劉海青，范 微，張靜宵，劉巴睿，張發(fā)榮，加 洛，陶元清

（青海省地方病預防控制所，西寧 811602）

喜馬拉雅旱獺的人工繁育技術

劉海青，范 微，張靜宵，劉巴睿，張發(fā)榮，加 洛，陶元清

（青海省地方病預防控制所，西寧 811602）

目的對野生來源喜馬拉雅旱獺的繁殖性能及仔獺的哺育方法進行研究，探索經(jīng)濟實用、規(guī)?；姆敝撤椒?，取代以往從野外獲取試驗用旱獺的方式。方法提供適合的飼養(yǎng)環(huán)境和條件，由母喜馬拉雅旱獺自然哺育新生喜馬拉雅旱獺，統(tǒng)計懷孕率、產(chǎn)仔數(shù)、成活率、觀察仔獺生長情況。結果建立了56對旱獺繁殖群，成功離乳92只F1代旱獺，自然繁殖成活率為90.76％。目前已建立野生來源喜馬拉雅旱獺繁殖群50對，F(xiàn)1代繁殖群20對，為建立達到標準要求的喜馬拉雅旱獺種群奠定了基礎。結論該方法的喜馬拉雅旱獺繁殖率和成活率較高，成本低且操作簡單，為喜馬拉雅旱獺實驗動物化奠定了基礎。

喜馬拉雅旱獺；規(guī)?；敝?；自然哺育

喜馬拉雅旱獺（Marmota himalayana）屬嚙齒目（Rodentia）松鼠科（Sciuridae）旱獺屬（Marmota）的大型地棲性嚙齒動物，為青藏高原特有種，是我國哺乳動物資源開發(fā)利用的重點對象之一。喜馬拉雅旱獺作為我國特有的生物資源，在人類乙型肝炎（乙肝）、艾滋病、心血管疾病、肥胖、腫瘤、烈性傳染?。ㄈ缡笠撸┌l(fā)病機制研究以及相關藥理學、毒理學評價、化妝品制造等諸多領域具有廣泛的應用前景［1-3］。將其培育為新型的具有知識產(chǎn)權的實驗動物新品種，對帶動我國生物醫(yī)藥、重大傳染病防控和疫苗研發(fā)具有重要意義。自2009年以來，對喜馬拉雅旱獺進行了人工條件下的繁育技術研究，成功建立了56對繁殖種群和一套旱獺批量化繁育技術，為實現(xiàn)喜馬拉雅旱獺的實驗動物化奠定了基礎。

1 材料和方法

1.1 動物

喜馬拉雅旱獺來自青海省黃南州同仁縣非鼠疫疫區(qū)。在2009年7～9月份，采用圈套法安全捕獲青年旱獺；為了避免動物在繁殖過程中發(fā)生近親交配，所有動物進行了編號；根據(jù)生物安全規(guī)范，采取了15d的隔離檢疫，包括：按體重肌肉注射高效低毒的驅蟲劑伊維菌素以驅除旱獺蛔蟲和螨、蜱、虱等旱獺攜帶的常見體內(nèi)外寄生蟲；按國家標準進行弓形體、鼠疫、布魯氏菌等人獸共患病和影響旱獺健康的嗜肝病毒的檢驗，所有檢驗項目均為陰性。在所捕動物中，挑選個體適中（體重3～5kg），年齡2～4周歲的發(fā)育良好的旱獺56對（性別比例1∶1），用安全結實的運輸籠快速運抵位于青海西寧的旱獺飼養(yǎng)繁育基地。

1.2 環(huán)境條件

根據(jù)旱獺的野外生物學特性和生活習性，模擬旱獺野外環(huán)境修建了培育場所，動物圈舍設計為封閉式棚舍，用建筑用磚、鋼筋和水泥等材料做成高1.5m，長3.0m，寬2.5m長方形飼養(yǎng)繁殖池。飼養(yǎng)繁殖池由動物休息和隱藏區(qū)、動物活動和采食飲水區(qū)以及動物排便區(qū)等部分組成，池內(nèi)動物休息和隱藏區(qū)鋪設0.6m厚的蓬松麥草、牧草或蘆葦?shù)葔|草，所鋪墊草必須沒有噴灑影響動物繁殖的農(nóng)藥，經(jīng)日光曝曬，除去雜質和灰塵；飼養(yǎng)池內(nèi)動物活動、采食、排便區(qū)離地面0.5m高處水平鋪設鋼筋網(wǎng)格做漏糞板，網(wǎng)格大小3cm×3cm；整個飼養(yǎng)培育室在啟用1個月前開始衛(wèi)生處理，包括：打掃、清潔除塵；密閉房間，福爾馬林熏蒸24h后，通風5d；5％過氧乙酸消毒液噴霧消毒；培育室所用器具如掃把、拖布、飼料盒、飲水盒等也一并放于培育室經(jīng)福爾馬林、過氧乙酸消毒。

飼養(yǎng)培育室主要環(huán)境指標：3～11月（非冬眠期）室內(nèi)最適溫度18～20℃；相對濕度40％～50％；光照可以為自然光照和日光燈，照度控制在60Lx以下；旱獺為穴居動物，怕風，飼養(yǎng)室保持自然通風，風速小于0.2m/s；室內(nèi)氨氣濃度小于10mg/m3。每天清除動物培育池隔糞板下糞尿；每周更換墊草1次；噪音小于50dB。

1.3 飼料和飲水

旱獺從產(chǎn)地運抵繁育基地第一個月每天每只飼喂100g胡蘿卜、200～250g白菜和更換飲水1次，自由采食；一般從第二個月后，動物開始逐步適應人工飼養(yǎng)環(huán)境，對外界干擾已不再敏感。此時開始定時飼喂、調(diào)整日糧結構、添加微量成分等。根據(jù)旱獺在原產(chǎn)地采食主要以莎草科、禾本科植物的葉、莖、豆科植物的花和種子為食的習性，7～9月飼喂牧草，陰干后測定營養(yǎng)成分。經(jīng)測定旱獺原產(chǎn)地陰干牧草飼料營養(yǎng)成分指標為：粗蛋白10％、粗脂肪3％、粗纖維70％、粗灰分6％、水分2％；在此基礎上，選用苜蓿粉、麩皮、玉米粉為基礎日糧，添加食鹽、復合維生素和微量元素等添加劑制成配合飼料，配方為苜蓿粉48％，麩皮30％，玉米粉20％，鹽1％，酵母粉0.95％，微量元素0.05％，性狀為干燥顆粒飼料，直徑0.5cm，長度3～5cm，呈棒狀。每天6：00、12：00、18：00定時飼喂。飲水為pH 2.5～2.8的酸化水。

1.4 方法

1.4.1 旱獺的管理

野生旱獺安全運抵飼養(yǎng)繁育基地后，進行動物臨床健康檢查，選取體格健壯，肥瘦適中，四肢有力，反應敏感、行動活潑；被毛光亮，眼睛鮮亮有神、無分泌物；鼻孔干凈，呼吸正常；肛門干凈，糞粒均勻的旱獺作為種群動物。在驅治體內(nèi)外寄生蟲后，放置于經(jīng)過消毒的飼養(yǎng)繁殖設施，開始人工條件下的飼養(yǎng)繁殖。動物關入籠內(nèi)的第1個月為動物高度緊張期，對外界干擾反應強烈。為減少干擾，降低動物應激，固定人員負責飼養(yǎng)管理，并多接觸動物。通過飼喂動物喜食的食物（甘藍、香蕉、蘋果等）建立條件反射和培養(yǎng)感情，約一個月時間可逐漸消除懼怕人的心理。每天上午清掃室內(nèi)衛(wèi)生，換洗籠具托糞盤1次；隔周2％來蘇爾、2％過氧乙酸或強力消毒靈等消毒液輪換消毒飼養(yǎng)設施一次。旱獺為冬眠動物，在11月份底進入冬眠期，至翌年3月初冬眠動物陸續(xù)出蟄，不同階段采取不同的方法進行動物的管理。

1.4.2 種群旱獺的冬眠前管理

9月份種群旱獺運抵繁育基地后，經(jīng)過2個月的人工飼養(yǎng)即進入冬眠期。為保證旱獺安全度過第一個人工飼養(yǎng)條件下的冬眠期，動物能儲存足夠的冬眠所需能量，10月和11月份，每只動物每日增加投食量至500g，隨吃隨加，使其自由采食和飲水。

1.4.3 種群旱獺的冬眠期管理

旱獺從11月初開始冬眠，翌年3月初出蟄。11月底開始冬眠前的準備工作，主要包括：徹底更換墊草，墊草盡力壓實，鋪滿休息區(qū)；觀察動物活動和采食飲水停止后，關閉門窗，保持室內(nèi)溫度在0℃～5℃，相對濕度30％～40％；減少人員進出，避免噪音，使動物自然進入冬眠狀態(tài)。

1.4.4 出蟄期動物的管理

出蟄前15d飲水盒保持足夠的飲水，少量供應顆粒料，避免動物因暴食帶來不適；第16天開始，增加顆粒料的供應量，并飼喂50～100g麥芽；此階段亦為動物交配期，盡量減少干擾，特別是不能突然出現(xiàn)刺激的噪音；保持室溫在10℃～15℃，相對濕度20％～30％，增加人工光源，光照時間早6時至晚7時，光照強度50～60Lx。

1.4.5 繁殖期動物的管理

3月底至5月中旬為旱獺繁殖期，一般成功交配的動物在4月25日至5月10日產(chǎn)仔。人為驚動會導致母獺流產(chǎn)或食仔。為保證動物的繁殖，3月底至5月管理上采用全封閉措施，除飼養(yǎng)員外，禁止其他人員進出繁殖室，日常衛(wèi)生清掃管理由每天1次減少為3～5d 1次；室內(nèi)最適溫度18～20℃；相對濕度40％～50％；增加人工光源，光照時間調(diào)節(jié)為14h明，10h暗，光照強度保持在100～120Lx。此時，切不可翻動動物巢穴內(nèi)的墊草以免破壞動物所筑的產(chǎn)仔用草窩；動物分娩后飲水量加大，因此要保證飲水足量供應。

1.4.6 哺乳期管理

5月初至7月中旬為繁殖旱獺哺乳期。為保證動物的哺乳，此期間每天進行常規(guī)的飼養(yǎng)和衛(wèi)生管理；增加供食量和飲水量；幼仔缺乏體溫調(diào)節(jié)能力，室內(nèi)要稍高，保持在溫度20℃～22℃；相對濕度40％～50％；特別注意避免突然的干擾和噪音以免發(fā)生食仔現(xiàn)象；也不可翻動動物巢穴內(nèi)的墊草以免破壞動物所筑的產(chǎn)仔用草窩，影響母獺育幼。

1.4.7 離乳期管理

所產(chǎn)旱獺幼仔哺乳時間30d左右后，門齒長出并能采食胡蘿卜和白菜等新鮮蔬菜。觀察到幼仔糞便由黑變綠即表明幼獺開食了，即可將幼仔全部分出進行飼養(yǎng)管理。前一個月每天每只飼喂20～25g胡蘿卜和白菜，同時每只每日投喂20～25g用加工成年旱獺顆粒飼料的原料加水制成半干的軟料；一般從第二個月后，飼喂顆粒飼料和自來水，其它管理技術方法與親本旱獺的飼養(yǎng)方法相同。

親本旱獺則進入下一個繁育周期，飼養(yǎng)管理方法同上述各階段方法要點。

1.5 觀測

1.5.1 行為與形態(tài)

飼養(yǎng)繁殖期間，每日觀察記錄動物取食、飲水、適應過程、死亡情況以及發(fā)情、交配、產(chǎn)仔和育幼等各種活動和行為以及不同階段動物外形的變化。

1.5.2 繁殖特性統(tǒng)計分析

統(tǒng)計旱獺發(fā)情周期、妊娠期、胎仔數(shù)、離乳數(shù)、成活率、繁殖力等繁殖生物學特性。

1.5.3 體重與體尺

測量人工條件下繁殖的F1代旱獺的體重、體長、尾長、后肢長等量度指標，并進行差異性分析。

2 結果

在研究期間，觀察記錄了人工條件下旱獺飼養(yǎng)繁殖的主要生物學特性指標，包括冬眠周期、繁殖周期、交配時間、妊娠期、哺乳期，繁殖力、離乳率、成活率、仔獺體質量值、生長發(fā)育值等。

2.1 人工飼養(yǎng)條件下旱獺的冬眠時間

在人工飼養(yǎng)環(huán)境條件下，旱獺11月底至12月初陸續(xù)停止采食和飲水，活動量逐日減少，開始進入冬眠，出蟄時間在3月中旬，平均冬眠期140d。因實驗地點西寧市湟中縣總寨海拔為2250m，低于旱獺原棲息地海拔（海拔3500m以上），冬眠期縮短約60d。

2.2 親本旱獺繁殖特性

親本旱獺性成熟年齡為2周歲，體重2.5～3.0kg；體成熟年齡為3周歲，體重3.5～5.0kg；繁殖年齡3～6周歲；發(fā)情周期1年，1公1母配對為宜。發(fā)情時間在每年3月25日～4月15，期間可觀察到公獺睪丸下垂，體積增大，單側睪丸重量21～25g；母獺采食量增加，出現(xiàn)銜草筑窩的行為。剖檢母獺卵巢制成石蠟切片，顯微鏡×20可觀察到成熟卵子。母獺血液中雌激素水平明顯升高，雌二醇檢出值為530.00±280.44，而在非繁殖期雌二醇檢出值為376.73±168.52。

旱獺交配姿勢為爬跨式，交配持續(xù)時間35s后，公獺兩前肢放松，從母獺背上離開，結束交配。

統(tǒng)計人工飼養(yǎng)條件下旱獺4年的主要繁殖參數(shù)，妊娠期為33～37d；平均哺乳期為47d；平均胎

仔數(shù)為4.4只，性比約為1：1；平均離乳數(shù)為3.95只，離乳率為89.7％；幼獺成活率為90.8％.

表1 人工飼養(yǎng)條件下喜馬拉雅旱獺的生長發(fā)育Tab.1 Growth and development of Marmota himalayana

圖1 旱獺體生長示意Fig.1 Growth and development of Marmota himalayana

圖2 旱獺的體質量增長Fig.2 Growth and development of Marmota himalayana

2.3 幼獺生長發(fā)育

初生旱獺全身裸露無毛，背部黑紅色，腹部粉紅色，皮膚帶皺紋、半透明，耳殼緊貼顱部，匍伏（封3圖3），體重35.5～51.5g，體長9～11cm，胸圍3～4cm，尾長1.2～1.5cm；成體體重4800～5600g，體長480～550cm，胸圍30～40cm，尾長12～15cm。生長發(fā)育快速期在1周歲～2周歲期間。經(jīng)統(tǒng)計學分析，不同性別旱獺的體重、體長、胸圍和尾長等生長發(fā)育指標無顯著性差異（P＞0.05）（表1、圖1、圖2）。

3 討論

據(jù)黃孝龍等報道［6］，受種群密度、氣候、牧草等因素影響，野生喜馬拉雅旱獺群體中，雌性旱獺3周歲達到性成熟，參加繁殖的雌性成獺占具有繁殖力的雌性成獺群體的平均百分數(shù)為53.7％，1年只繁殖1胎，平均胎仔數(shù)4.7只，屬低繁殖力動物。因此，在旱獺的野生動物實驗動物化工作中，提高人工飼養(yǎng)條件下的繁殖力是極其重要的關鍵環(huán)節(jié)。營養(yǎng)、飲水和隱秘的場所是動物繁殖成功的三大要素。從野生喜馬拉雅旱獺引入實驗室后，對飼料、籠具和飼養(yǎng)管理技術進行了持續(xù)的探索，對種群動物、不同年齡段動物分別采取不同的飼養(yǎng)管理方法，效果良好，動物的繁殖能力逐年上升，建立了規(guī)?；团炕敝车募夹g能力。比較以往的人工旱獺繁殖報道［7］，本研究所建立的技術主要創(chuàng)新點：旱獺脫離了青飼料，研制了全價營養(yǎng)顆粒；研制了開放式的繁殖單元［8］、室內(nèi)繁殖池和室內(nèi)不銹鋼繁殖籠具，特別是由人工繁殖的F1代旱獺建立的人工種群在室內(nèi)不銹鋼籠具繁殖成功，向旱獺實驗動物化邁出了重要一步。另外，分別選擇10對2周齡野生種群和F1代旱獺進行了繁殖試驗，但均未成功，提示人工條件下旱獺的繁殖年齡仍為3周歲齡。因技術能力所限，旱獺的繁殖技術仍處于傳統(tǒng)的自然繁殖方法，需在今后工作中探索開展人工催情、人工授精、胚胎移植、剖腹產(chǎn)等人工干預繁殖技術，進一步提高旱獺的繁殖力。

［1］陶元清，王忠東.提高人工飼養(yǎng)條件下喜馬拉雅旱獺成活率的幾點體會［J］.四川動物，2006，25（2）：889-890.

［2］劉恩岐.人類疾病動物模型［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2014：145-152.

［3］張評滸，張陸勇.喜馬拉雅旱獺-核苷類藥物線粒體毒性評價體系的建立［C］//第二屆中國藥物毒理學會年會會議論文集：2012，66.

［4］李厚達.實驗動物學［M］.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1992：222-225.

［5］魏泓.醫(yī)學實驗動物學［M］.成都：四川科技出版社，1998：215-216.

［6］黃孝龍，王治軍，吳駕淞，等.青海海晏縣熱水灘和烏蘭腦灘喜馬拉雅旱獺的繁殖生物學特征［J］.獸類學報，1986，6（4）：307-311.

［7］黃孝龍.大型冬眠動物喜馬拉雅旱獺的實驗動物化研究［J］.中國實驗動物學，1996，6：70-72.

［8］陶元清.喜馬拉雅旱獺繁殖設施的設計與應用［J］.實驗動物與比較醫(yī)學，2015，35（3）242-244.

Scale breeding and the establishment of breeding population of Marmota himalayana

LIU Hai-qing，F(xiàn)AN Wei，ZHANG Jing-xiao，LIU Ba-rui，ZHANG Fa-rong，JIA Luo，TAO Yuan-qing
（Qinghai Institute for Endemic Disease Prevention and Control，Xi’ning，811602，China）

ObjectiveTo observate the reproductive features of wide original Marmota himalayana，and explore an optimum method that is economical，practical and on a large scale to raising Marmota himalayana baby.MethodsProvided suitable environment and conditions for feeding and management，entirely artificial feeding and care by mother.More data were collected and statistics from the pregnancy rate，each litter size，survival rate and observation the growth of young Marmota himalayana.ResultsIn 2010，92 Marmota himalayana offspring（F1 generation）have been successfully weaned from 56 couples and the survival rate of natural reproduction was 90.8 percent.Now breeding population had been established with 50 couples of wild original Marmota himalayana and 20 couples of F1 generation，which have laid the foundation for reaching standard requirements.ConclusionThis method was one of higher reproductive and survival rate，low cost and simple to operate，it should be promoted to scale produce the Marmota himalayana as laboratory animals.

Marmota himalayana；Scale breeding；Nature breeding

R-332

A

1671-7856（2015）11-0059-05

10.3969.j.issn.1671-7856.2015.11.013

國家自然科學地區(qū)基金（31160436）。

劉海青（1971-），女，主管醫(yī)師，學士，主要研究方向：醫(yī)學檢驗，E-mail：415328482@qq.com。

陶元清，研究方向：實驗動物管理和動物質量控制及野生動物實驗動物化研究，E-mail：tyq001@126.com。

﹞2015-10-10

綜述與專論