徐寶成，張良曉，王 華*，楊青青，羅登林，李培武,6,7,8,*

（1.西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所，湖北 武漢 430062；3.河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471003；4.農(nóng)業(yè)部油料及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，湖北 武漢 430062；5.西北農(nóng)林科技大學(xué)葡萄酒學(xué)院，陜西葡萄與葡萄酒工程技術(shù)中心，陜西 楊凌 712100；6.農(nóng)業(yè)部油料產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430062；7.農(nóng)業(yè)部油料作物生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430062；8.農(nóng)業(yè)部生物毒素檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430062）

SPE-GC-GC-TOFMS檢測(cè)油脂中游離甾醇及精 煉廢棄油脂的判別

徐寶成1,2,3，張良曉2,4，王 華5,*，楊青青2,6，羅登林3，李培武2,4,6,7,8,*

（1.西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所，湖北 武漢 430062；3.河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471003；4.農(nóng)業(yè)部油料及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，湖北 武漢 430062；5.西北農(nóng)林科技大學(xué)葡萄酒學(xué)院，陜西葡萄與葡萄酒工程技術(shù)中心，陜西 楊凌 712100；6.農(nóng)業(yè)部油料產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430062；7.農(nóng)業(yè)部油料作物生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430062；8.農(nóng)業(yè)部生物毒素檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430062）

研究開(kāi)發(fā)一種基于固相萃取的植物油中游離甾醇的快速分離及多維氣相色譜串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)方法。與普通一維氣相色譜相比，14 種游離甾醇及β-香樹(shù)脂醇的三甲基硅烷化衍生物在多維氣相色譜上得到了更好地分離，并且檢測(cè)靈敏度更高。方 法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明：膽固醇、菜籽甾醇、蕓薹甾醇和β-谷甾醇的檢出限分別為0.03、0.04、0.04 mg/100 g油和0.05 mg/100 g油，定量限分別為0.06、0.08、0.08 mg/100g油和0.08 mg/100g油，在不同添加水平條件下的加標(biāo)回收率皆高于93%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.4%～10.0%之間。同時(shí)，利用本方法對(duì)6 種商品植物油及25 份精煉廢棄油脂中的游離甾醇進(jìn)行檢測(cè)，并分析其在植物油和廢棄油脂中的分布模式，提出了以判別指數(shù)對(duì)廢棄油脂進(jìn)行鑒別的方法，結(jié)果顯示25 份精煉廢棄油脂被完全正確識(shí)別。

多維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜；固相萃??；游離甾醇；精煉廢棄油脂；判別

甾醇屬于三萜烯類(lèi)化合物，是油料作物的一組特異性次生代謝物，它們?cè)谥参镉椭械暮亢徒M成能夠反映食用油的種類(lèi)[1-2]。植物甾醇在油脂中以游離態(tài)和結(jié)合態(tài)2 種形式存在，其中結(jié)合態(tài)又可以分為甾醇脂肪酸酯、甾醇酚酸酯、甾基糖苷以及?；藁擒? 類(lèi)[3-4]。目前，植物油中甾醇的測(cè)定一般先將油脂進(jìn)行皂化，然后再進(jìn)行分離檢測(cè)，這種方法測(cè)得游離態(tài)和甾醇酯類(lèi)的含量之和[5-11]；另一種方法則是先 將油脂進(jìn)行酸、堿水解，再進(jìn)行甾醇的分離檢測(cè)，可測(cè)得4 類(lèi)甾醇總含量[12]。然而關(guān)于油脂中14 種游離甾醇的分離及檢測(cè)方法則未見(jiàn)報(bào)道。

每種植物油都具有特征性的甾醇組成，其組成模式是鑒定食用油真?zhèn)蔚闹匾罁?jù)。Gázquez-Evangelista等[13]利用離線預(yù)處理高效液相色譜結(jié)合氣相色譜-火焰離子檢測(cè)器（high performance liquid chromatographygas chromatography-flame ionization detector，HPLC-GCFID）檢測(cè)不同植物油中甾醇的含量并建立了其指紋圖譜，成功地對(duì)特級(jí)初榨橄欖油、橄欖果渣油、葵花籽油和大豆油進(jìn)行區(qū)分和鑒別。然而，上述方法需要復(fù)雜的樣品前處理包括皂化、不皂化物的萃取等步驟，過(guò)程費(fèi)時(shí)費(fèi)力且消耗大量的有機(jī)溶劑。為了使甾醇信息更好地應(yīng)用于食用植物油的保真與摻偽鑒別，本研究基于固相萃取（solid phase extraction，SPE）及多維氣相色譜串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜（multidimensional gas chromatography coupled to time-of-flight mass spectrometry，GC-GCTOFMS），開(kāi)發(fā)了一種新的植物油游離甾醇的快速分離及檢測(cè)方法，并對(duì)常見(jiàn)6 種植物油及25 份精煉廢棄油脂（refined waste oil，RWO）進(jìn)行了檢測(cè)；同時(shí)通過(guò)對(duì)6 種常見(jiàn)植物油及精煉廢棄油脂樣品中14 種游離甾醇及β-香樹(shù)脂醇的分布模式及含量的分析，提出用判別指數(shù)（discriminated index，DI）鑒別精煉廢棄油脂，為精煉油脂的鑒別提供一種參考方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

商品大豆油（12 種）、花生油（18 種）、菜籽油（7 種）、葵花籽油（10 種）、玉米胚芽油（7 種）中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院；商品大豆油（11 種）、菜籽油（15 種）、葵花籽油（5 種）、玉米胚芽油（5 種）、棉籽油（10 種） 市購(gòu)；精煉廢棄油脂25 份 國(guó)家食品安全與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心。以上油脂樣品避光、貯藏在4 ℃的環(huán)境中，以供分析。

膽固醇（3β-cholest-5-en-3-ol，純度99%）、膽甾烷醇（5α-cholestan-3β-ol，分析純）、菜油甾醇（[24S]-24-methyl cholesta-5,22-dien-3β-ol，分析純）、蕓薹甾醇（[24R]-24-methyl chole st-5-en-3β-ol，純度98%）、豆甾醇（[24S]-24-ethyl cholesta-5,22-dien-3β-ol，純度95%）、β-谷甾醇（[24R]-24-ethyl cholest-5-en-3β-ol，純度≥97%）和N-甲基-N-三甲基硅烷七氟丁酰胺（N-trimethylsilyl-N-methylheptafluorobutyramide，MSHFBA） 美國(guó)Sigma-Aldrich公司；1-甲基咪唑（純度99.0%） 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；正己烷（色譜純）、乙醚（分析純） 天津天力化學(xué)試劑有限公司；無(wú)水硫酸鈉（分析純） 天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

多維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜（配有Pegasus 4D GC×GC-TOFMS軟件，版本為4.43.3.0） 美國(guó)Leco公司；一維毛細(xì)管色譜柱：HP-5MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）、二維毛細(xì)管色譜柱：DB-17ht（1.5 m× 0.10 mm，0.15 μm） 美國(guó)安捷倫公司；ASPEC XL型-固相萃取儀 美國(guó)Gilson公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國(guó)Heidolph公司；固相萃取柱（二氧化硅，0.5 g/6 mL）北京迪馬科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 游離甾醇的分離

上樣液的制備：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.05g（精確到小數(shù)點(diǎn)后4 位）油樣，并加入20 μg膽甾烷醇內(nèi)標(biāo)，然后用5 mL正己烷溶液溶解，渦旋振蕩均勻，備用。

SPE柱的活化：稱(chēng)取1.0 g無(wú)水硫酸鈉加到SPE柱的上方，然后用10 mL正己烷溶液活化，流速1.5 mL/min，棄去流出液；上樣：將5 mL樣品液注入到SPE柱中，控制流速1.2 mL/min，棄去流出液；淋洗：用10 mL體積分?jǐn)?shù)5%乙醚-正己烷溶液進(jìn)行淋洗，除去甘油三酯和甾醇酯類(lèi)化合物，流速控制在1.2 mL/min，棄去流出液；洗脫：用10 mL體積分?jǐn)?shù)為20%乙醚-正己烷溶液洗脫游離甾醇并收集于潔凈干燥的試管中，流速控制在1.5 mL/min。

1.3.2 甾醇的甲基硅烷化衍生

根據(jù)ISO 12228∶1999 Animal and vegetable fats and oils-determination of individual and total sterols contents-gas chromatographic method[14]的方法，對(duì)1.3.1節(jié)中得到的甾醇類(lèi)化合物進(jìn)行硅烷化衍生。將1.3.1節(jié)中得到的10 mL洗脫液在40 ℃真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至大約1 mL，然后轉(zhuǎn)移到反應(yīng)瓶中，用氮?dú)饩従彺蹈扇軇偌尤?00 μL硅烷化試劑（MSHFBA∶1-甲基咪唑=95∶5，V/V），旋緊反應(yīng)瓶蓋，放于105 ℃恒溫箱中反應(yīng)15 min，然后冷卻至室溫供分析。

1.3.3 色譜條件

多維GC分析中包含2 根毛細(xì)管色譜柱，其中一維柱為HP-5MS，二維柱為DB-17ht。進(jìn)樣口溫度320 ℃；載氣為氦氣；流速0.8 mL/min；進(jìn)樣量1 μL；分流比20∶1。一維爐溫箱的升溫程序：初始溫度190 ℃，保持1 min，然后以5 ℃/min升到305 ℃，并保持25 min；二維爐溫箱的溫度比一維爐溫箱高10 ℃，升溫程序保持一致。調(diào)制器溫度補(bǔ)償25 ℃。

1.3.4 質(zhì)譜條件

電子電離源；電子能量70 eV；傳輸線溫度300 ℃；檢測(cè)器電壓1 750 V；離子源溫度250 ℃。質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集頻率10 次/s；掃描質(zhì)量數(shù)m/z 50～600；溶劑延遲600 s。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理使用LECO公司Pegasus 4D GC×GCTOFMS軟件，版本為4.43.3.0。

1.3.5 定性和定量分析

定性分析：根據(jù)各甾醇的相對(duì)保留時(shí)間（relative retention times，RRTs，以膽固醇為基準(zhǔn)，其中膽固醇的RRT為1.000），并將其質(zhì)譜圖與NIST譜庫(kù)的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖進(jìn)行比對(duì)，對(duì)油脂樣品中的甾醇進(jìn)行定性。各甾醇三甲基硅醚的相對(duì)保留時(shí)間和重要定性離子如表1所示。

定量分析：對(duì)于不飽和的甾醇采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量，標(biāo)準(zhǔn)曲線的每個(gè)質(zhì)量濃度點(diǎn)各加20 μg內(nèi)標(biāo)，其中膽固醇、菜油甾醇、蕓薹甾醇以及β-谷甾醇內(nèi)標(biāo)曲線的質(zhì)量濃度梯度分別為：0.1、0.2、0.4、0.8、1.5、3.0 μg/100 μL；0.1、1、5、10、20、30 μg/100 μL；1、5、10、20、30、40 μg/100μL；10、20、40、80、120、140 μg/100μL；豆甾醇的質(zhì)量濃度梯度與蕓薹甾醇相同。對(duì)于油樣中的β-香樹(shù)脂醇和其他不飽和甾醇（24-亞甲基膽固醇、Δ7-蕓薹甾烯醇、Δ5,23-豆甾二烯醇、Δ5-燕麥甾烯醇、Δ5,24-豆甾二烯醇、Δ7-豆甾烯醇和Δ7-燕麥甾烯醇），其含量的估算統(tǒng)一使用豆甾醇內(nèi)標(biāo)曲線，曲線中豆甾醇的質(zhì)量濃度梯度為0.1、0.5、1、2、4、8、16 μg/100μL。油脂樣品中飽和甾醇（蕓薹甾烷醇、谷甾烷醇）在結(jié)構(gòu)上和內(nèi)標(biāo)相似度最高，因此通過(guò)和樣品中內(nèi)標(biāo)直接相比后便可計(jì)算其含量，響應(yīng)因子為1.0。各甾醇三甲基硅醚的定量離子組合如表1所示。油脂樣品中游離甾醇含量以mg/100 g表示，每個(gè)樣品獨(dú)立平行測(cè)定3 次，以其平均值做進(jìn)一步的數(shù)據(jù)分析。

表 1 甾醇三甲基硅烷化衍生物的GC-GC-TOFMS分析結(jié)果Table 1 GC-GC-TOFMS results of trimethylsilyl sterol ethers

1.3.6 方法驗(yàn)證

空白油樣的獲得：根據(jù)1.3節(jié)中樣品前處理的方法，將500 mg花生油溶解于5 mL正己烷中，然后進(jìn)行上樣和淋洗，并將5 mL上樣流出液和10 mL淋洗流出液收集于潔凈干燥的試管中，然后將其濃縮至5 mL，作為第2次處理的上樣液。以同樣的步驟進(jìn)行第2、第3次和第4次處理，并將第4次的上樣流出液和淋洗流出液（共計(jì)15 mL）收集于潔凈干燥的試管中，再用氮?dú)饩従弻⑷軇┐蹈?，得到空白的花生油樣。該空白油樣?jīng)檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)游離甾醇，然后將其轉(zhuǎn)移到棕色玻璃瓶中，密封后避光貯藏在—28 ℃的冰箱中，備用。

方法的檢出限（limit of detection，LOD）、定量限（limit of quantifi cation，LOQ）、線性范圍、重復(fù)性和回收率實(shí)驗(yàn)根據(jù)分析方法驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行[15]。

2 結(jié)果與分析

2.1 GC-GC-TOFMS分析

油脂樣品中的游離甾醇經(jīng)過(guò)SPE分離和硅烷化衍生后用GC-GC-TOFMS進(jìn)行分析，結(jié)果表明：14 種游離甾醇和β-香樹(shù)脂醇的硅烷化衍生物在HP-5MS串聯(lián)DB-17ht的二維GC上可以得到很好地分離，如圖1所示。和Toledano等[16]報(bào)道的30 m單柱（0.25 mm×0.25 μm，質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%苯基聚甲基硅酮毛細(xì)管柱）相比，各甾醇三甲基硅醚在GC-GC上得到了更好地分離；另外，24-亞甲基膽固醇、蕓薹甾醇和蕓薹甾烷醇在GC-GC上的分離效果也比50 m SE-54單柱（0.25 mm×0.10 μm）的分離效果要好[14]。根據(jù)各甾醇三甲基硅醚的RRTs和MS數(shù)據(jù)，可以對(duì)油脂樣品中的游離甾醇逐一確定，結(jié)果如表1所示。不同于其他文獻(xiàn)[17-22]報(bào)道，本研究可以同時(shí)分離和檢測(cè)植物油中14 種游離甾醇（表1）和一種甾醇類(lèi)似物（β-香樹(shù)脂醇），并通過(guò)分析它們?cè)诓煌椭械暮考胺植寄Ｊ?，尋找精煉廢棄油脂和正常食用植物油的差別。

圖 1 大豆油（17號(hào)樣品）中游離甾醇SPE萃取物經(jīng)過(guò)硅烷化衍生后的多維氣相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜色譜圖Fig.1 GC-GC-TOFMS chromatogram of silylated fre e sterols extracted from soybean oil (sample 17) by SPE

2.2 方法驗(yàn)證

根據(jù)方法學(xué)驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)[15]，按照質(zhì)量濃度從高到低的原則依次向空白花生油樣中添加代表性甾醇進(jìn)行方法的LOD和LOQ實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。由于各游離甾醇在不同種類(lèi)油脂樣品中的含量有較大的差異，因此各標(biāo)準(zhǔn)曲線建立時(shí)應(yīng)根據(jù)其在樣品中的實(shí)際含量范圍選擇合適的質(zhì)量濃度梯度（如本研究1.4節(jié)定量分析所述），數(shù)據(jù)經(jīng)回歸擬合后得到各游離甾醇的計(jì)算公式，其相關(guān)系數(shù)（R2）都不小于0.997 3，表明在整個(gè)定量質(zhì)量濃度范圍內(nèi)GCGC-TOFMS的響應(yīng)都具有較好的線性關(guān)系。為了驗(yàn)證整個(gè)方法的準(zhǔn)確度和重復(fù)性，將膽固醇、菜籽甾醇、蕓薹甾醇以及β-谷甾醇在3 個(gè)不同質(zhì)量濃度水平（低、中、高）分別添加到空白花生油中，然后經(jīng)過(guò)SPE分離和硅烷化衍生后進(jìn)行GC-GC-TOFMS分析，并計(jì)算各甾醇在不同添加水平條件下的回收率和精密度（重復(fù)性），結(jié)果如表2所示。從表2可以看出，各甾醇在不同添加水平條件下平均回收率都不小于93%，并且其精密度符合方法學(xué)驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)的要求[15]，低質(zhì)量濃度添加時(shí)甾醇實(shí)測(cè)值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）最大為10.0%，高質(zhì)量濃度添加時(shí)其RSD最小為1.4%，這也表明本方法具有良好的準(zhǔn)確度和重復(fù)性。

表 2 方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果Table 2 Validation of the established method

2.3 常見(jiàn)植物油和精煉廢棄油脂樣品分析

表 3 典型大豆油中游離甾醇的分布模式及含量Table 3 The distribution mode of free phytosterols and their contents in typical soybean oil

為確保在日常檢測(cè)中方法的穩(wěn)定性，在每天進(jìn)行正式樣品檢測(cè)前需先進(jìn)行質(zhì)控（quality control，QC）樣品的測(cè)定，每次獨(dú)立平行測(cè)定3 次，考察回收率和精密度。QC樣品是在空白花生油中分別添加一定量的菜籽甾醇（35 mg/100 g）、蕓薹甾醇（35 mg/100 g）、豆甾 醇（35 mg/100g）和谷甾醇（140 mg/100g）而制得。結(jié)果表明，在整個(gè)樣品檢測(cè)期間，QC樣品中各甾醇的平均回收率不小于97%，各甾醇實(shí)測(cè)值的RSD小于3%（n=3），表明方法的穩(wěn)定性較好。在本研究的實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)所有油脂樣品進(jìn)行了分析，其中典型大豆油游離甾醇分布模式及含量如表3所示。從表3可以看出，大豆油中主要的游離甾醇是β-谷甾醇、豆甾醇和蕓薹甾醇，另外還含有一定量的Δ5-燕麥甾烯醇、β-香樹(shù)脂醇、Δ7-豆甾烯醇和谷甾烷醇，而其他甾醇的含量則較低，這和Lechner等[23]的報(bào)道是一致的。

為能夠正確區(qū)分和識(shí)別精煉廢棄油脂，本研究對(duì)6 種商品植物油及25 份精煉廢棄油脂中14 種游離甾醇及β-香樹(shù)脂醇的分布模式及含量進(jìn)行了分析，找到3 種關(guān)鍵性游離甾醇，分別是膽固醇、Δ5-燕麥甾烯醇和Δ5,24-豆甾二烯醇。同時(shí)，提出DI，即：正常食用油（或精煉廢棄油脂）中的Δ5-燕麥甾烯醇和Δ5,24-豆甾二烯醇二者含量之和與其膽固醇含量的比值。通常來(lái)講，因反復(fù)加熱和過(guò)度精煉以及引入動(dòng)物油脂成分的緣故，精煉廢棄油脂中Δ5-燕麥甾烯醇和Δ5,24-豆甾二烯醇的含量通常會(huì)降低而膽固醇含量則會(huì)升高，因此DI更能突出廢棄油脂和正常食用油之間的差別。本研究中6 類(lèi)常見(jiàn)植物油及25 份精煉廢棄油脂樣品的關(guān)鍵游離甾醇含量及DI值如表4所示。

表 4 6 類(lèi)常見(jiàn)植物油及精煉廢棄油脂（RWOs）樣品的關(guān)鍵游離甾醇含量及DI值Table 4 The contents of key free phytosterols and DI values of six common vegetable oils and the refifi ned waste oils (RWOs)

從表4可以看出，在6 種植物油中膽固醇含量最高的是棉籽油，平均為1.25 mg/100g，而葵花籽油中膽固醇的含量最低，平均為0.26 mg/100g。若以膽固醇含量作為精煉廢棄油脂的判別指標(biāo)并考慮到誤判風(fēng)險(xiǎn)，可以將判定閾值設(shè)為2.0 mg/100g。從表4可知，在25 份精煉廢棄油脂中共有15 份樣品的膽固醇含量大于2.0 mg/100g，其中含量最高的是RWO21，膽固醇為146.80 mg/100g。但是由于精煉廢棄油脂來(lái)源廣泛、成分復(fù)雜，一些煎炸老油膽固醇含量低于判定閾值[24-25]，此時(shí)利用膽固醇作為判定指標(biāo)漏檢率較高。而本研究提出的DI值可以大大降低假陽(yáng)性和假陰性。各種植物油中葵花籽油的DI值最大，平均為64.55；而大豆油、菜籽油和棉籽油的DI值比較接近，分別為9.37、10.31和9.25。從理論上來(lái)講，以上6 種植物油之間任意進(jìn)行調(diào)配，其DI值都應(yīng)該不小于棉籽油的DI值，因此本研究將精煉廢棄油脂的判定DI值設(shè)為6，對(duì)于DI小于6的樣品可以判為精煉廢棄油脂，對(duì)于DI在6～9之間的樣品則需要進(jìn)一步分析其完整游離甾醇信息，或者結(jié)合其他方法進(jìn)行判定。25 份精煉廢棄油脂的DI值都小于6，其中最小值為0，最大值為5.49，和正常植物油相比具有顯著性差異。對(duì)RWO15（DI=5.49）的游離甾醇進(jìn)行進(jìn)一步分析可以發(fā)現(xiàn)：該樣本具有較高的豆甾醇（27.54 mg/100 g）和相對(duì)較高的谷甾烷醇（1.03 mg/100 g），可以判定該樣本應(yīng)該是大豆源的精煉廢棄油脂。本研究結(jié)果顯示，DI值在精煉廢棄油脂判定中具有較廣泛的適應(yīng)性和較高的正確率。

3 結(jié) 論

本研究開(kāi)發(fā)了1 種植物油中游離甾醇的SPE-GC-GCTOFMS檢測(cè)方法，與普通一維GC比，游離甾醇及β-香樹(shù)脂醇的三甲基硅烷化衍生物在多維GC上得到了更好地分離。同時(shí)，加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)和精密度實(shí)驗(yàn)表明：該方法準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，符合方法學(xué)驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)的要求。最后，利用本方法對(duì)6 種商品植物油及25 份精煉廢棄油脂中游離甾醇進(jìn)行了檢測(cè)，并分析其在植物油和廢棄油脂中的分布模式及含量，提出了基于DI的廢棄油脂鑒別方法，結(jié)果顯示25份精煉廢棄油脂被完全正確識(shí)別，可以作為精煉廢棄油脂鑒別的一種參考方法。

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A Method for Determination of Free Phytosterols Derived from Vegetable Oils by SPE-GC-GC-TOFMS and Its Application for Discrimination of Refi ned Waste Oils

XU Baocheng1,2,3, ZHANG Liangxiao2,4, WANG Hua5,*, YANG Qingqing2,6, LUO Denglin3, LI Peiwu2,4,6,7,8,*
(1. College of Food Science and Engineering, Northwest A&F University, Yangling 712100, China; 2. Oil Crops Research Institute of the Chinese Academy of Agricultural Sciences, Wuhan 430062, China; 3. College of Food and Bioengineering, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China; 4. Quality Inspection and Test Center for Oilseeds Products, Ministry of Agriculture, Wuhan 430062, China; 5. Shanxi Engineering Research Center for Viti-Viniculture, College of Enology, Northwest A&F University, Yangling 712100, China; 6. Laboratory of Risk Assessment for Oilseeds Products, Ministry of Agriculture, Wuhan 430062, China; 7. Key Laboratory of Biology and Genetic Improvement of Oil Crops, Minstry of Agriculture, Wuhan 430062, China; 8. Key Laboratory of Detection for Mycotoxins, Ministry of Agriculture, Wuhan 430062, China)

In this study, a multidimensional gas chromatography coupled to time-of-flight mass spectrometry (GCGC-TOFMS) method was established to determine free sterols in edible oils extracted by rapid solid-phase extraction. Compared with conventional one-dimensional gas chromatography, a better separation and a higher detection sensitivity for trimethylsilyl derivatives of free sterols and β-amyrin were obtained by GC-GC. Meanwhile, the validation results of the established method indicated that the limits of detection for cholesterol, brassicasterol, campesterol and β-sitosterol were 0.03, 0.04, 0.04 and 0.05 mg/100 g of oil, respectively; and the limits of quantification for the four sterols were 0.06, 0.08, 0.08 and 0.08 mg/100 g of oil, respectively. In addition, the recovery rates of the selected four sterols spiked at three different levels were higher than 93% with a relative standard deviation ranging from 1.4% to 10.0%. Based on theestablished method, six types of edible oils and 25 refi ned waste oils were analyzed by GC-GC-TOFMS, and the distribution mode of free sterols in normal vegetable oils and waste oils were also analyzed. Moreover, a method based on discrimination index (DI) was proposed to identify refined waste oils, and the results indicated that the refined waste oils could be discriminated from the normal six edible oils completely.

multidimensional gas chromatography-time-of-flight-mass spectrometry (GC-GC-TOFMS); solid phase extraction (SPE); free phytosterols; refi ned wasted oils; discrimination

TS207.3

A

1002-6630（2015）02-0188-06

10.7506/spkx1002-6630-201502036

2014-07-12

“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2012BAK08B03）；“雙打”相關(guān)產(chǎn)品檢驗(yàn)鑒定方法研究專(zhuān)項(xiàng)（2012104010-4）；

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（21205118）

徐寶成（1976—），男，講師，博士研究生，研究方向?yàn)檗r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)。E-mail：xbc76@163.com

*通信作者：王華（1959—），女，教授，博士，研究方向?yàn)槭称钒踩c質(zhì)量控制。E-mail：wanghua@nwsuaf.edu.cn

李培武（1961—），男，研究員，博士，研究方向?yàn)檗r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)。E-mail：peiwuli@oilcrops.cn