譚滴清等

摘要：為了研究猴耳環(huán)水提物對(duì)卵清蛋白（OVA）所致的哮喘模型豚鼠外周血細(xì)胞的影響，將50只豚鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、猴耳環(huán)水提物高、中、低劑量組，每組10只。試驗(yàn)第一天給陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組、猴耳環(huán)水提物高、中、低劑量組分別腹腔注射生理鹽水和10%OVA致敏，第14天和第15天用OVA霧化激發(fā)誘發(fā)哮喘模型。試驗(yàn)結(jié)束后心臟采血，生化分析儀檢測(cè)觀察各組豚鼠外周血細(xì)胞數(shù)量的變化。結(jié)果表明，陽(yáng)性組嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)均低于陰性組，差異顯著（P<0.05），其余各組與陰性組比較均差異不顯著；各組的淋巴細(xì)胞數(shù)和單核細(xì)胞數(shù)分別與陰性組比差異不顯著（P>0.05）。適量的猴耳環(huán)水提物對(duì)白細(xì)胞總數(shù)含量變化有積極的作用。

關(guān)鍵詞：猴耳環(huán)水提物；外周血細(xì)胞；影響

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X（2015）08-0010-02

猴耳環(huán)水提物為棕黑色膏狀體，在廣東民間較為常用，其抗菌、抗炎作用在臨床用藥實(shí)踐中已得到證實(shí)，但目前研究對(duì)其作用機(jī)理尚未明確。據(jù)于猴耳環(huán)的眾多功效，本研究擬通過(guò)建立哮喘豚鼠模型，觀察猴耳環(huán)水提物對(duì)OVA致哮喘模型豚鼠外周血細(xì)胞的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

普通級(jí)豚鼠50只，雄性，體重250～350 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（粵）2008-0020；使用許可證號(hào)：SYXK（粵）2008-0001。

1.2 藥品與試劑

中藥猴耳環(huán)水提物（批號(hào)：130903，含沒(méi)食子酸5.1%），由廣州萊泰制藥有限公司提供；地塞米松（批號(hào)：41211251），由天津金耀集團(tuán)湖北天藥藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；卵清蛋白，由美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)；生化試劑盒，由上?？迫A生物工程股份有限公司提供。

1.3 儀器與設(shè)備

梅特勒AL204電子分析天平；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（型號(hào)：MulitifugellR）；日立7060全自動(dòng)血生化分析儀。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將50只雄性豚鼠依體重按隨機(jī)表分成5組：陰性對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組、猴耳環(huán)水提物高劑量組、猴耳環(huán)水提物中劑量組、猴耳環(huán)水提物低劑量組，每組10只。試驗(yàn)第一天用10%卵清蛋白生理鹽水溶液腹腔注射，每只1 mL。OVA致敏的第14天將致敏豚鼠放置于密閉塑料箱內(nèi)，用霧化器噴入0.05%OVA，40 s/（次·只），連續(xù)4次；第15天，噴入1%OVA溶液超聲霧化激發(fā)2次，第一次2 min/（次·只），4 h后5 min/（次·只）。各組分別于致敏后第七天給藥。陰性對(duì)照組給予生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照組給予地塞米松，劑量為0.1 mg/100 g；猴耳環(huán)水提物高劑量組采用原液的1/2濃度給藥，劑量為1 ml/kg；猴耳環(huán)水提物中劑量組采用原液的1/4濃度給藥，劑量為1 ml/kg；猴耳環(huán)水提物低劑量組采用原液的1/8濃度給藥，劑量為1 ml/kg；連續(xù)給藥7 d。試驗(yàn)結(jié)束后，心臟采血，3 000 r/min離心10 min，分離血清，采用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS19.9軟件分析，用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示。

2 結(jié)果與分析

豚鼠受OVA致敏激發(fā)后，并給予猴耳環(huán)水提物和地塞米松治療，于停藥后24h檢查外周血細(xì)胞數(shù)量，其結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，陽(yáng)性對(duì)照組和猴環(huán)耳水提物中劑量組紅細(xì)胞數(shù)低于陰性組，差異顯著（P<0.05）；猴環(huán)耳水提物高劑量組和低劑量組的紅細(xì)胞數(shù)低于陰性對(duì)照組，差異不顯著（P>0.05）；猴環(huán)耳水提物中劑量組血紅蛋白數(shù)與陰性對(duì)照組比較，差異顯著（P<0.05），其余各組與陰性對(duì)照差異不顯著；各組豚鼠血小板計(jì)數(shù)與陰性比較均差異不顯著；陽(yáng)性對(duì)照組和猴耳環(huán)水提物中劑量組白細(xì)胞計(jì)數(shù)低于陰性對(duì)照組，差異顯著P<0.05）；猴耳環(huán)水提物高劑量組嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)低于陰性對(duì)照組，差異顯著（P<0.05）；陽(yáng)性對(duì)照組嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)低于陰性對(duì)照組，差異顯著（P<0.05），其余各組與陰性對(duì)照組相比差異不顯著；陽(yáng)性對(duì)照組中性粒細(xì)胞數(shù)低于陰性組，差異顯著（P<0.05），其余各組與陰性對(duì)照組比，差異不顯著；各組豚鼠淋巴細(xì)胞數(shù)和單核細(xì)胞數(shù)分別與陰性對(duì)照組比較均差異不顯著（P>0.05）。

3 討論

血細(xì)胞是存在于血液中的細(xì)胞，含紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等，通過(guò)觀察統(tǒng)計(jì)各血細(xì)胞的數(shù)量變化可以在一定程度上反應(yīng)藥物的毒副作用及對(duì)身體的影響[1]。外周血炎癥免疫細(xì)胞在哮喘發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，白細(xì)胞具有免疫防御功能，它是通過(guò)吞噬有害物質(zhì)以及淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體，其中嗜堿性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞是哮喘變應(yīng)性炎癥中釋放炎癥的效應(yīng)細(xì)胞；嗜酸性粒細(xì)胞在哮喘病理生理學(xué)上作為原發(fā)效應(yīng)細(xì)胞，與中性粒細(xì)胞一樣可進(jìn)行呼吸暴發(fā)產(chǎn)生活性氧代謝產(chǎn)物，后者能損傷氣管上皮細(xì)胞膜，引起上皮脫落，黏膜水腫，還可誘導(dǎo)肥大細(xì)胞脫顆粒，炎性介質(zhì)釋放[2]。單核細(xì)胞在哮喘炎癥中起主要早期效應(yīng)細(xì)胞作用，具有遞呈抗炎信息和促進(jìn)分泌多種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)前體；中性粒細(xì)胞在哮喘的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程中呈增加趨勢(shì)，有研究表明其可提示變應(yīng)性炎癥與多形核白細(xì)胞有關(guān)系；血小板表面具有的親和力的IgE受體亦可能是哮喘的效應(yīng)細(xì)胞之一[3]。

以嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主的慢性氣道炎癥性疾病哮喘可導(dǎo)致微血管滲漏增加，血蛋白滲出增多。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽(yáng)性對(duì)照組與猴耳環(huán)水提物中劑量組紅細(xì)胞數(shù)較陰性對(duì)照組有所減少，猴耳環(huán)水提物中劑量組血紅蛋白低于陰性對(duì)照組血紅蛋白數(shù)，說(shuō)明陽(yáng)性對(duì)照組、猴耳環(huán)水提物中劑量組對(duì)微血管滲漏的修復(fù)作用不顯著，而猴耳環(huán)水提物高劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組嗜酸性粒細(xì)胞含量均顯示顯著低于低劑量組，表示糖皮質(zhì)激素和猴耳環(huán)水提物高劑量組可能有抑制嗜酸性粒細(xì)胞的趨化，這與文獻(xiàn)[4]報(bào)道的一致，從而減少血液炎癥細(xì)胞。陽(yáng)性對(duì)照組和猴耳環(huán)水提物中劑量組白細(xì)胞計(jì)數(shù)低于陰性對(duì)照組，表示猴耳環(huán)中劑量和地塞米松具有減少白細(xì)胞總數(shù)的作用，即可減少哮喘免疫炎性細(xì)胞的數(shù)量；陽(yáng)性對(duì)照組嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)和中性粒細(xì)胞數(shù)均低于陰性對(duì)照組，說(shuō)明地塞米松在治療哮喘中可通過(guò)抑制嗜堿性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的增多起作用。而目前治療哮喘最有效的抗炎藥物糖皮質(zhì)激素的主要作用機(jī)制是阻止炎癥細(xì)胞，特別是嗜酸性粒細(xì)胞的趨化和激活、抑制細(xì)胞因子的生成、干擾花生四烯酸代謝，抑制白三烯和前列腺素的合成和釋放降低氣管高反應(yīng)性，減輕微血管的滲漏，減輕氣管水腫，使呼吸道通暢，修復(fù)氣管炎性損傷的上皮的作用。但長(zhǎng)期或大量使用可能引起一系列的副作用[5]?；诘投靖弊饔玫闹兴幒锒h(huán)眾多功效，本試驗(yàn)探討哮喘豚鼠外周血細(xì)胞結(jié)果顯示；猴耳環(huán)水提物可能含有某種免疫活性物質(zhì)，具有降血清嗜酸性粒細(xì)胞的作用，也顯示猴耳環(huán)水提物對(duì)哮喘的作用機(jī)制不同于糖皮質(zhì)激素對(duì)哮喘的作用機(jī)制。

參考文獻(xiàn)：

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[4] BENTLEY A M，HAMID Q，ROBINSON D S，et al.Prednisolone treatment in asthma：reduction in the numbers of eosinophils，T cells，tryptase-only positive mast cells，and modulation of IL-4，IL-5，and interferon-gamma cytokine gene expression within the bronchial mucosa[J].AM J Respir Crit Care Med，1996，153：551-556.

[5] 郭耀威，李沛波.猴耳環(huán)提取物抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)醫(yī)藥雜志，2007（12）：23-24.