王金等

摘要：以蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum imai）為研究對象，以多糖得率衡量超聲波輔助提取工藝。在單因素試驗基礎上，采用L9（34）正交設計優(yōu)化提取工藝。結果表明，影響口蘑多糖得率的因素依次為提取溫度>鹽酸濃度>提取時間>料液比，最佳提取工藝為0.2 mol/L鹽酸、料液比1∶40（g∶mL），50 ℃超聲波提取20 min。在此提取條件下，口蘑多糖的得率為（16.65±0.29）%，該提取方法簡便、快速，可以為蒙古口蘑的質量控制和合理開發(fā)提供參考依據(jù)。

關鍵詞：蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum imai）；多糖；超聲波輔助提取

中圖分類號：S646.9；R284.2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）12-2978-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.12.044

Optimization of Ultrasound-assisted Extraction and Content Determination of Polysaccharide from Tricholoma mongolicum Imai

WANG Jin1，DING Ge-sheng2，TIAN Liu1，YU Cheng-fang1，WANG Zhi-bao1

（1.Department of Pharmacy， Hebei North University， Zhangjiakou 075000， Hebei，China；

2.Chongli Education & Training Center， Zhangjiakou 075000，Hebei， China ）

Abstract：To optimize the ultrasound-assisted extraction process and content determination of polysaccharide from Tricholoma Mongolicum Imai， based on the single factor experiments， an orthogonal array was constructed to achieve the best conditions. The effects of influencing factors were extraction temperature> acid concentration >extraction time >solid-liquid ratio. The optimal conditions were as follows： extraction solvent 0.2 mol/L， solid-liquid ratio 1∶40， extraction time 20 min and extraction temperature 50 ℃. Under these optimal conditions， the polysaccharide yield was （16.65±0.29）%. This extraction method was simple and rapid， which could provide reference for the rational development and quality control of Tricholoma Mongolicum Imai.

Key words：Tricholoma Mongolicum Imai； polysaccharide； ultrasound-assisted extraction

蒙古口蘑（Tricholoma mongolicum imai）又稱白蘑，為白蘑科白蘑屬（口蘑屬）真菌，主要分布于中國河北、內(nèi)蒙古、黑龍江、吉林、遼寧等地區(qū)[1，2]。其菌肉肥厚、質地細嫩、味美獨特，還可供藥用，性平、味甘、宣腸益氣、散熱解表。植物多糖具有豐富的藥理活性，如抗氧化、抗疲勞、降血糖、降血脂、抗腫瘤、免疫調節(jié)、抑制α-葡萄糖苷酶、穩(wěn)定蛋白質等作用[3-10]，因此其研究越來越受到學者的關注。本試驗以去離子水為介質，采用超聲波輔助提取技術提取蒙古口蘑多糖，通過正交試驗優(yōu)化提取工藝，可為其工業(yè)化利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

蒙古口蘑產(chǎn)于河北省張家口市張北草原，干燥粉碎后過60目篩，密封保存?zhèn)溆?。D-葡萄糖購于美國Fisher公司，濃硫酸、苯酚、乙醇均為分析純，水為去離子水。

KQ-250DA型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）、Alc-210型電子天平（賽多利斯集團）。

1.2 試驗方法

1.2.1 口蘑提取液多糖含量測定

1）供試品溶液的制備。稱取口蘑粉末5 g，置于錐形瓶中，加溶劑超聲波提取，提取液3 000 r/min離心5 min，上清液定容至100 mL容量瓶中，得供試品溶液。

2）標準溶液的制備。精密稱取干燥至恒重的標準葡萄糖400 mg，置于100 mL容量瓶中，加去離子水定容至刻度，即得標準溶液。

3）標準曲線的制備。分別精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL標準溶液至25 mL具塞比色管中，加去離子水至終體積為2.0 mL，加5%苯酚溶液1 mL、濃硫酸5.0 mL用去離子水定容，混勻，放置10 min，沸水浴5 min，取出后冰浴冷卻5 min，于490 nm處測定吸光度，同時以去離子水做空白。以吸光度為縱坐標，葡萄糖濃度為橫坐標繪制標準曲線。

1.2.2 單因素試驗

1）提取溶劑。精密稱取口蘑粉末5 g，分別用去離子水，20%、40%、60%、80%和95%乙醇提取，其他條件設定為料液比1∶20（g∶mL，下同）、提取溫度30 ℃、超聲波時間30 min、提取1次，每份做3組平行試驗，考察提取溶劑對口蘑多糖得率的影響。

2）酸濃度。精密稱取口蘑粉末5 g，分別以0.1、0.2、0.3、0.4 mol/L鹽酸溶液提取，其他條件設定為料液比1∶20、提取溫度30 ℃、超聲波時間30 min提取1次，每份做3組平行試驗，考察提取液酸濃度對口蘑多糖得率的影響。

3）料液比。精密稱取口蘑粉末5 g，以0.3 mol/L鹽酸溶液為提取溶劑，料液比分別設定為1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50，提取溫度30 ℃、超聲波時間30 min提取1次，每份做3組平行試驗，考察料液比對口蘑多糖得率的影響。

4）提取時間。精密稱取口蘑粉末5 g，加入40倍量0.3 mol/L鹽酸溶液，提取時間分別設定為20、30、40、50、60 min，提取溫度30 ℃提取1次，每份做3組平行試驗，考察提取時間對口蘑多糖得率的影響。

5）提取溫度。精密稱取口蘑粉末5 g，加入40倍量0.3 mol/L鹽酸溶液，提取溫度分別設定為30、40、50、60、70 ℃，提取時間30 min提取1次，每份做3組平行試驗，考察提取時間對口蘑多糖得率的影響。

1.2.3 正交試驗 按照單因素試驗結果，設計4因素3水平正交試驗對口蘑多糖超聲波提取工藝進行優(yōu)化，因素與水平見表1，試驗結果見表2。

2 結果與分析

2.1 標準曲線

按照“1.2.1”中制備曲線的方法，所得回歸曲線方程為：A=6.025 8C-0.023 8（r=0.999 5），表明葡萄糖溶液在32.0～160.0 μg/mL線性關系良好。

2.2 單因素試驗結果

2.2.1 提取溶劑對多糖得率的影響 提取溶劑對多糖得率的影響見圖1。由圖1可知，隨著乙醇體積分數(shù)的增加，多糖得率隨之降低，用去離子水提取時得率最大，故選擇去離子水作為提取溶劑。

2.2.2 鹽酸濃度對多糖得率的影響 鹽酸濃度對多糖得率的影響見圖2。由圖2可知，鹽酸溶液為0.3 mol/L時多糖得率相對最高，故選擇酸濃度為0.3 mol/L。

2.2.3 料液比對多糖得率的影響 料液比對多糖得率的影響見圖3。由圖3可知，當料液比從1∶10降低到1∶40時，多糖得率隨之增大，當料液比為1∶40時達到最大值，隨后雖然料液比進一步降低，但多糖得率卻有所下降，故提取時選擇的料液比為1∶40。

2.2.4 提取時間對多糖得率的影響 提取時間對多糖得率的影響見圖4。由圖4可知，起初多糖得率隨超聲波時間的增加而增加，當超聲波時間為30 min時達到最大值，超過30 min后，多糖得率卻減少，故選擇超聲波提取時間為30 min。

2.2.5 提取溫度對多糖得率的影響 提取溫度對多糖得率的影響見圖5。由圖5可知，當提取溫度從30 ℃升高到60 ℃時，多糖得率隨溫度升高而增加，且在60 ℃達到最大值。然后繼續(xù)升高提取溫度，多糖得率反而下降，故選擇提取溫度為60 ℃。

2.3 正交試驗結果

在單因素試驗的基礎上，為了進一步考察各因素之間的相互作用，選擇提取時間（A）、鹽酸濃度（B）、料液比（C）和提取溫度（D）為考察因素，設計L9（34）正交試驗，以多糖得率為指標進行試驗，結果見表2。由表2可知，各因素對口蘑多糖得率的影響順序依次為：提取溫度>鹽酸濃度>提取時間>料液比，最佳提取條件為A1B1C2D1，即0.2 mol/L鹽酸、料液比1∶40、提取時間為20 min、提取溫度50 ℃。稱取6份口蘑粉末各10 g，按照前述正交試驗確定的最佳提取條件進行提取，測定多糖得率為（16.65±0.29）%，其結果高于正交試驗各組，說明正交試驗得出的最優(yōu)條件準確可行。精密度試驗的RSD為0.12%，說明儀器精密度良好；重復性試驗的RSD為1.74%，說明該方法重復性良好；標準溶液和樣品溶液顯色后，30 min內(nèi)測定其吸光度RSD分別0.68%和0.92%，說明標準溶液和樣品溶液至少在30 min內(nèi)穩(wěn)定；加樣回收率為95.63%～103.3%，RSD為2.57%，結果表明本方法準確可靠，可用于口蘑多糖的含量測定。

3 小結

試驗采用超聲波輔助法對蒙古口蘑多糖進行提取，通過正交試驗，得到了最佳提取工藝為0.2 mol/L鹽酸、料液比1∶40、提取時間為20 min、提取溫度50 ℃，在此提取條件下，口蘑多糖得率為（16.65±0.29）%。超聲波輔助提取口蘑多糖具有操作簡單、提取率高等特點，可以用于工業(yè)上多糖的生產(chǎn)。

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