郝鵬 孔彩平 商曉桂

摘 要：豬瘟病毒能在豬腎細(xì)胞和其它一些哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)增殖。感染性最強(qiáng)的是PK15和ST等幾株豬腎和豬睪丸細(xì)胞系[1]。本實(shí)驗(yàn)室保存的ST細(xì)胞株易形成復(fù)層，長時(shí)間培養(yǎng)形成組織塊突起，細(xì)胞團(tuán)易脫落，無法長期連續(xù)收獲豬瘟病毒。二甲基亞砜（DMSO）不僅可以影響細(xì)胞代謝促進(jìn)蛋白合成[2]而且DMSO對(duì)豬瘟病毒囊膜中的脂質(zhì)和脂蛋白有穩(wěn)定作用[1]。

關(guān)鍵詞：豬瘟病毒；二甲基亞砜；ST細(xì)胞；細(xì)胞抑制

中圖分類號(hào)：S851.33 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2015）11-0044-02

1 材料與方法

1.1 材料來源

1.1.1 細(xì)胞

ST細(xì)胞，購自美國ATCC。

1.1.2 豬瘟病毒

豬瘟兔化弱毒株，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，經(jīng)家兔傳代制備的脾淋毒。

1.1.3 溶液

MEM：宜興賽爾生物科技有限公司提供。

1.1.4 血清

豬瘟專用血清：金源康生物工程有限公司。

1.1.5 二甲基亞砜（DMSO）

Sigma-Aldrich公司生產(chǎn)。

1.2 方法

（1） 取生長良好的ST細(xì)胞（25 cm2培養(yǎng)瓶），待細(xì)胞鋪滿80 %左右時(shí)，棄去原培養(yǎng)液，加入含1 %血清的MEM培養(yǎng)液，按培養(yǎng)體積的0.3 %～0.5 %接種合豬瘟病毒。

（2） 按照培養(yǎng)體積分別加入0.5 %；1 %；1.5 %； 2 %；2.5 %的DMSO，對(duì)照組不添加DMSO，分別編為1至6號(hào)（表1）。

（3） 37 ℃培養(yǎng)96 h后，取樣檢測(cè)，更換培養(yǎng)液，按原比例繼續(xù)添加DMSO，如此循環(huán)，至第10次收獲（圖1）。

2 結(jié)果

添加DMSO抑制劑后可明顯抑制細(xì)胞生長，隨DMSO濃度的增高，抑制細(xì)胞生長明顯增強(qiáng)，且不影響豬瘟病毒產(chǎn)量。

除第5組（2.5 %DMSO）影響細(xì)胞生長，細(xì)胞逐漸脫落死亡，產(chǎn)毒偏低外，其余實(shí)驗(yàn)組均未影響豬瘟產(chǎn)毒量，且與對(duì)照組毒價(jià)基本相同。實(shí)驗(yàn)1組與對(duì)照組細(xì)胞生長較快，0.5 %DMSO對(duì)細(xì)胞的抑制效果不強(qiáng)，后期出現(xiàn)大量細(xì)胞團(tuán)塊、凸起。實(shí)驗(yàn)2、3、4組均能很好的抑制細(xì)胞生長，可用于長期連續(xù)產(chǎn)毒（圖2）。

3 討論

二甲基亞砜（DMSO）是一種含硫有機(jī)化合物，常用于細(xì)胞凍存、醫(yī)藥生產(chǎn)、有機(jī)合成等多種領(lǐng)域。二甲基亞砜對(duì)病毒囊膜中的脂質(zhì)和脂蛋白有穩(wěn)定作用。10 %DMSO液中的豬瘟病毒對(duì)反復(fù)凍融有耐受性。添加1 %～2 %的DMSO不影響細(xì)胞產(chǎn)毒且可有效控制細(xì)胞生長速度，使細(xì)胞長時(shí)間處于單層培養(yǎng)狀態(tài)，有利于工藝控制。

參考文獻(xiàn)：（2篇，略）