李文政 屈園園 李婷婷 康曉靜

新疆維吾爾族系統(tǒng)性紅斑狼瘡與HLA-DQA1等位基因相關(guān)性研究

李文政 屈園園 李婷婷 康曉靜

目的 探討新疆維吾爾族系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）與HLA-DQA1的相關(guān)性。方法 用聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物技術(shù)，對(duì)56例SLE維吾爾族患者和54例維吾爾族健康對(duì)照者的HLA-DQA1基因進(jìn)行研究。結(jié)果 SLE組DQA1*0302頻率顯著高于對(duì)照組（χ2=10.032，P=0.004），而SLE組DQA1*0101頻率顯著低于對(duì)照組（χ2=5.676，P=0.017）。結(jié)論 HLA-DQA1*0302可能是新疆維吾爾族SLE的易感基因，HLADQA1*0101可能是新疆維吾爾族SLE的保護(hù)基因。

紅斑狼瘡，系統(tǒng)性；HLA抗原；基因頻率；維吾爾族；環(huán)境

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的發(fā)病與多種人類白細(xì)胞抗原（HLA）等位基因相關(guān)，由于HLA具有高度多態(tài)性，不同種族、民族的HLA基因頻率分布存在明顯差異。為了解新疆維吾爾族SLE患者與HLA-DQA1等位基因的相關(guān)性，我們應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物（PCR-SSP）技術(shù)，對(duì)新疆維吾爾族SLE患者進(jìn)行HLA-DQA1等位基因分型研究。

一、對(duì)象

維吾爾族SLE患者共56例，其中男5例，女51例，年齡9～50歲。來(lái)自新疆各地，就診于本院皮膚科，均符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)修訂的 SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］。54例無(wú)血緣關(guān)系的維吾爾族人為健康對(duì)照組，其中男7例，女47例，年齡7～56歲。兩組年齡、性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

二、方法

1.血樣采集和處理：采取外周靜脈血3 ml，保存于EDTA抗凝管中，置于-80℃冰柜備用。采用上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司生產(chǎn)的基因組DNA快速提取試劑盒，提取研究對(duì)象的基因組DNA。

2.序列特異性引物設(shè)計(jì)及合成：HLADQA1等位基因分型引物根據(jù)1995年公布的HLA-II類等位基因核苷酸序列［2］和Olerup等［3］文獻(xiàn)設(shè)計(jì)，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。共設(shè)計(jì)9個(gè)5′端引物和7個(gè)3′端引物。組成12對(duì)不同的引物對(duì)，能鑒定10種有表達(dá)產(chǎn)物的HLADQA1等位基因。各引物對(duì)擴(kuò)增的等位基因見(jiàn)表1。

表1 各引物對(duì)擴(kuò)增的等位基因特異性及大小

3.PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系：總體系體積為20 μ1，其中DNA模板2 μ1，雙蒸水4 μ1，內(nèi)參照引物上、下游各1 μ1，目標(biāo)引物上、下游各1 μ1，Master mix 10 μ1。

4.PCR擴(kuò)增條件及擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)：94℃預(yù)變性10 min進(jìn)入PCR循環(huán)，95℃30 s，59℃1 min，72℃1 min，30個(gè)循環(huán)后繼續(xù)延伸7 min，降溫至4℃。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠（含0.5 mg/L溴化乙錠）中電泳，經(jīng)紫外透射在泳道中見(jiàn)明顯DNA條帶為陽(yáng)性。每個(gè)樣本同時(shí)進(jìn)行12個(gè)獨(dú)立的PCR反應(yīng)。每一PCR反應(yīng)體系中均包括對(duì)內(nèi)參照引物C3：5′-GCATCTTGCTCTGTGCAGAT-3′，C5：5′-TGCCAAGTGGAGC ACCCAA-3′。結(jié)果判斷必須在有內(nèi)對(duì)照引物擴(kuò)增帶出現(xiàn)的前提下進(jìn)行，根據(jù)特異性引物是否得到相應(yīng)的PCR擴(kuò)增帶而確定個(gè)體的DQA1型別。

5.統(tǒng)計(jì)分析：采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，HLA-DQA1基因頻率采用直接計(jì)算法，基因頻率組之間比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

三、結(jié)果

SLE患者HLA-DQA1*0101等位基因頻率較健康對(duì)照組顯著降低（χ2=5.676，P＜0.05），SLE患者HLA-DQA1* 0302等位基因頻率較正常對(duì)照組顯著增高（χ2=10.032，P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2 新疆維吾爾族SLE患者與健康對(duì)照組等位基因分析表

四、討論

SLE作為一種自身免疫性疾病，與HLA的相關(guān)性研究從20世紀(jì)70年代開(kāi)始一直未間斷過(guò)。由于HLA抗原分布因人種、民族、地理環(huán)境等因素可出現(xiàn)較大的差別，其與SLE相關(guān)的抗原型與基因型亦存在較大差異。有研究顯示，美國(guó)白人SLE與DQA1*0501相關(guān)，英國(guó)人則與DQA1*0201相關(guān)，而黑人主要與DQA1*0401和DQA1*0501相關(guān)［4］。陳躍華等［5］通過(guò)檢索文獻(xiàn)，應(yīng)用Meta分析，結(jié)果顯示，HLA-DQA1*0102可能是中國(guó)漢族人群SLE的易感基因。劉棟華等［6］報(bào)道，HLA-DQA1*0101可能是廣西壯族SLE的易感基因。蘇家光等［7］報(bào)道HLA-DQA1*0102可能是廣西壯族SLE患者的易感基因。我們通過(guò)應(yīng)用PCR-SSP技術(shù)獲得了新疆維吾爾族SLE患者和正常人群的基因頻率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，新疆維吾爾族SLE患者HLA-DQA1*0302等位基因頻率較健康對(duì)照組顯著增高（χ2=10.032，P=0.004），提示HLA-DQA1*0302可能是新疆維吾爾族SLE的易感基因。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)，新疆維吾爾族SLE患者HLA-DQA1*0101等位基因頻率較正常對(duì)照組顯著降低（χ2=5.676，P=0.017），提示HLA-DQA1*0101可能是新疆維吾爾族SLE的保護(hù)基因。

本研究結(jié)果為探討維吾爾族人的免疫遺傳背景、疾病關(guān)聯(lián)及與其他群體比較提供有價(jià)值的參考資料。鑒于本研究病例數(shù)尚少，HLA-DQA1*0302是否為新疆維吾爾族SLE的易感基因，HLA-DQA1*0101是否為新疆維吾爾族SLE的保護(hù)基因，尚待進(jìn)一步研究。

［1］Hochberg MC.Updating the American College of Rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Rheum,1997,40（9）:1725.

［2］Marsh SG,Bodmer JG.HLA class II region nucleotide sequences, 1995［J］.Tissue Antigens,1995,46（3（Pt 2）:258-280.

［3］Olerup O,Aldener A,Fogdell A.HLA-DQB1 and-DQA1 typing by PCR amplification with sequence-specific primers（PCR-SSP）in 2 hours［J］.Tissue Antigens,1993,41（3）:119-134.

［4］De Juan D,Martín-Villa JM,Gómez-Reino JJ,et al.Differential contribution ofC4 and HLA-DQ genesto systemic lupus erythematosus susceptibility［J］.Hum Genet,1993,91（6）:579-584.

［5］陳躍華,陳明,范昌斌.中國(guó)漢族人群系統(tǒng)性紅斑狼瘡HLADQ基因多態(tài)性的Meta分析［J］.安徽醫(yī)學(xué),2006,27（3）:175-177.

［6］劉棟華,梁伶,蘇家光,等.廣西壯族系統(tǒng)性紅斑狼瘡與HLADQA1基因相關(guān)性研究［J］.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志,2004,18（8）: 449-450,481.

［7］蘇家光,梁伶,鄭文軍,等.廣西壯族系統(tǒng)性紅斑狼瘡與HLADQA1等位基因相關(guān)性研究［J］.中華皮膚科雜志,2006,39（4）: 220.

Association of HLA-DQA1 alleles with systemic lupus erythematosus in populations of Uygur nationality in Xinjiang Uygur Autonomous Region

Li Wenzheng,Qu Yuanyuan,Li Tingting,Kang Xiaojing.Department of Dermatology and Venereology,People′s Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi 830000,China
< class="emphasis_italic">Corresponding author:Li Wenzheng,Email:pfklqr@163.com

Li Wenzheng,Email:pfklqr@163.com

Objective To assess the association between HLA-DQA1 alleles and systemic lupus erythematosus（SLE）in populations of Uygur nationality in Xinjiang Uygur Autonomous Region.MethodsPolymerase chain reactionsequence-specific primers（PCR-SSP）were used to analyze the HLA-DQA1 gene in 56 patients with SLE and 54 unrelated healthy controls of Uygur nationality in Xinjiang Uygur Autonomous Region.ResultsCompared with the healthy controls,the SLE patients showed significantly increased frequency of HLA-DQA1*0302（χ2=10.032,P=0.004）,but decreased frequency ofHLA-DQA1*0101（χ2=5.676,P=0.017）.ConclusionHLA-DQA1*0302 may be a susceptibility gene,while HLA-DQA1*0101 may be a protective factor for SLE in populations of Uygur nationality in Xinjiang Uygur Autonomous Region.

Lupus erythematosus,systemic;HLA antigens;Gene frequency;Uygur nationality;Environment

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.10.017

新疆維吾爾自治區(qū)衛(wèi)生廳青年科技人才專項(xiàng)基金（2007Y28）

830000烏魯木齊，新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院皮膚性病科

李文政，Email：pfklqr@163.com

2014-12-11）

（本文編輯：吳曉初）