吳曄

摘 要：以COLT、ZY-1、G6、07、06-1、大櫻桃、y-1、y-2、y-4、y-5等10個(gè)櫻桃砧木組培試管苗為試材，進(jìn)行了櫻桃砧木試管苗的耐熱性差異觀測(cè)，結(jié)果表明，試管苗莖尖抽生溫度、莖尖徒長(zhǎng)溫度區(qū)間及持續(xù)高變溫處理下存活情況均存在差異，G6、07、Y-2、Y-5、Y-1等5個(gè)砧木試管苗在白晝37 ℃，夜晚32 ℃處理下能耐受18 d，達(dá)到了試管苗熱處理脫毒條件。

關(guān)鍵詞：櫻桃砧木；試管苗；熱處理；耐熱性

文章編號(hào)：1005-345X（2015）06-0005-03 中圖分類號(hào)：S662.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

病毒，幾乎能感染所有的細(xì)胞型生物，植物受侵染后，可經(jīng)無(wú)性繁殖用的營(yíng)養(yǎng)器官傳至下一代，使該植物發(fā)生退化。病毒和寄主植物對(duì)高溫存在忍耐差異，使植物莖尖生長(zhǎng)速度超過(guò)病毒繁殖擴(kuò)散速度，獲取不含病毒的植物分生組織，從而培育脫毒個(gè)體。試管苗熱處理脫毒是將熱處理與莖尖組織培養(yǎng)結(jié)合應(yīng)用，利用病毒高溫鈍化現(xiàn)象及植物生長(zhǎng)本身所具有的頂端存在數(shù)量極少或檢測(cè)不到病毒的生長(zhǎng)點(diǎn)原理，培養(yǎng)獲得無(wú)病毒原種繁殖材料。在熱處理試管苗的過(guò)程中，理論上溫度越高、時(shí)間越長(zhǎng)，脫毒效果越好，但是，持續(xù)高溫會(huì)引起植株代謝紊亂、分生組織細(xì)胞突變、品種變異風(fēng)險(xiǎn)增強(qiáng)等，甚至存活率下降。因而植物耐熱性允許范圍是試管苗熱處理脫毒法的關(guān)鍵條件。本試驗(yàn)將10個(gè)無(wú)性系櫻桃砧木試管苗放置人工氣候箱中，預(yù)處理后，變溫?zé)崽幚?，通過(guò)植株莖尖快速生長(zhǎng)及熱害癥狀的外觀形態(tài)表現(xiàn)，觀察各個(gè)無(wú)性系櫻桃砧木試管苗的耐熱性。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)在天水市果樹(shù)研究所組培室進(jìn)行，試材為該所組培室繼代培養(yǎng)的櫻桃砧木組培試管苗，分別為COLT、ZY-1、G6、07等10個(gè)無(wú)性系，在接種環(huán)境、時(shí)間及生長(zhǎng)條件相同的瓶苗中，挑選長(zhǎng)勢(shì)健壯、較一致的各3瓶。

熱處理所用人工氣候箱為寧波江南儀器廠生產(chǎn)，型號(hào)RXZ-280A；加濕器為亞都超聲波加濕器，加濕器中用水均為蒸餾水。

1.2 試驗(yàn)方法

人工氣候箱設(shè)定為濕度75%，白晝18 h，黑夜6 h。放入待試材料，首先預(yù)處理將氣候箱內(nèi)溫度設(shè)置為以白晝25 ℃、黑夜25 ℃起始（此為待試材料所在組培室溫度），逐日白晝、黑夜均升高1 ℃，升至白晝、黑夜均為32 ℃時(shí)，在此條件下連續(xù)處理3 d。然后設(shè)置將黑夜溫度保持在32 ℃，白晝逐日升高1 ℃，直至37 ℃；最后在白晝37 ℃，黑夜32 ℃條件下連續(xù)處理18 d。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同砧木莖尖抽生溫度不同

在本試驗(yàn)處理下，受試材料在白晝?cè)O(shè)定為33 ℃時(shí)表現(xiàn)出差異：砧木ZY-1、07、Y-2、Y-1，白晝?cè)O(shè)定為33 ℃時(shí)，植株莖尖開(kāi)始抽生；砧木COLT、G6、Y-5、06-16，白晝?cè)O(shè)定為34 ℃時(shí)，植株莖尖開(kāi)始抽生；砧木大櫻桃，白晝?cè)O(shè)定為35 ℃時(shí)，植株莖尖開(kāi)始抽生（表1）。

2.2 不同砧木莖尖徒長(zhǎng)溫度區(qū)間不同

②表1中，英文字母大寫表示莖尖生長(zhǎng)情況，A抽生，B徒長(zhǎng)，C生長(zhǎng)不明顯，D表示莖尖萎蔫，E整株死亡；英文字母小寫表示葉片顏色變化，a濃綠，b綠，c淺綠，d失綠，e黃葉增多，f邊緣枯黑，g枯葉增多。

COLT白晝?cè)O(shè)定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d及37 ℃下第1天此3 d區(qū)間內(nèi)，植株莖尖徒長(zhǎng)；ZY-1白晝?cè)O(shè)定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d及3 7 ℃下第1天、第2天此4 d區(qū)間內(nèi)，植株莖尖徒長(zhǎng)；G6白晝?cè)O(shè)定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d及37 ℃下第1天、第2天此4 d區(qū)間內(nèi)，植株莖尖徒長(zhǎng)；07在本試驗(yàn)溫度下未觀察到植株莖尖徒長(zhǎng)；大櫻桃白晝?cè)O(shè)定為36 ℃的1 d及37 ℃下第1天此2 d區(qū)間內(nèi)，植株莖尖徒長(zhǎng)；Y-2白晝?cè)O(shè)定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d及37 ℃下第1天、第2天、第3天此5 d區(qū)間內(nèi)，植株莖尖徒長(zhǎng)；Y-5白晝?cè)O(shè)定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d及37 ℃下第1天、第2天此4 d區(qū)間內(nèi)，植株莖尖徒長(zhǎng)；Y-1白晝?cè)O(shè)定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d此2 d區(qū)間內(nèi)，植株莖尖徒長(zhǎng)；06-16白晝?cè)O(shè)定為35 ℃的1 d、36 ℃的1 d及37 ℃下第 1天此3 d區(qū)間內(nèi)植株莖尖徒長(zhǎng)；Y-4白晝?cè)O(shè)定為34 ℃的1 d、35 ℃的1 d此2 d區(qū)間內(nèi)，植株莖尖徒長(zhǎng)。

2.3 不同砧木在持續(xù)高溫下的不同耐受性觀察

白晝持續(xù)37 ℃高溫環(huán)境下，G6、07、y-2、y-5、y-1等植株莖尖18 d后生長(zhǎng)不明顯，葉片顏色保持不變，光合功能趨于正常；COLT植株莖尖在第4天葉片失綠，第9天萎蔫，黃葉增多，12 d死亡；ZY-1植株莖尖在第7天葉片失綠，第12天萎蔫，枯葉增多，14 d死亡；大櫻桃植株莖尖在第3天葉片失綠，第6天萎蔫，枯葉增多，8 d死亡；06-16植株莖尖在第3天葉片失綠，第4天萎蔫，葉片變黃，7 d死亡；Y-4植株莖尖在第2天葉片失綠，第6天萎蔫，枯葉增多，8 d死亡。

3 討論

觀察顯示，COLT、ZY-1、G6、07、大櫻桃、Y-2、Y-5、Y-1、06-16、Y-4等10個(gè)櫻桃砧木組培試管苗耐熱性允許范圍不同；G6、07、Y-2、Y-5、Y-1等5個(gè)砧木品種在白晝37 ℃夜晚32 ℃處理下能耐受18 d，達(dá)到試管苗熱處理脫毒條件。如：G6樣品經(jīng)中國(guó)農(nóng)科院果樹(shù)研究所國(guó)家落葉果樹(shù)脫毒中心病毒檢測(cè)，反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）顯示，脫除蘋果褪綠斑病毒（ACLSV）、李壞死環(huán)斑病毒（PNRSV）、李矮縮病毒（PDV）。而目前生產(chǎn)中因與大櫻桃品種嫁接親合力強(qiáng)，半矮化，且又分別抗寒、抗鹽堿，被廣泛應(yīng)用的COLT、ZY-1、大櫻桃、Y-4、06-16等5個(gè)砧木品種在白晝37 ℃夜晚32 ℃處理下均不能耐受18 d，在此處理下未出現(xiàn)熱害癥狀前的莖尖是否脫毒或病毒數(shù)量已極少，待檢測(cè)；試管苗耐受18 d處理后是否存在分生組織細(xì)胞突變、品種變異風(fēng)險(xiǎn)等，均需進(jìn)一步試驗(yàn)觀察。