韓鳳英 秦永梅 徐錚等

摘要：試驗采用菌絲生長抑制法測定了25%凱潤EC、25%阿米西達SC、10%世高WG、70%甲基托布津WP、80%大生M-45 WP、50%速克靈WP 6種殺菌劑對棗（Ziziphus jujuba Mill）黑斑病菌（Alternaria alternate）的室內(nèi)活性。結(jié)果表明，6種殺菌劑對棗黑斑病菌均有抑制效果，但抑制效果存在顯著差異。其中25%凱潤EC、25%阿米西達SC、10%世高WG、70%甲基托布津WP對棗黑斑病菌都有較好的抑制作用，抑制中濃度（EC50）分別為0.032 5、13.403 6、39.872 2、54.254 0 μg/mL；80%大生M-45 WP、50%速克靈WP對棗黑斑病菌的抑制效果較差，EC50分別為325.890 7 μg/mL和629.806 3 μg/mL。

關(guān)鍵詞：棗（Ziziphus jujuba Mill）；黑斑病菌（Alternaria alternate）；室內(nèi)毒力測定

中圖分類號：S482.2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）14-3451-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.14.030

The Indoor Toxicity Measurement of Six Fungicides

against Jujube Black Spot

HAN Feng-ying， QIN Yong-mei，XU Zheng，WANG Yu， WANG Jin-quan， YANG Xiang-li

（Shandong Agricultural and Engineering University， Jinan 250100，China）

Abstract： The mycelial growth rate methed was used to test the indoor toxicity of six fungicides 25% pyrazole ether ester EC，25% Amistar SC，10% difenoconazole WG，70% mildothane WP，80% mancozeb WP， 50% procymidone WP aginst jujube black spot （Alternaria alternate）.The results showed that 6 fungicides had inhibition effects to jujube black spot（Alternaria alternate），which had significant different inhibitory effect. 25% pyrazole ether ester EC，25% Amistar SC，10% difenoconazole WG and 70% mildothane WP had good inhibition，median inhibition concentration （EC50） were 0.032 5，13.403 6，39.872 2，54.254 0 μg/mL respectively； While 80% mancozeb WP，50% procymidone WP had poorer inhibition effect to jujube black spot，EC50 were 325.890 7 μg/mL and 629.806 3 μg/mL respectively.

Key words： jujube（Ziziphus jujuba Mill）； black spot（Alternaria alternate）； indoor toxicity

棗（Ziziphus jujuba Mill）黑斑病俗稱棗斑點病，是由細鏈格孢菌（Alternaria alternate）引起的一種真菌性病害[1，2]，為害冬棗果實和葉片，該病對冬棗的產(chǎn)量和品質(zhì)影響極大[3]。近年來，山東省棗黑斑病發(fā)生較重，濱州等地棗園發(fā)病率為100%，一般年份病果率在25%以上，管理粗放、防治不及時的棗園病果率在60%以上[4]，嚴重影響了冬棗的經(jīng)濟效益，是生產(chǎn)上亟待解決的問題。為此，本研究測定了6種化學(xué)藥劑對棗黑斑病的室內(nèi)毒力，以期為棗黑斑病菌的科學(xué)防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試病原菌株

棗黑斑病菌（A. alternate）樣品采自濱州市，于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）上按常規(guī)方法進行組織分離和病原純化，獲得純培養(yǎng)菌株，于4 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g；葡萄糖20 g；瓊脂15～20 g；去離子水1 000 mL，pH7.0，于121 ℃滅菌20 min，冷卻后貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 供試藥劑

25%凱潤（吡唑醚菊酯）EC（德國巴斯夫（中國）有限公司），25%阿米西達（醚菊酯）SC（瑞士先正達（蘇州）作物保護有限公司），10%世高（苯醚甲環(huán)唑）WG（瑞士先正達（蘇州）作物保護有限公司），70%甲基托布津WP（浙江一帆化工有限公司），80%大生M-45 WP（代森錳鋅）（美國陶氏益農(nóng)化工有限公司），50%速克靈（腐霉利）WP（日本住友化學(xué)株式會社）。

1.4 試驗方法

采用菌絲生長速率法[5，6]測定6種殺菌劑對棗黑斑病菌的生長抑制效果。將棗黑斑病菌在PDA培養(yǎng)基上28 ℃培養(yǎng)5 d，用直徑9 mm的打孔器在靠近菌落邊緣處打取菌餅，并接種于含有不同藥劑濃度的培養(yǎng)基上（凱潤：0.01、0.02、0.04、0.08、0.16 μg/mL；阿米西達：4、8、16、32、64 μg/mL；世高：15、30、60、120、240 μg/mL；甲基托布津：10、20、40、80、160 μg/mL；大生：150、300、600、1 200、2 400 μg/mL；速克靈：100、200、400、800、160 0 μg/mL），每個平皿接一菌餅，28 ℃培養(yǎng)5 d，利用十字交叉法測定菌落直徑，計算菌絲生長抑制率。每處理重復(fù)3次。將供試病菌9 mm的菌餅接種于不含藥劑的平皿中央，28 ℃培養(yǎng)，待對照菌落長滿平皿，采用十字交叉法測定菌落直徑。計算菌絲相對抑制率[7]，利用DPS軟件進行統(tǒng)計分析，求出各藥劑對棗黑斑病菌的毒力回歸方程、抑制中濃度（EC50）、及相關(guān)系數(shù)（R）、95%置信限。

相對抑制率=（對照菌落平均直徑-處理菌落平均直徑）/（對照菌落平均直徑-菌餅直徑）×100%

2 結(jié)果與分析

6種化學(xué)藥劑在不同劑量下對棗黑斑病菌的抑制作用如表1所示。由表1可知，6種化學(xué)藥劑對棗黑斑病菌均有一定的抑制作用，但同一種藥劑PDA不同的含藥濃度抑制效果有很大的差別，高濃度下的抑制率均達80%以上。

根據(jù)菌絲生長抑制率與藥劑濃度對數(shù)之間的關(guān)系，通過DPS2000軟件數(shù)據(jù)分析得出毒力回歸方程、EC50、相關(guān)系數(shù)、95%的置信限，如表2所示。由表2可知，不同藥劑之間EC50差別很大，其中凱潤對棗黑斑病菌菌絲生長的抑制作用最強，EC50為0.032 5 μg/mL，阿米西達對棗黑斑病菌菌絲生長的抑制作用次之，EC50為13.403 6 μg/mL，甲基托布津和世高也對棗黑斑病菌菌絲生長均顯示出良好的抑制作用，EC50分別為39.872 2、54.254 0 μg/mL。速克靈和大生雖對棗黑斑病菌菌絲生長有一定作用，但使用劑量太大，EC50分別高達325.890 7、629.806 3 μg/mL，毒力較低，不適合用于防治棗黑斑病菌。

3 小結(jié)與討論

6種化學(xué)藥劑對棗黑斑病菌生長抑制的中濃度從低到高依次是凱潤、阿米西達、甲基托布津、世高、大生、速克靈，分別為0.032 5、13.403 6、39.872 2、54.254 0、325.890 7、629.806 3 μg/mL。其中凱潤對棗黑斑病菌的菌絲生長抑制作用最強，其次是阿米西達。甲基托布津和世高對棗黑斑病菌菌絲的生長也有良好的抑制作用；大生和速克靈相對其他藥劑抑制棗黑斑病菌菌絲的生長作用較差。

不同殺菌劑對病原菌的抑制作用差異顯著，可能與殺菌劑的作用原理關(guān)系密切。凱潤和阿米西達兩種藥劑屬于甲氧基丙烯酸酯類，甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑主要作用于真菌的線粒體呼吸，破壞能量合成，從而抑制真菌的生長或?qū)⒉【鷼⑺溃哂斜Ｗo和治療活性[8]，具有滲透性及局部內(nèi)吸活性，持效期長，耐雨水沖刷[9]。甲基托布津被植物吸收后即轉(zhuǎn)化為多菌靈，主要干擾病菌菌絲形成，影響病菌細胞分裂，使細胞壁中毒，孢子萌發(fā)長出的芽管畸形，從而殺死病菌[10]。世高屬于三唑類殺菌劑，其殺菌機制均是抑制大多數(shù)真菌的麥角甾醇的生物合成，從而抑制或干擾病菌的一些繁殖體及營養(yǎng)體器官的正常發(fā)育而令病菌衰亡。這4種殺菌劑對作物均具有保護和治療作用。速克靈屬于二甲酰亞胺類殺菌劑能使病菌菌體破裂死亡，防止早期病斑形成，起保護和治療作用。大生屬于有機硫類殺菌劑，屬于保護性殺菌劑，主要抑制孢子的萌發(fā)，使芽管膨大變形[11]。

通過室內(nèi)試驗研究表明，甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑（凱潤、阿米西達）、甲基托布津及世高對棗黑斑病菌的抑制作用較好。如果以上4種藥劑經(jīng)田間藥效試驗得到進一步的驗證，則可能成為防治棗黑斑病菌的高效藥劑，在棗黑斑病菌防治的工作中具有較大的應(yīng)用潛力。

參考文獻：

[1] 吳玉柱，季延平，劉會香，等.冬棗黑斑病病原菌的鑒定[J].中國森林病蟲，2005，24（2）：1-3.

[2] 王 蘭，馮宏祖，支金虎.32.5%苯甲·嘧菌酯懸浮劑對棗黑斑病的室內(nèi)毒力測定與田間藥效試驗[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（1）：134-135.

[3] 吳玉柱，季延平，劉 慇，等.冬棗黑斑病發(fā)生規(guī)律的研究[J].山東林業(yè)科技，2004（3）：1-3.

[4] 劉京濤，?；奂t，王小夢，等.棗黑斑病防治藥劑篩選試驗[J].中國果樹，2006（2）：31-32.

[5] NY/T1156.4-2006，農(nóng)藥室內(nèi)生物測定試驗準則[S].

[6] 孫廣宇，宗兆鋒.植物病理學(xué)實驗技術(shù)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.

[7] 慕立義.植物化學(xué)保護研究方法[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1994.

[8] 徐漢虹.植物化學(xué)保護學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2007.

[9] 盧 穎.植物化學(xué)保護[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2009.

[10] 王春明，鄭 果，洪 流.6種殺菌劑對番茄早疫病的毒力測定[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技，2011（3）：10-12.

[11] 李建強，劉紅斌，劉西莉，等.5種殺菌劑對小麥光腥黑穗病菌的毒力和孢子萌發(fā)形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2000，2（1）：41-46.