細(xì)菌性草魚白頭白嘴病病原的分離與鑒定

羅永成

摘 要：從患病草魚的病灶及肝、脾、腎分離、純化，得到菌株BTBZ-1410，該菌株革蘭氏染色為陰性。經(jīng)生化試驗(yàn)檢測菌株BTBZ-1410為一種黏細(xì)菌（Myxococcus）。將培養(yǎng)的菌株BTBZ-14制成10×109菌落形成單位/毫升的菌懸液，并以0.2毫升/尾進(jìn)行背部肌肉感染，感染草魚8小時(shí)后開始發(fā)病，其癥狀與草魚白頭白嘴病的臨床癥狀相符，生化試驗(yàn)與菌株BTBZ-14一致。試驗(yàn)結(jié)果表明草魚白頭白嘴病的病原為黏細(xì)菌（Myxococcus）。

關(guān)鍵詞：草魚；白頭白嘴??；病原分離鑒定

草魚是我國四大家魚之一，一直是我國淡水養(yǎng)殖的重要品種。然而，在養(yǎng)殖過程中，疾病卻成為草魚養(yǎng)殖中主要障礙之一。白頭白嘴病是危害夏花草魚的嚴(yán)重病害，發(fā)病范圍廣，傳播速度快，死亡率高，給我國淡水養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。白頭白嘴病的特征，在水中能明顯看到“白頭白嘴”的癥狀，撈出水面癥狀不明顯。病魚口唇部至眼部皮膚潰爛，呈白色絮狀，病變造成口部運(yùn)動(dòng)障礙，阻礙正常呼吸，體表癥狀嚴(yán)重的病魚從頭頂部至眼周充血，表現(xiàn)為“紅頭白嘴”。目前，對白頭白嘴病病原分離鑒定的研究很少，本研究從病魚病灶處采取病料，并進(jìn)行病原菌的分離與鑒定，旨在確定細(xì)菌性白頭白嘴病的病原，為該病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

病魚采自丹東東港某養(yǎng)殖場。普通瓊脂平板及鮮血培養(yǎng)基自制。培養(yǎng)基配制及生化試驗(yàn)所用藥品均為分析純，購自北京康潤生物有限公司。

1.2 病原分離

將具有典型癥狀的病魚，用滅菌生理鹽水沖洗體表后，對體表及病灶用75%酒精消毒，用接種環(huán)取其病灶及肝、脾、腎劃線接種于普通瓊脂培養(yǎng)基上，挑選優(yōu)勢菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)。

1.3 病原菌形態(tài)的觀察及細(xì)菌學(xué)檢查

將純化的細(xì)菌置于培養(yǎng)皿內(nèi)25℃培養(yǎng)24小時(shí)，觀察其生長狀況、菌落形態(tài)及其溶血特性等，并采用革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察。

1.4 生化試驗(yàn)

將培養(yǎng)的菌落分別接種到含有各種鑒定試劑的生化試驗(yàn)微量鑒定管中，并進(jìn)行相關(guān)生化試驗(yàn)。試驗(yàn)項(xiàng)目有明膠液化、葡萄糖、淀粉、酪氨酸脫羧酶、分解纖維素、還原硝酸鹽、吸收拘櫞酸鹽、吲哚試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)、分解幾丁質(zhì)、分解七葉靈、過氧化氫酶試驗(yàn)、分解酪素、溶解死細(xì)菌。接種到上述各生化試驗(yàn)微量鑒定管后，置于25℃培養(yǎng)2～3天觀察結(jié)果。

1.5 回感試驗(yàn)

將分離到的草魚白頭白嘴病疑似菌株制成2×109菌落形成單位/毫升菌懸液；將制成的菌懸液及生理鹽水按0.2毫升/尾，注射到試驗(yàn)組及對照組草魚背鰭下方的背部肌肉中。將試驗(yàn)組草魚與對照組草魚隔離飼養(yǎng)，正常投喂飼料，連續(xù)觀察5天，對發(fā)病草魚情況進(jìn)行記錄并對其進(jìn)行解剖檢查、病原菌分離。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原分離與純化

通過病原菌的分離與純化，得到菌株BZ-1410，在普通瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)菌落較小，呈圓形且表面光滑，呈半透明的露珠狀；在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)菌落生長茂盛，呈乳白色、半透明、圓形，表面突起較明顯，周圍形成1毫米左右的溶血環(huán)。

2.2 生化試驗(yàn)鑒定

菌株BZ-1410，革蘭氏染色陰性。生化試驗(yàn)結(jié)果見表1，結(jié)果表明菌株BTBZ-1410為一種黏細(xì)菌（Myxococcus）。

2.3 回感試驗(yàn)結(jié)果

將菌株BTBZ-1410接種試驗(yàn)草魚，試驗(yàn)組草魚在8小時(shí)后開始發(fā)病，病魚自吻端至眼球的一段皮膚潰爛，口張閉失靈而造成呼吸困難，表現(xiàn)白頭白嘴癥狀。病魚表現(xiàn)精神沉郁，反應(yīng)遲鈍，離群獨(dú)游。隨著病程發(fā)展，病變逐漸加重，病魚不僅是眼、鰓、口腔、體表等部的表皮組織出現(xiàn)白色絮狀物，個(gè)別病魚的顱頂和眼部周邊表現(xiàn)充血、腫脹的現(xiàn)象而呈現(xiàn)“紅頭白嘴”癥狀，與臨床癥狀相符。分離病魚病原菌并進(jìn)行生化試驗(yàn)檢測，其結(jié)果與表1相符。

結(jié)果表明，黏細(xì)菌（Myxococcus）為草魚白頭白嘴病的病原菌。

3 討論

草魚白頭白嘴病是我國比較常見的疾病，該病對于夏花草魚影響非常嚴(yán)重，這主要是因?yàn)橄幕ú蒴~個(gè)體處在發(fā)育期間，免疫系統(tǒng)發(fā)育不完全，由于白頭白嘴病是通過表皮侵染的途徑對草魚進(jìn)行感染，而這個(gè)時(shí)期的魚苗體表容易受傷，因此幼魚較易感病。目前，由于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，草魚飼養(yǎng)規(guī)模和養(yǎng)殖密度急劇擴(kuò)大，一些養(yǎng)殖廠采取混養(yǎng)的飼養(yǎng)方法，養(yǎng)殖廠種魚的育苗相對集中且育種的規(guī)模較大，使現(xiàn)在的草魚白頭白嘴病常隨種魚和魚苗傳播，不易根除，且經(jīng)常與其他病癥并發(fā)，導(dǎo)致病理特征不典型，對疾病的及時(shí)發(fā)現(xiàn)和鑒定造成了影響。

目前，對草魚白頭白嘴病的防治方法主要使用生石灰、漂白粉等消毒藥物對魚塘進(jìn)行投放前消毒及飼養(yǎng)過程中的定期潑灑。中草藥雖然相對環(huán)保，減少藥殘，但其應(yīng)用效果不及消毒藥顯著，實(shí)際養(yǎng)殖過程中就增加了草魚患病的風(fēng)險(xiǎn)。對疾病防治最理想的措施是通過疫苗預(yù)防，本文對草魚白頭白嘴病的病原進(jìn)行了分離鑒定，在此基礎(chǔ)上如果能進(jìn)一步研究，將白頭白嘴病的疫苗研究成功并應(yīng)用于生產(chǎn)，該病將不再會(huì)是草魚養(yǎng)殖過程中的威脅。