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      補陽還五湯藥理學(xué)研究概況*

      2015-12-09 22:00:05李文彬王宇紅蔡光先
      關(guān)鍵詞:補陽腦缺血黃芪

      李文彬,王宇紅,譚 琥,李 峰,蔡光先△

      (1.湖南中醫(yī)藥大學(xué),湖南 長沙410000;2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,湖南 長沙410000)

      補陽還五湯源自清代醫(yī)學(xué)家王清任的著作——《醫(yī)林改錯》,它主要由黃芪、川芎、紅花、赤芍、當(dāng)歸尾、桃仁、地龍等7 味藥物組成,具有補氣、活血、通絡(luò)的效果,主治中風(fēng)之氣虛血瘀證,為中風(fēng)后遺癥的常用方。方中重用黃芪,以補益元氣,意在氣旺則血行,瘀去絡(luò)通為君藥;當(dāng)歸尾活血通絡(luò)而不傷血,為臣藥;赤芍、川芎、桃仁、紅花協(xié)同當(dāng)歸尾以活血祛瘀;地龍通經(jīng)活絡(luò),力專善走,周行全身,以行藥力,為佐藥[1]。該方自問世以來,由于臨床效果顯著,受到了許多醫(yī)家的推崇,故一直沿用至今。近年來,越來越多的中醫(yī)藥工作者從不同角度探尋補陽還五湯的功效,并通過實驗研究使得補陽還五湯的臨床藥理研究得到不斷完善。本文主要從有效藥物成分、藥效機制、藥物劑量變化等方面對補陽還五湯的研究資料進(jìn)行簡單的梳理,希望在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上,尋找到更適合臨床運用的最佳配方、劑型。

      1 主要有效成分藥效機制的研究

      中藥復(fù)方是一個比較復(fù)雜的系統(tǒng),它通過多成分、多靶點發(fā)揮多層次的效應(yīng),而任何藥物的效應(yīng)都來自于該藥的一些特定藥物分子組成,因此中藥復(fù)方也有其一定的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)[2]?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明補陽還五湯具有改善血液流變學(xué)、抗血栓形成、抗動脈粥樣硬化、抗腦缺血及在灌注損傷等作用[3]。為了弄清楚補陽還五湯中哪些物質(zhì)發(fā)揮效應(yīng)、提高有效物質(zhì)加工含量,越來越多的中醫(yī)藥工作者在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下,結(jié)合現(xiàn)代的藥理學(xué),選用不同的實驗方法、新的技術(shù)、新的理論思路對其進(jìn)行了大量的研究[4]。

      鄧常青等研究組提取了該方的七類化學(xué)組分,證實生物堿、總苷、多糖、苷元和揮發(fā)油類組分對小鼠抗腦缺血具有顯著作用,并且按一定比例的配伍可發(fā)揮很好的效果[5-6]。同時該研究小組還對補陽還五湯抗腦缺血、抗血栓、抗血管內(nèi)膜增生進(jìn)行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)補陽還五湯當(dāng)中一些物質(zhì)參與了抑制腦缺血后炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡途徑,如生物堿可抑制髓質(zhì)區(qū)白細(xì)胞介素1β 表達(dá)的升高[7],苷可抑制腦組織半胱氨酸蛋白酶1 和半胱氨酸蛋白酶3 表達(dá)的升高,并可抑制其mRNA 表達(dá)的升高[8-9];補陽還五湯通過抑制凝血酶原激活蛋白激酶C 信號途徑從而對血管內(nèi)皮細(xì)胞抗凝、纖溶和表達(dá)粘附發(fā)揮作用,如通過凝血酶原刺激培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV-304,使細(xì)胞組織型纖溶酶原激活物增多、TF、TFPI、ICAM-1 與E-選擇素的mRNA 表達(dá)升高[10-11];補陽還五湯可抑制平滑肌細(xì)胞增殖、增生內(nèi)膜中細(xì)胞外基質(zhì)的合成,促進(jìn)ECM 降解[12-13]。并且該實驗小組還通過采用血漿藥理學(xué)證實了補陽還五湯當(dāng)中的總生物堿和苷可抑制VSMC 增殖,增加G0/G1 細(xì)胞數(shù)量,下調(diào)PCNA 和c-fos 基因表達(dá),抑制cyclinD1 和周期蛋白依賴性激酶4、P21 蛋白的表達(dá)[14-15]。吳常青等采用MCAO 模型和血清藥理學(xué)驗證了補陽還五湯當(dāng)中的總苷和黃酮類物質(zhì)可抑制LDH 活性,降低MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6 的水平從而保護(hù)腦缺血再灌注損傷、降低腦組織的炎癥反應(yīng)[16]。補陽還五湯是治療中風(fēng)后遺癥的經(jīng)典明方,隨著中醫(yī)藥的發(fā)展越來越多的科研工作者對其抗腦缺血的作用機制展開了探尋。周賽男等采用MCAO 模型觀察了補陽還五湯對局灶性腦缺血大鼠TLR4 的表達(dá),其機制可能是補陽還五湯通過調(diào)節(jié)TLR4 介導(dǎo)的炎癥信號傳導(dǎo)通路而降低TLR4 蛋白表達(dá)減輕腦缺血后損傷,實現(xiàn)腦保護(hù)作用[17]。同時還驗證了補陽還五湯可能通過促血管生成、擴血管、抗凝、溶栓等改善腦缺血局部微循環(huán),減輕腦水腫及氧自由基損傷,保護(hù)腦組織,從而促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)減小梗死面積[18]。劉志婷等通過觀察補陽還五湯對小鼠局灶性腦缺血后生長相關(guān)蛋白43 和突觸素表達(dá)的影響證實了補陽還五湯能促進(jìn)小鼠缺血周邊區(qū)軸突芽生標(biāo)記GAP-43 和突觸發(fā)生標(biāo)記SYP 表達(dá)從而促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)功能恢復(fù)可能和缺血周邊區(qū)神經(jīng)軸突再生和突觸可塑性[19]。劉芳等通過觀察補陽還五湯對大鼠腦缺血后蛋白激酶B1和c-Jun 氨基末端激酶1/2 表達(dá)的影響驗證了補陽還五湯可能通過AKT/JNK 通路來激活細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子細(xì)胞周期蛋白D1 促進(jìn)細(xì)胞周期G0/G1 期的轉(zhuǎn)換,達(dá)到促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用減少腦缺血后梗死面積,減輕腦組織的水腫,從而達(dá)到腦保護(hù)的作用[20-22]。鄧常青研究組采用線栓法建立大鼠MCAO 模型,研究了補陽還五湯對腦缺血再灌注后腦組織半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶蛋白表達(dá)的變化,并驗證補陽還五湯當(dāng)中生物堿、多糖、苷及苷元有效成分對再灌注誘導(dǎo)的PMNL 浸潤的影響[23-24]。

      2 藥代動力學(xué)的研究

      隨著中醫(yī)藥現(xiàn)代化的進(jìn)程的加快,運用中藥藥代動力學(xué)理論研究中藥復(fù)方的有效藥物成分及有效機制、改良劑型、促進(jìn)中藥新藥的開發(fā)已成為當(dāng)前醫(yī)藥行業(yè)的熱門領(lǐng)域,為中醫(yī)藥走向國際奠定基礎(chǔ)。

      我國的中藥藥代動力學(xué)始于上世紀(jì)六十年代,其發(fā)展大致經(jīng)過了三個時期,進(jìn)入新世紀(jì),中藥藥動學(xué)開始迅速發(fā)展成為一門新興的熱門學(xué)科,新的理論和學(xué)說極大地豐富了中藥藥動學(xué)。當(dāng)前中藥藥動學(xué)的研究方法主要分為兩類:一種是用于有效成分明確、可定量分析檢測中藥及中藥復(fù)方,被稱之為“血藥濃度法”;另一種則比較適用于組方較復(fù)雜并且藥物的有效成分不明確的中藥及其制劑,主要采用毒理效應(yīng)法、藥理效應(yīng)法和微生物法等檢測方法[25]。

      近幾年來,隨著對單味中藥的有效成分提取技術(shù)的成熟,中醫(yī)藥研究者根據(jù)藥效-濃度的理論[26],開始逐漸探索中藥復(fù)方的藥代動力學(xué)。補陽還五湯作為臨床治療中風(fēng)后遺癥治療的經(jīng)典方,隨著其治療機制的不斷完善,越來越多的科研開始涉足于探索其在體內(nèi)的藥效-濃度變化的關(guān)系。賀福元等實驗研究組采用總量統(tǒng)計矩原理與指紋圖譜多信息分析相結(jié)合創(chuàng)立了總量統(tǒng)計矩方法,并整合了補陽還五湯的三大有效部位不同成分、不同藥物動力學(xué)參數(shù),表達(dá)了多成分藥物動力學(xué)行為,更合理、更真實的揭示了中藥“黑匣子”的內(nèi)幕[27-29]。同時該實驗小組還采用RP-HPLC(反向高效液相色譜法)對補陽還五湯當(dāng)中的多種有效成分(黃芪甲苷、川芎嗪、芍藥苷、阿魏酸等)在體內(nèi)的含量及藥物動力學(xué)進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示在大鼠血漿當(dāng)中黃芪甲苷峰在保留15min 左右可完全分離;芍藥苷在體內(nèi)中央室代謝速度穩(wěn)定且快,在波長為230nm 處產(chǎn)生較大吸收峰,峰可保留11.5min 左右完全分離;川芎嗪在波長278nm 處產(chǎn)生較長吸收峰,峰可保留18.5min 左右可完全分離,房室模型當(dāng)中代謝穩(wěn)定,;阿魏酸在波長為322nm 處產(chǎn)生較大吸收峰,峰可保留21.1min 左右基本全部分離[30-35]。同時通過結(jié)合HPLC 指紋圖譜、藥物動力學(xué)、藥物動力學(xué)代謝時間、藥物濃度、效應(yīng)偶聯(lián)的保留時間該研究小組還探索了補陽還五湯的譜效動力學(xué),完整表征多成分體系生物效應(yīng)的動力學(xué)行為,獲得了補陽還五湯的半衰期。實驗結(jié)果顯示補陽還五湯在大鼠體內(nèi)代謝的一階距為13.14h,總量二階距為82.12h2即補陽還五湯水醇提沉液灌胃大鼠后,經(jīng)9.108h 代謝50%,經(jīng)(9.108±1.96)×9.0625h 后95%的有效成分被排除出體外,其中補陽還五湯當(dāng)中的黃芪甲苷、芍藥苷與苦杏仁苷3 成分總量半衰期為(120.3±5.503)min,在0~502.2min 代謝95%的濃度[36-38]。

      3 中藥劑量的研究

      在復(fù)方的應(yīng)用當(dāng)中,不僅要考慮好單味藥的劑量還要考慮好各藥物之間劑量的配比,因此藥物劑量的不同可直接影響臨床療效。補陽還五湯中,黃芪為君藥且使用量大,因此歷代醫(yī)家對此持有不同的觀點。為了了解黃芪的最佳劑量,科研工作者進(jìn)行了大量的實驗研究。如朱麗等發(fā)現(xiàn)不同的黃芪使用劑量可以改變補陽還五湯對缺血性腦卒中患者血液流變學(xué)及療效,以黃芪劑量30g,60g,120g 組成補陽還五湯A、B、C 方來治療缺血性腦卒中恢復(fù)期患者,結(jié)果發(fā)現(xiàn)以120g 黃芪的補陽還五湯對血流變指標(biāo)的影響最明顯,對血粘度、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)均有顯著調(diào)節(jié)作用,提高血液流動性,改善微循環(huán)、減輕血瘀證,還能降低患者血纖維蛋白原的作用,具有一定的抗血液高凝狀態(tài)的作用[39]。俞天虹等MCAO 模型,于大鼠缺血24h 后分別給予黃芪劑量為120g,60g,30g,15g 的補陽還五湯,采用BrdU/Nestin 免疫熒光雙標(biāo)檢測室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖情況,結(jié)果顯示黃芪劑量為120g 組的補陽還五湯顯著改善神經(jīng)癥狀評分和減少大鼠右轉(zhuǎn)次數(shù),減慢VZ 內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞(Neural stem ceils,NSCS)增殖、向缺血周邊區(qū)遷移、分化為特定的神經(jīng)元表型,顯著促進(jìn)室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖[40]。張林等以30g,60g,120g,180g,240g 黃 芪 的 補 陽 還 五 湯 來 觀 察MCAO 大鼠腦缺血的改善情況,結(jié)果顯示180g 的補陽還五湯能顯著降低大鼠血清IL-1 和IL-6 含量、增加IL-l0 含量。但當(dāng)補陽還五湯中黃芪用量達(dá)到240g 時,對局造性腦缺血大鼠血清中IL-6 含量的影響反而減弱[41]。

      從大量實驗當(dāng)中我們可以得出,對于不同的評價指標(biāo),當(dāng)黃芪的劑量改變時,可以使補陽還五湯的臨床療效發(fā)生變化,但是黃芪的劑量也應(yīng)該保持在一定范圍內(nèi),并不是劑量越大越好,這些實驗數(shù)據(jù)為臨床醫(yī)生選擇黃芪劑量提供了有用的理論指導(dǎo)。

      4 結(jié)語

      綜上所述,現(xiàn)代中醫(yī)藥研究者通過采用現(xiàn)代中藥實驗方法證實了補陽還五湯中含有的生物堿、總苷、多糖、苷元和揮發(fā)油類等成分通過抑制腦缺血后炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡途徑、抑制凝血酶原激活蛋白激酶C 信號途徑、抑制LDH 活性、激活細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子細(xì)胞周期蛋白等藥效機制參與促血管生成、抗血栓、擴張血管等減輕腦水腫、促進(jìn)神經(jīng)再生來改善腦缺血、保護(hù)腦組織,從而達(dá)到抗腦缺血再灌注損傷;同時運用統(tǒng)計學(xué)相關(guān)原理,整合相關(guān)數(shù)據(jù)探索了補陽還五湯的在體內(nèi)的血藥濃度隨時間變化的吸收情況,有利于建立補陽還五湯的時-效-量三維模型;同時相關(guān)研究者還通過實驗對比了方中君藥黃芪劑量的改變對藥效的影響,結(jié)果顯示黃芪劑量為120g 組的補陽還五湯能夠顯著改善神經(jīng)癥狀評分,減慢VZ 內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、向缺血周邊區(qū)遷移、分化為特定的神經(jīng)元表型,顯著促進(jìn)室下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖。展望未來,作為中醫(yī)藥工作者我們還可以從以下方面對補陽還五湯進(jìn)行深入研究,從而為新藥的開發(fā)及其臨床用藥劑量選擇作出一點貢獻(xiàn):①從藥物代謝動力學(xué)角度對該方在體內(nèi)吸收、分布、代謝、排泄和毒性動態(tài)變化規(guī)律及其體內(nèi)的時-量、時-效關(guān)系進(jìn)行研究[42];②對方中主要藥效成分藥代動力學(xué)特征變化進(jìn)行研究,通過建立藥動-藥效結(jié)合模型獲得有效成分與藥效的量效關(guān)系。

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