俄日姐

(青海省海南州興?？h河卡鎮(zhèn)獸醫(yī)站，興海 813300)

布魯氏桿菌病(brucellosis)又稱為布病或布氏菌病，由布魯氏桿菌引起的以流產(chǎn)和發(fā)熱為特征的自然疫源性人畜共患的慢性傳染病，是我國二類動物疫病以及OIE規(guī)定的B類動物疫病[1]。在自然條件下，家畜對布魯氏桿菌的易感性存在種屬差異，羊、牛、豬易感性較強(qiáng)，其中以羊種危害最為嚴(yán)重。布氏桿菌多呈隱性感染，主要侵害牛羊的生殖系統(tǒng)，以妊娠母畜流產(chǎn)和公畜睪丸炎等為主要特征[2]。帶菌動物是人類和其他動物布氏桿菌病的主要傳染源?？赏ㄟ^消化道、呼吸道、交配等傳播，研究發(fā)現(xiàn)吸血類昆蟲(如蜱等)也可傳播布病[3]。因此，為了解掌握青海省海南州興?？h地區(qū)近年來牛羊群的布氏桿菌病的感染水平，切實(shí)做好該地區(qū)牛羊布病的監(jiān)測工作，對牛羊畜產(chǎn)品健康發(fā)展和人類健康都具有重要意義。

目前，有多種血清學(xué)方法用于布氏桿菌病的診斷，常用的檢測方法有試管凝集試驗(yàn)(SAT)、虎紅平板凝集試驗(yàn)(RPST)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)、ELISA、膠體金免疫層析法等。其中虎紅平板凝集試驗(yàn)愛國際上一直沿用，廣泛應(yīng)用于布病的臨床檢測；試管凝集和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)因血清用量大、操作繁雜、檢測速度慢等缺點(diǎn)，臨床檢測方面應(yīng)用較少；但較RBPT特異，因此可作為布病的進(jìn)一步確診[4]。本實(shí)驗(yàn)我們選用虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)兩種方法，先用虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)做初步檢測，再用試管凝集試驗(yàn)做驗(yàn)證性診斷。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

2014～2015年采自青海省海南州興?？h地區(qū)的血清樣品共1746份。其中牛血清232份，羊血清1514份，全部靜脈采血并做好標(biāo)記，擺成斜面，于37℃恒溫培養(yǎng)箱靜置1h，4℃環(huán)境中24h后分離血清，保存待檢。

1.2 主要試劑

布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原，標(biāo)準(zhǔn)陰性和陽性血清及試管凝集抗原，標(biāo)準(zhǔn)陰性和陽性血清，稀釋液(牛用0.5%的石碳酸生理鹽水，羊用0.5%的石碳酸高滲鹽水)均購自哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司。

1.3 檢測方法

首先，將待測血清樣品用布魯氏菌病虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)抗原做平板凝集試驗(yàn)初檢，然后將可疑血清用布魯氏菌病試管凝集實(shí)驗(yàn)抗原作試管凝集試驗(yàn)復(fù)核。平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)具體步驟按照規(guī)程[5]進(jìn)行。

1.4 結(jié)果判定

虎紅平板凝集試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)：在陰、陽性血清對照成立前提下，如果樣品血清出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象的時間在4min以內(nèi)，為陽性；出現(xiàn)凝集現(xiàn)象時間過長或不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象視為陰性。

平板凝集試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)：在陰、陽性血清對照成立前提下，以參照比濁管C為凝集標(biāo)準(zhǔn)，備檢血清1:50及以上滴度出現(xiàn)（++）凝集時，判定為陽性；1:25出現(xiàn)凝集時為可疑，1:25不出現(xiàn)凝集時為陰性。

2 結(jié)果

2.1 初檢

本次實(shí)驗(yàn)中用虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)法共檢測1746份血清樣本。受檢的232份牛血清，檢出1份陽性，陽性率為0.43%，3份可疑血清。受檢的1514份羊血清，檢出4份陽性，陽性率為0.26%，9份可疑血清。為確定初篩陽性及可疑血清樣品，采用試管凝集實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)來作進(jìn)一步的結(jié)果判定。

2.2 復(fù)檢

將所有陽性血清和可疑血清均采用試管凝集實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，陽性和可疑的牛羊血清稀釋1：25，1：50，1：100三個滴度，結(jié)果在均無凝集現(xiàn)象，未檢出陽性血清。

3 討論

目前尚且沒有一種是特別理想的布氏桿菌病的檢測方法，雖然虎紅平板凝集試驗(yàn)存在假陽性現(xiàn)象，但操作簡便，適合大規(guī)模流行病學(xué)篩查[6]，本實(shí)驗(yàn)中筆者結(jié)合試管凝集試驗(yàn)做為驗(yàn)證方法，最終結(jié)果以試管凝集試驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)。通過對海南州興?？h地區(qū)的1746份牛羊血清進(jìn)行布氏桿菌血清抗體的檢測，結(jié)果顯示受檢的232份牛血清，檢出1份陽性，陽性率為0.43%，3份可疑血清。受檢的1514份羊血清，檢出4份陽性，陽性率為0.26%，9份可疑血清。但經(jīng)試管凝集實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)未檢出陽性血清，表明我國對布氏桿菌病采取的監(jiān)測凈化防控措施，取得了很好的效果。說明我國對布氏桿菌病采取的疫苗接種和檢疫、撲殺的防控策略，取得了很好的效果。

但是，目前依然不能松懈，布病防治工作是一項(xiàng)系統(tǒng)工程，必須堅(jiān)持以預(yù)防為主的防控策略，加強(qiáng)對布氏桿菌病的監(jiān)測，淘汰凈化陽性病畜，以防布氏桿菌病再度蔓延。近年來，我國布病大規(guī)模暴發(fā)流行逐漸減少，小規(guī)模、分散、多點(diǎn)的流行較常見，典型病例增多[7]。我們要根據(jù)布病新的流行特點(diǎn)，堅(jiān)持以預(yù)防為主，對健康畜群，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，每年定期預(yù)防免疫，堅(jiān)持自繁自養(yǎng)的方針。相關(guān)部門應(yīng)進(jìn)一步加大布病檢疫檢測、免疫預(yù)防、流通監(jiān)管、撲殺凈化等防控措施實(shí)施力度，按計(jì)劃接種布氏桿菌病疫苗，進(jìn)一步加大無害化處理、市場流通監(jiān)管等防控措施的力度，切斷傳染源及傳播途徑，積極有效的防控布病的發(fā)生和傳播。

[1]陳俊，吳敏，施永超，等.布魯氏菌病的研究進(jìn)展[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊：2014,(1)：24-25.

[2]王彩茹，王艷梅.羊布魯氏桿菌病的診治與防治[J].河南畜牧獸醫(yī):2014,35（3）:47.

[3]許存有.樂都縣牛羊布氏桿菌病的血清學(xué)調(diào)查[J].青海畜牧獸醫(yī)雜志，2013,43(4):21-22.

[4]張瑞.牛羊布氏桿菌病的血清學(xué)檢測調(diào)查[J].新疆畜牧業(yè)，2012，(5)：56-58.

[5]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫局.SNI1090—2002布氏桿菌病試管凝集試驗(yàn)操作規(guī)程[M].北京，2003.

[6]樊三忠，劉金彪，陳冬毅，等.虎紅平板凝集試驗(yàn)與試管凝集試驗(yàn)檢測奶牛布魯茵病的比較[J].中國動物檢疫，2009，(9)：43.

[7]任皓，仉明亮，王濤，等.米東區(qū)牛羊布氏桿菌病的血清學(xué)調(diào)查[J].新疆畜牧業(yè)，2015，(2)：41-45.