段 龍，李學(xué)釗，田啟會(huì)

（甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，甘肅 武威733006）

疫苗（Vaccine）是用于預(yù)防傳染病的抗原制劑，通常用鈍化、弱化或無(wú)害的病原體或其產(chǎn)物制成，用以刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性免疫力。目前，新城疫（ND）疫苗主要有弱毒疫苗、滅活疫苗等常規(guī)疫苗，重組活載體疫苗、亞單位疫苗、DNA 疫苗、核酸疫苗等基因工程疫苗。

1 常規(guī)疫苗

1.1 滅活疫苗

滅活疫苗是經(jīng)處理而致死的病原體，安全性好，免疫應(yīng)激反應(yīng)小，一次免疫持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，利于制造聯(lián)合苗或多價(jià)苗。聯(lián)合苗或多價(jià)苗通常包括傳染性支氣管炎病毒疫苗、傳染性法氏囊病病毒疫苗、產(chǎn)蛋下降綜合征病毒疫苗以及呼腸孤病毒疫苗等，同時(shí)用于多種疫病的免疫預(yù)防，存儲(chǔ)也比較方便。ND 乳油劑滅活苗多用Ⅳ系疫苗制備，通常需要添加佐劑。目前，疫苗效力已達(dá)到國(guó)際上要求的滅活苗標(biāo)準(zhǔn)，可用于任何年齡的雞。

1.2 弱毒活疫苗

活疫苗一般由感染胚尿囊液凍干而成，通過(guò)飲水、進(jìn)食、噴霧、氣霧等途徑大規(guī)模免疫雞群，為目前市場(chǎng)上最常見(jiàn)的疫苗，通常NDV 活疫苗分為緩發(fā)型和中發(fā)型兩種。緩發(fā)型疫苗主要包括F 株、V4株、B1 株、LaSota株、Ulsterzc株以及由LaSota株克隆得到的C30株與N-79株；中發(fā)型疫苗主要包括 Roakin 株、Komarov 株、Mukteswar 株、Hertlordshire株（又稱H 株）等。緩發(fā)型疫苗一般用于雛雞的首次免疫。Hitchner和Johnson發(fā)現(xiàn)的B1株是一種天然弱毒株，幾乎無(wú)致病性，不能完全致死雞胚，可經(jīng)滴鼻、點(diǎn)眼、飲水、氣霧等多種途徑接種免疫，均能達(dá)到良好的保護(hù)效果。另外，La Sota株也是天然弱毒株，比B1株毒力稍強(qiáng)，為我國(guó)最常用的活疫苗之一。對(duì)于中發(fā)型的疫苗如H 株、Roakin株等由于毒力較強(qiáng)，只能用于二次免疫。

2 基因工程疫苗

2.1 DNA 疫苗

DNA 疫苗是近年來(lái)發(fā)展的一項(xiàng)新型生物技術(shù)，DNA 疫苗與其它疫苗相比，具有易設(shè)計(jì)、穩(wěn)定性好、可以誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫、免疫效果好等優(yōu)點(diǎn)，是目前動(dòng)物疫苗研究的重要方向之一。DNA 疫苗是將編碼抗原蛋白的外源性基因DNA 克隆到真核質(zhì)粒表達(dá)載體上，進(jìn)而將重組質(zhì)粒DNA 直接注射到動(dòng)物體內(nèi)，使外源基因通過(guò)宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄表達(dá)系統(tǒng)合成抗原蛋白，從而激活被免機(jī)體的免疫反應(yīng)，進(jìn)而誘發(fā)免疫應(yīng)答。許發(fā)芝等以雞恒定鏈（Ii）作為載體，將雞ND 病毒F蛋白表位基因DNA 疫苗，經(jīng)3次免疫小白鼠后，結(jié)果表明雞恒定鏈作為載體的雞ND 基因DNA 疫苗能夠有效刺激小白鼠產(chǎn)生特異性的抗體免疫應(yīng)答。潘志明等將雞ND 病毒融合蛋白F 基因克隆入真核表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化到減毒鼠傷寒沙門氏菌，獲得了運(yùn)送雞ND 病毒F 融合蛋白的DNA 疫苗重組沙門氏菌。兩次免疫小白鼠后，檢測(cè)到特異性雞NDF 蛋白血清抗體和小腸黏膜抗體。表明該運(yùn)送雞ND 病毒F融合蛋白的DNA 疫苗減毒沙門氏菌系統(tǒng)，在免疫機(jī)體內(nèi)能成功釋放所攜帶的質(zhì)粒，能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答，并可以對(duì)雞ND 強(qiáng)毒株的攻毒試驗(yàn)產(chǎn)生良好的免疫保護(hù)作用。

2.2 亞單位疫苗

亞單位疫苗是利用重組DNA 技術(shù)，將新城疫病毒保護(hù)性抗原基因通過(guò)載體在表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行抗原表達(dá)，加以佐劑制成的疫苗，具有穩(wěn)定、安全、產(chǎn)量高、易于大規(guī)模生產(chǎn)以及表達(dá)產(chǎn)物和天然抗原相似等優(yōu)點(diǎn)，是近年來(lái)雞ND 疫苗研究發(fā)展的一個(gè)重要方向。桿狀病毒載體系統(tǒng)是目前研究開(kāi)發(fā)ND 亞單位疫苗的主要工具，是以昆蟲(chóng)桿狀病毒作為載體系統(tǒng)，將昆蟲(chóng)或昆蟲(chóng)細(xì)胞作為受體細(xì)胞表達(dá)目標(biāo)抗原。曾黎平等將雞ND 強(qiáng)毒株F48E8的F 和HN 基因核心片斷，克隆到桿狀病毒載體上，得到了糖基化的F和HN 抗原蛋白表達(dá)產(chǎn)物。丁壯等應(yīng)用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)了雞ND 四平株和長(zhǎng)春株兩個(gè)分離株的HN 蛋白。表明表達(dá)的雞NDHN 重組蛋白能夠誘導(dǎo)雞體產(chǎn)生抗雞ND 特異性IgG 抗體和HI抗體。制備的疫苗免疫雞群后，用雞ND 強(qiáng)毒株F48E8進(jìn)行攻毒試驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)表達(dá)的HN 抗原蛋白對(duì)雞ND 四平株的保護(hù)率達(dá)到65%，對(duì)雞ND 長(zhǎng)春株的保護(hù)率則達(dá)到了100%。

2.3 重組活載體疫苗

雖然DNA 疫苗和亞單位苗均顯示了良好的免疫性能，但因受到價(jià)格的限制往往難以實(shí)際推廣應(yīng)用。因此，研究者利用雞痘病毒、火雞皰疹病毒或者某些細(xì)菌作為載體，克隆插入ND 病毒HN 基因或者F 基因，通過(guò)接種動(dòng)物，使得接種雞群獲得免疫保護(hù)作用。活載體疫苗的載體病毒或細(xì)菌表達(dá)目標(biāo)抗原可以最大限度地不受接種動(dòng)物體內(nèi)新城疫抗體的干擾，其中以重組痘病毒和皰疹病毒研究最為深入。張?bào)w銀等用雞ND 病毒F 基因，克隆構(gòu)建雞ND 重組雞痘病毒活載體疫苗。免疫1日齡的SPF雞群，試驗(yàn)雞群沒(méi)有發(fā)生任何臨床癥狀，免疫商品蛋雞群后，用雞ND 強(qiáng)毒株進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)活載體疫苗對(duì)試驗(yàn)雞的保護(hù)率達(dá)到100%，表明雞ND 雞痘病毒活載體疫苗具有良好的安全性能和免疫效果。甘軍紀(jì)等用表達(dá)雞NDHN 基因的重組雞痘病毒活載體疫苗，免疫14日齡的SPF 雞群，7d后即可檢測(cè)到雞NDHI 抗體。用雞ND 強(qiáng)毒株F48E8進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，保護(hù)率達(dá)到100%。4周后進(jìn)行二免，發(fā)現(xiàn)可明顯提高機(jī)體的體液免疫應(yīng)答水平，對(duì)雞ND 強(qiáng)毒株F48E8 攻擊的保護(hù)率仍然為100%。綜上所述，以雞痘病毒為載體研制的NDV重組疫苗已顯示良好的免疫效果，與傳統(tǒng)的疫苗相比，具有高效、安全等優(yōu)點(diǎn)，可同時(shí)預(yù)防禽痘病毒的感染，并可在載體中同時(shí)表達(dá)其他病毒基因，起到一苗防多病的作用。

2.4 病毒樣顆粒疫苗

病毒樣顆粒（virus-like paeticles，VLPs）是指利用異源宿主系統(tǒng)表達(dá)的病毒結(jié)構(gòu)蛋白自行組裝成不含病毒基因組、不能復(fù)制、不具有感染能力的病毒樣蛋白顆粒。VLPs具備構(gòu)想逼真、安全、穩(wěn)定、可刺激體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答、作為載體表達(dá)其他抗原以及可設(shè)計(jì)成區(qū)分自然感染與免疫接種等諸多優(yōu)點(diǎn)，使得VLPs在過(guò)去30年中成為新一代疫苗制備平臺(tái)。目前，在市場(chǎng)上使用和臨床研發(fā)中的VLPs疫苗至少35種以上。

McGinnes等將RSV 的F 和G 蛋白同時(shí)整合到新城疫VLPs骨架中，經(jīng)小鼠免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)證實(shí)，以新城疫VLPs為骨架的呼吸道合胞體病毒疫苗與其他非復(fù)制型呼吸道合胞體病毒候選疫苗相比，具有較好的免疫保護(hù)效果。Sheng等以禽流感病毒M1蛋白為骨架，構(gòu)建了含有禽流感病毒HA基因和新城疫病毒HN 基因胞外片段的VLPs，結(jié)果顯示該VLPs疫苗能同時(shí)產(chǎn)生針對(duì)禽流感和新城疫的特異性抗體，而且能抵御NDV 強(qiáng)毒F48E9株的攻擊。韓國(guó)建國(guó)大學(xué)科研人員應(yīng)用昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)研制出表達(dá)新城疫病毒（NDV）F 蛋白和流感病毒M1蛋白的NDV 病毒樣顆粒（VLP）。SPF 雞分別免疫含不同劑量VLP（0.8、4、20、100μg／mL）的NDV VLP油乳劑疫苗。同時(shí)用NDV 強(qiáng)毒株進(jìn)行攻毒試驗(yàn)以評(píng)估NDV VLP 疫苗對(duì)SPF 雞的保護(hù)效果，結(jié)果顯示NDV VLP 疫苗免疫后可產(chǎn)生大量抗NDV 的抗體，且SPF 雞對(duì)NDV 強(qiáng)毒株的抵抗力與NDV VLP疫苗免疫劑量相關(guān)。

［1］ 周德慶.微生物學(xué)教程（第三版）［M］.北京：高等教育出版社，2011：319.

［2］ 王賀民，秦素琴，魏濤.雞新城疫疫苗研究進(jìn)展［J］.中國(guó)家禽，2006，28（18）：48-49.

［3］ 武發(fā)菊，劉學(xué)榮，尚勇良，等.新城疫疫苗的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2011，38（10）：145-145.

［4］ 鄧茂剛.新城疫疫苗研究進(jìn)展［J］.畜牧與獸醫(yī)雜志，2007，26（4）：50-51.

［5］ 李學(xué)釗，宋鴻雁，劉根新，等.雞球蟲(chóng)DNA 疫苗研究進(jìn)展［J］.畜牧與獸醫(yī)，2011，43（8）：95-99.

［6］ 許發(fā)芝，葉紅，余為一.以雞恒定鏈（Ii）為載體的新城疫病毒F蛋白表位基因疫苗的免疫原性［J］.農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2010，18（6）：1215-1220.

［7］ 潘志明，焦新安，唐麗華，等.攜帶新城疫病毒F 基因DNA 疫苗的減毒鼠傷寒沙門氏菌的構(gòu)建及其免疫原性［J］.中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2007，27（1）：17-21.

［8］ 曾黎平，王萍，烏慧玲，等.新城疫病毒F和HN 核心片段在桿狀病毒中的表達(dá)［J］.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，27（1）：114-118.

［9］ 丁壯，金寧一，王興龍，等.雞新城疫病毒HN 基因亞單位疫苗誘導(dǎo)免疫保護(hù)的實(shí)驗(yàn)研究［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2002，23（1）：49-51.

［10］ 張?bào)w銀.表達(dá)ZJ-1株新城疫病毒F基因重組雞痘病毒的篩選及其免疫效力試驗(yàn)［D］.揚(yáng)州大學(xué)，2004.

［11］ 甘軍紀(jì)，陶鴿，張勝文，等.雞新城疫重組雞痘病毒活疫苗的免疫持續(xù)期和加強(qiáng)免疫研究［J］.中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，31（12）：1681-1685.

［12］ 戈勝?gòu)?qiáng)，趙明，吳曉東，等.新城疫病毒樣顆粒研究進(jìn)展［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2014，45（6）：686-688.

［13］ Mcginnes LW，Gravel KA，F(xiàn)inberg RW，et al.Assembly and immunological properties of New-castle disease virus-like particles containing the re-spiratory syncytial virus F and G proteins［J］.J VIR-OL，2011，85（1）：366-377.

［14］ Shen H，Xue C，Lv L，et al.Assembly and immunological properties of a bivalent virus-like particle（VLP）for avian influenza and Newcastle disease［J］.virus Res，2013，178（2）：430-436.

［15］ 朱靜.病毒樣顆粒疫苗可能用于控制雞新城疫［J］.中國(guó)家禽，2014，36（4）：66-67.