舒 展 呂春華 葉爾肯 安納斯 黃楊波

(新疆阿勒泰地區(qū)動物疾病控制與診斷中心，新疆 阿勒泰市836500)

牛結(jié)核病的主要臨床特征表現(xiàn)為病程緩慢、咳嗽以及漸進(jìn)性消瘦，衰竭病理特征主要為多種組織器官形成結(jié)節(jié)狀、肉芽腫結(jié)核結(jié)節(jié)、干酪樣壞死和鈣化病灶等。牛結(jié)核病傳染性極強(qiáng)，一年四季皆可發(fā)病，同時(shí)會從奶制品等渠道傳染人與犢牛，危害性較大。要想從源頭上對牛結(jié)核病進(jìn)行控制，就應(yīng)當(dāng)做好對其的臨床診斷，從而為控制該病提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持[1]。為掌握牛結(jié)核病疫情的實(shí)際發(fā)病情況，筆者選擇膠體金試紙條檢測的手段，同時(shí)通過結(jié)核菌素皮下注射來實(shí)施對比試驗(yàn)。

1 材料與實(shí)驗(yàn)方法

1.1 材料

選取來源于本地區(qū)的某縣某鄉(xiāng)隨機(jī)采取的牛血清860頭份，另準(zhǔn)備結(jié)核菌素、牛結(jié)核MPB70/83抗體膠體金檢測試紙、20ul定量吸管或加樣槍、酒精紗布、注射器、塑料吸頭、卡尺、剪刀以及工作衣帽等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 牛結(jié)核MPB70/83抗體膠體金檢測實(shí)驗(yàn)方法

選取待檢測牛血清20-80μL，將其慢慢加入牛結(jié)核MPB70/83抗體膠體金檢測試紙條樣品孔處，可發(fā)現(xiàn)在試紙條上出現(xiàn)紅色條帶移動。但如果若5分鐘仍未出現(xiàn)條帶移動，需再在樣品孔中滴入檢測血清1滴，十分鐘后再觀察，若超過半小時(shí)仍未出現(xiàn)結(jié)果則應(yīng)舍棄改組實(shí)驗(yàn)。若室內(nèi)溫度低于18℃，則應(yīng)相應(yīng)延長觀察結(jié)果時(shí)間。

判斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）陰性，指在檢測試紙條上只發(fā)現(xiàn)一條呈紫紅色的參考帶；（2）陽性，指在檢測試紙條上發(fā)現(xiàn)檢測帶、參考帶兩條呈紫紅色條帶；（3）無效，是指在檢測試紙條上未發(fā)現(xiàn)任何條帶。

1.2.2 結(jié)核菌素皮下實(shí)驗(yàn)方法

先將牛進(jìn)行編號，在選號牛頸部中上位置的1/3處，直徑為10cm范圍內(nèi)的毛發(fā)全部剪掉作為手術(shù)部位，接著用卡尺測量該范圍中央皮皺的厚度，并記錄。然后用75%酒精或5%碘酒紗布對術(shù)部進(jìn)行消毒，在皮下注射0.1mL結(jié)核菌素，注射過后可發(fā)現(xiàn)局部產(chǎn)生小泡。注射后3天、5天分別觀察注射部位是否出現(xiàn)腫脹、疼痛以及發(fā)炎等異常情況，然后再用卡尺測量腫脹面積大小以及中央皮皺厚度，記錄數(shù)據(jù)。觀察3天后，針對出現(xiàn)陰性或者可疑反應(yīng)的牧牛，必須在之前注射位置處再注射同等計(jì)量的結(jié)核菌素。然后注射2天后進(jìn)行觀察，具體觀察項(xiàng)目同前，做好相應(yīng)數(shù)據(jù)記錄。

判斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）陰性反應(yīng)，即手術(shù)部位未出現(xiàn)炎性水中，皮差小于2mm，或是只出現(xiàn)硬結(jié)節(jié)的牛；（2）可疑反應(yīng)，是指發(fā)生炎性水腫的面積小于3.5cm*4.5cm，同時(shí)皮差介于0.5cm-0.8cm之間，即表示可疑反應(yīng)；（3）陽性反應(yīng)，是指局部出現(xiàn)發(fā)熱、疼痛，發(fā)生彌漫性水腫，界限不明確、堅(jiān)硬度如面團(tuán)，水腫面積大于3.5cm*4.5cm。另外，若出現(xiàn)上訴反應(yīng)，但癥狀較輕，并且皮差大于0.8cm，也稱為陽性反應(yīng)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析

2.1 牛結(jié)核MPB70/83抗體膠體金檢測結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果未出現(xiàn)無效結(jié)果，陽性結(jié)果為在膠體金快速檢測試紙條上發(fā)現(xiàn)質(zhì)控線及檢測線，陰性結(jié)果則只在膠體金檢測試紙條上出現(xiàn)質(zhì)控線。

2.2 結(jié)核菌素皮下注射反應(yīng)和牛結(jié)核MPB70/83抗體膠體金檢測結(jié)果

在860頭牛血清樣本中，用牛結(jié)核MPB70/83抗體膠體金檢測試紙條檢測牛結(jié)核病，將結(jié)果與皮下注射結(jié)核菌素產(chǎn)生的反應(yīng)結(jié)果做比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：皮下注射陽性反應(yīng)為18頭，膠體金試紙條檢測陽性結(jié)果為16頭，兩組陽性結(jié)果符合率為89%（16/18）；陰性結(jié)果皮下注射為812頭，膠體金試紙條檢測陰性結(jié)果為838頭，兩組陰性結(jié)果符合率為97%（812/838。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

針對結(jié)核菌素皮下注射反應(yīng)以及膠體金試紙條檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并利用X2進(jìn)行檢驗(yàn)，得出結(jié)論牛結(jié)核MPB70/83抗體膠體金試紙條檢測與結(jié)核菌素皮下注射檢測具有較高的符合率。

3 結(jié)果

牛結(jié)核病主要是牛分枝桿菌所導(dǎo)致的一種能夠人畜共患的傳染病，此病一直以來都在很大程度上威脅著人類與動物的生命健康，同時(shí)也給社會帶來了非常大的損失。近年來，國內(nèi)牛結(jié)核疫情受到了越來越多的關(guān)注。由本文分析結(jié)果表明，牛結(jié)核MPB70/83抗體膠體金試紙檢測與結(jié)核菌素皮下注射檢測結(jié)果兩者之間差異較小，具有較高的符合率。并且，膠體金快速檢測試紙條在檢測過程中具有方便、快捷、敏感以及特異性的優(yōu)勢，因而十分適合用于對牛結(jié)核病的檢測和普查，同時(shí)還能夠?yàn)榻Y(jié)核菌素皮下注射反應(yīng)結(jié)果提供一定的輔助診斷，在針對牛結(jié)核病的普查及根除計(jì)劃中擁有遼闊的發(fā)展前景。

[1]莊金秋，梅建國，沈志強(qiáng).膠體金免疫層析技術(shù)在獸醫(yī)臨床診斷中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國動物檢疫，2012，(09)：70-75.