粗粉，加入10倍量的水，選用20 kHz頻率的超聲發(fā)生器進(jìn)行超聲處理，在處理過程中要隨時(shí)補(bǔ)充水分，保證其溶液液面在同一高度，超聲處理1h后過濾.以鹽酸調(diào)節(jié)濾液 pH至1～2，并置入80℃熱水中預(yù)熱，將提取出的黃色結(jié)晶物過濾，向沉淀物中加入蒸餾水并攪拌，最后向溶液中加入40%的氫氧化鈉，溶解黃芩素后將溶液pH調(diào)節(jié)至6～7.待溶液pH達(dá)到要求后加入等量95%濃度的乙醇，加熱至50℃后再次過濾，用10%鹽酸調(diào)節(jié)濾液pH至2～3，靜置于50℃水浴中30 min，待完全析出結(jié)晶物后，過濾得到結(jié)晶物，并用清水沖洗至中性，置入60℃烘干機(jī)中干燥至恒重，以此獲取黃芩結(jié)晶物，最后配置為10 mg/mL的溶液［3］.

1.4.2 水煮法 取50 g以上黃芩，經(jīng)碾壓制成粉末，通過系統(tǒng)提取法，獲得黃芩提取物，稱取50 g黃芩粉末后加入1 kg蒸餾水并加熱，經(jīng)過煎煮、過濾等操作，獲取溶液后加入濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH至中性，最后加入等體積的95%乙醇，加熱至50℃后再次過濾，用10%鹽酸調(diào)節(jié)濾液pH至2～3，靜置于50℃水浴中30 min，待完全析出結(jié)晶物后，過濾得到結(jié)晶物，并用清水沖洗至中性，置入60℃烘干機(jī)中干燥至恒重，以此獲取黃芩結(jié)晶物，最后配置為10 mg/mL的溶液.

1.5 評(píng)價(jià)指標(biāo) 將3 mL實(shí)驗(yàn)用腸炎沙門氏菌接種于MH肉湯中，并置于37℃環(huán)境下培養(yǎng)，18 h后將菌液稀釋至濁度105FU/mL，然后使用二倍稀釋法進(jìn)行體外抑菌實(shí)驗(yàn)，每個(gè)濃度的實(shí)驗(yàn)均重復(fù)進(jìn)行3次.

2 結(jié)果

2.1 最低抑菌濃度MIC比較 經(jīng)過實(shí)驗(yàn)操作研究，驗(yàn)證了黃芩當(dāng)中的結(jié)晶物所融合的提取液存在抑菌作用，而超聲法提取的黃芩抑菌效果明顯高于水煮法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05，表1).

表1 兩種方法黃芩提取液最低抑菌濃度MIC比較(mg/mL)

2.2 兩組提取結(jié)晶物的抑菌濃度比較 通過兩種不同提取方法所獲得的提取液對(duì)腸炎沙門氏菌的抑菌效果也有所不同，在具有抑菌效果的同時(shí)，超聲法提取黃芩結(jié)晶物的抑菌效果明顯高于水煮法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05，表2).

表2 兩組提取結(jié)晶物的抑菌濃度比較 (mg/mL)

3 討論

黃芩根含黃芩甙元、黃芩甙、漢黃芩素、漢黃芩甙和黃芩新素，其藥理作用有抗炎抗變態(tài)反應(yīng)、抗微生物、解熱、降壓、利尿等.《綱目》中提到:“治風(fēng)熱濕熱頭疼，奔豚熱痛，火咳，肺痿喉腥，諸失血.”說明，黃芩的抑菌作用是其最有價(jià)值的.黃芩甙元能抑制離體氣管及回腸之Sehultz-Dale反應(yīng)，對(duì)豚鼠被動(dòng)性皮膚過敏反應(yīng)、組織胺皮膚反應(yīng)亦表現(xiàn)抑制，在抗變態(tài)反應(yīng)方面，甙元較甙作用強(qiáng).黃芩有較廣的抗菌譜，在試管內(nèi)對(duì)痢疾桿菌、白喉?xiàng)U菌、綠膿桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌以及腦膜炎球菌等均有抑制作用，煎劑作喉頭噴霧，對(duì)腦膜炎帶菌者亦有效.黃芩煎劑100%濃度，平板實(shí)驗(yàn)法對(duì)痢疾桿菌、傷害桿菌、副傷寒桿菌、霍亂弧菌等有明顯的抑制作用.采用黃芩煎劑試管法試驗(yàn)，1∶1280濃度可抑制傷寒桿菌、溶血性鏈球菌，1∶80濃度可抑制宋內(nèi)氏痢疾桿菌.黃芩煎液，試管斜面法試驗(yàn)，4%濃度抑制狗小牙胞菌及堇色毛癬菌.黃芩煎劑25%～100%濃度，體外試驗(yàn)可抑制乙型肝炎病毒DNA復(fù)制.因此，其抑菌作用顯而易見.

在臨床或?qū)嶒?yàn)的過程中，物質(zhì)的相互作用存在一定的制約因素，尤其對(duì)于植物自身所包含的多種多樣的制約因素，植物有效成分的提取方法不同，對(duì)其自身造成的破壞及影響也是不同的.黃芩當(dāng)中的有效成分為抑菌成分，近年來如何有效提取出黃芩的有效抑菌成分成為人們關(guān)注的焦點(diǎn).傳統(tǒng)提取黃芩中黃芩苷的方法為水煮法，通過水煎煮、烘干等方式，但這種方法的提取時(shí)間較長(zhǎng)且提取效率較低.為了提高黃芩苷的提取率，超聲法是目前比較受關(guān)注的方法［4］.

本研究結(jié)果顯示，超聲法提取黃芩的抑菌效果顯著高于水煮法，且提取結(jié)晶物的抑菌效果明顯高于水煮法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05).表明，超聲法提取黃芩抑菌效果優(yōu)于水煮法，更利于分離黃芩的有效成分.含多種黃酮類化合物，主要為黃芩甙(baicalin)，黃芩素(baicalein)，漢黃芩甙(wogonoside)，漢黃芩素(wogonin)，7-甲氧基黃芩素，7-甲氧基去甲基漢黃芩素，黃芩黃酮Ⅰ，黃芩黃酮Ⅱ.近年來，黃芩的有效成分中，無論是單用還是聯(lián)合使用都表現(xiàn)出極強(qiáng)的抗菌功效，因此對(duì)其抗菌作用的研究進(jìn)入了深入階段，對(duì)黃芩藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制的研究更是為研究新型抗菌藥物開辟了新方向.

綜上所述，黃芩具有良好的抑菌作用，通過超聲法可以有效提取出黃芩中的抑菌成分，值得臨床推廣.

［1］郭京華.淺析黃芩有效化學(xué)成分及抑菌作用［J］.中國實(shí)用醫(yī)藥，2012，7(16):195-196.

［2］董 毅.正品黃芩與甘肅黃芩有效化學(xué)成分及抑菌作用的比較研究［J］.中國中醫(yī)藥科技，2010，17(3):226-228.

［3］劉國華，張延敏.黃芩有效化學(xué)成分及抑菌作用分析［J］.中國實(shí)用醫(yī)藥，2012，7(6):168-169.

［4］黃愛萍.黃芩有效化學(xué)成分及抑菌作用的研究分析［J］.光明中醫(yī)，2011，26(7):1356-1357.