球孢白僵菌對(duì)南瓜實(shí)蠅致病力的測(cè)定

袁盛勇等

摘要：利用3.0×104～3.0×108個(gè)/mL 5個(gè)濃度的球孢白僵菌XD0104015菌株對(duì)南瓜實(shí)蠅的成蟲、幼蟲、蛹進(jìn)行室內(nèi)致病力測(cè)定。結(jié)果表明，成蟲、幼蟲、蛹校正死亡率均在3.0×108個(gè)/mL孢子濃度下達(dá)到最高，分別為（90.00±1.92）%、（84.44±2.99）%、（80.00±2.95）%；致死中時(shí)間（LT50）分別為（4.088±0.387）、（4.575±0.569）、（4.702±0335） d；處理9 d的致死中濃度（LC50）分別為（2.466±0.579）×104、（2.578±0.452）×104、（3.461±0.679）×104個(gè)/mL，供試菌株在室內(nèi)對(duì)南瓜實(shí)蠅各蟲態(tài)均有較強(qiáng)的致病力，在田間具有較理想的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：南瓜實(shí)蠅；球孢白僵菌；致病力

中圖分類號(hào)：S433.89文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1002-1302（2015）09-0158-02

球孢白僵菌（Beauveryia bassiana）是一種發(fā)展較早、普及面積較大、應(yīng)用較廣的昆蟲病原真菌[1]。它是一類能寄生在昆蟲體表和體內(nèi)的真菌，通過氣孔侵入蟲體，吸收蟲體水分萌發(fā)芽管，隨后分泌酶素溶解體壁幾丁質(zhì)，并不斷生長(zhǎng)菌絲，破壞體壁幾丁質(zhì)及上皮細(xì)胞或腸壁細(xì)胞而進(jìn)入蟲體體腔，繼而破壞血細(xì)胞及其他器官細(xì)胞，最后菌絲穿出體壁，使蟲身長(zhǎng)滿菌絲而死亡[2]。南瓜實(shí)蠅（Bactrocera tau）是一種重要的果蔬害蟲，該蟲具有隱蔽性，寄主廣，繁殖力強(qiáng)，適應(yīng)性極強(qiáng)和危害嚴(yán)重等特點(diǎn)。它以幼蟲駐入成熟的果實(shí)中產(chǎn)生危害，導(dǎo)致果實(shí)腐爛、落果，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失[3-4]。目前，對(duì)南瓜實(shí)蠅主要以化學(xué)防治為主，對(duì)環(huán)境造成較大的污染；隨著人們環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)和對(duì)蟲生真菌研究的深入，利用蟲生真菌防治害蟲越來越受到重視，這也是重要的方法之一[5-7]。目前，國(guó)內(nèi)外利用蟲生真菌防治南瓜實(shí)蠅的相關(guān)研究較少，本研究利用球孢白僵菌XD0104015菌株對(duì)果蔬害蟲南瓜實(shí)蠅的各蟲態(tài)進(jìn)行室內(nèi)致病力測(cè)定，以期為使用昆蟲病原真菌進(jìn)行生物防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1菌株來源供試球孢白僵菌XD0104015菌株保存于紅河學(xué)院農(nóng)學(xué)系農(nóng)業(yè)害蟲綜合防治實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2供試蟲源室內(nèi)人工飼養(yǎng)，建立南瓜實(shí)蠅種群。

1.2方法

1.2.1分生孢子液的制備將復(fù)壯、擴(kuò)繁后的球孢白僵菌XD0104015用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)后，將其分生孢子洗落后用無菌水過濾。用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下計(jì)數(shù)，計(jì)算出原孢子液濃度，稀釋成試驗(yàn)所需的濃度梯度。

1.2.2球孢白僵菌對(duì)南瓜實(shí)蠅致病力測(cè)定設(shè)3.0×104～3.0×108個(gè)/mL 5個(gè)濃度，并用無菌水加0.05%吐溫-80作為對(duì)照，每個(gè)濃度3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30頭蟲，接種后分別供給飼料，置于溫度為26 ℃、相對(duì)濕度為85%的人工氣候箱中培養(yǎng)，連續(xù)觀察9 d，每天定時(shí)記錄成蟲死亡數(shù)，并將死亡的蟲體挑出保濕培養(yǎng)，觀察是否為真菌感染致死。

成蟲采用噴霧法接種，將成蟲置于2L的塑料瓶?jī)?nèi)，各濃度的孢子液噴于蟲體上；幼蟲和蛹均采用浸漬法接種，將幼蟲和蛹在孢子液中浸30 s進(jìn)行接種，然后用毛筆將幼蟲挑入裝有飼料的培養(yǎng)皿中，將蛹挑入裝有適量沙子的小瓶中，用帶小孔的紗布封口[8-9]。

1.2.3數(shù)據(jù)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0進(jìn)行處理[10]。根據(jù)校正死亡率進(jìn)行概率值轉(zhuǎn)換后，對(duì)劑量作線性回歸分析，建立直線回歸模型，從而分別估計(jì)致死中濃度LC50、致死中時(shí)間LT50、相關(guān)系數(shù)（r）等參數(shù)[11]。相關(guān)計(jì)算公式如下：

死亡率=（死亡蟲數(shù)/供試蟲數(shù)）×100%；

校正死亡率=（處理組死亡率-對(duì)照組死亡率）/（1-對(duì)照死亡率）×100%。

2結(jié)果與分析

2.1球孢白僵菌對(duì)南瓜實(shí)蠅成蟲的致病力

球孢白僵菌XD0104015菌株分生孢子液對(duì)南瓜實(shí)蠅成蟲具有較強(qiáng)的致病力，其中在3.0×108個(gè)/mL濃度下的致病力最強(qiáng)，累計(jì)到處理9 d的校正死亡率為（90.00±1.92）%對(duì)照為5.56%；3.0×104個(gè)/mL孢子濃度下的致病力相對(duì)最弱，校正死亡率為（62.22±4.01）%。供試菌株對(duì)南瓜實(shí)蠅成蟲處理5～9 d的致死中濃度逐漸降低，從（3.775±0617）×108個(gè)/mL 降至（2.466±0.579）×104個(gè)/mL；在30×104～3.0×108個(gè)/mL 5個(gè)孢子濃度下，隨孢子濃度的逐漸增大其致死中時(shí)間呈現(xiàn)逐漸縮短的趨勢(shì)（表1）。

2.2球孢白僵菌對(duì)南瓜實(shí)蠅幼蟲的致病力

分生孢子液在3.0×108個(gè)/mL濃度下對(duì)南瓜實(shí)蠅幼蟲表1球孢白僵菌XD0104015菌株分生孢子液對(duì)南瓜實(shí)蠅成蟲的致死中濃度和致死中時(shí)間

致死中濃度回歸致死中時(shí)間回歸時(shí)間

（d） 回歸方程 相關(guān)系數(shù)致死中濃度

（個(gè)/mL）濃度

（個(gè)/mL） 回歸方程相關(guān)系數(shù)致死中時(shí)間

（d）5y=2.265+0.264x0.972 1（3.775±0.617）×108a3.0×104y=3.857+4.307x0.979 27.862±0.679a6y=1.850+0.244x0.976 2（3.773±0.595）×107b3.0×105y=2.955+3.567x0.940 76.738±0.564b7y=1.521+0.236x0.966 9（2.842±0.493）×106c3.0×106y=2.402+3.065x0.966 46.078±0.531b8y=1.308+0.240x0.973 1（2.887±0.424）×105c3.0×107y=2.156+3.047x0.962 85.135±0.446c9y=0.981+0.223x0.920 3（2.466±0.579）×104d3.0×108y=1.756+2.871x0.971 64.088±0.387e注：同列數(shù)據(jù)后標(biāo)有不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05）。表2、表3同。

致病力最強(qiáng)，處理9 d的校正死亡率為（84.44±2.99）%，對(duì)照為6.67%；3.0×104個(gè)/mL濃度下對(duì)南瓜實(shí)蠅幼蟲致病力相對(duì)較弱，但其校正死亡率也達(dá)到了（52.22±4.01）%；隨時(shí)間的推移，供試菌株對(duì)南瓜實(shí)蠅幼蟲處理5～9 d的致死中濃度逐漸降低；隨分生孢子液濃度的增加，其致死中時(shí)間也逐漸縮短，在3.0×104～3.0×108個(gè)/mL孢子濃度下的LT50從（7.550±0.694）d 縮短至（4.575±0.569）d（表2）。表2球孢白僵菌XD0104015菌株分生孢子液對(duì)南瓜實(shí)蠅幼蟲的致死中濃度和致死中時(shí)間

2.3球孢白僵菌對(duì)南瓜實(shí)蠅蛹的致病力

南瓜實(shí)蠅蛹在接種后3 d出現(xiàn)死亡，9 d死亡率達(dá)到最大，在3.0×108個(gè)/mL濃度下對(duì)南瓜實(shí)蠅蛹致病力最強(qiáng)，累計(jì)校正死亡率為（80.00±2.95）%，對(duì)照為4.44%。供試菌株對(duì)南瓜實(shí)蠅蛹處理5～9 d的致死中濃度逐漸降低，最低為（3.461±0.679）×104個(gè)/mL；在3.0×104～3.0×108個(gè)/mL孢子濃度下的致死中時(shí)間呈現(xiàn)逐漸縮短的趨勢(shì)，最低為（4.702±0.335）d（表3）。表3球孢白僵菌XD0104015菌株分生孢子液對(duì)南瓜實(shí)蠅蛹的致死中濃度

致死中濃度回歸致死中時(shí)間回歸時(shí)間

（d） 回歸方程 相關(guān)系數(shù)致死中濃度

3結(jié)論與討論

球孢白僵菌XD0104015菌株對(duì)南瓜實(shí)蠅成蟲、幼蟲、蛹均有較高的致病力，高濃度孢子的致病力明顯高于低濃度。菌株在3.0×108個(gè)/mL孢子濃度下對(duì)成蟲的致病力最強(qiáng)，處理9 d的累計(jì)校正死亡率為（90.00±1.92）%；其次是幼蟲的累計(jì)校正死亡率，為（84.44±2.99）%；對(duì)蛹的致病力最弱，累計(jì)校正死亡率（80.00±2.95）%。由于蛹?xì)さ谋Ｗo(hù)導(dǎo)致菌液不能直接接觸蟲體，因此對(duì)蛹的致病力相對(duì)較差。說明球孢白僵菌XD0104015菌株對(duì)南瓜實(shí)蠅的致病力表現(xiàn)為成蟲>幼蟲>蛹。

室內(nèi)的致病力測(cè)定效果較好，但田間條件復(fù)雜多變，成蟲具有飛翔能力，可以把分生孢子直接噴施在成蟲體表或者噴施在瓜田中瓜葉上經(jīng)氣流傳播黏附于成蟲體表建立寄生關(guān)系，達(dá)到防治成蟲目的；針對(duì)幼蟲和蛹的防治，可以把球孢白僵菌的孢子液提前噴施在瓜田的土壤中，老熟幼蟲從瓜果里跳到土壤中接觸分生孢子被寄生，蛹體在土壤中能接觸到噴施在土壤中的分生孢子寄生后導(dǎo)致蛹體死亡，同樣可以達(dá)到防治南瓜實(shí)蠅蛹的目的。在防治南瓜實(shí)蠅成蟲時(shí)可以利用某種誘集劑與球孢白僵菌XD0104015菌株孢子制劑相結(jié)合。田間實(shí)際大面積推廣應(yīng)用還需要進(jìn)一步研究，以探索最有效噴菌時(shí)間和方式，制定并掌握最佳的施用方案以利提高防治效果。

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doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2015.09.049