周淑晶，李長勝，關(guān)文碧，武曉麗，劉雪，馬永強(qiáng)

(1.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江佳木斯 154007；2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院，北京 100193)

作為吲哚的生物電子等排體，吲唑類衍生物具有與吲哚類似的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，在抗炎、抗腫瘤、多巴胺拮抗、解熱鎮(zhèn)痛、抗艾滋病毒、調(diào)節(jié)蛋白酶活性、蛋白激酶和避孕等方面都有很好的藥物活性，在農(nóng)藥如除草劑等方面也有廣泛的應(yīng)用［1–2］，一些緩蝕劑、染料及甜味劑的分子中也存在著吲唑環(huán)［3］。由于吲唑類衍生物良好的生物活性和潛在的藥用價(jià)值，吲唑類衍生物的合成與分析倍受關(guān)注。

筆者在進(jìn)行5-溴-1H-吲唑硝化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)時(shí)得到一種副產(chǎn)物，經(jīng)1H NMR，IR及GC–MS確認(rèn)為1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮。目前有關(guān)吲唑類衍生物的分析方法的文獻(xiàn)報(bào)道較少［4–8］，筆者以實(shí)驗(yàn)室自制的1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮為試驗(yàn)對(duì)象，以氣相色譜法對(duì)其進(jìn)行定量分析，為吲唑類衍生物的分析提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：Aglient 6890型，F(xiàn)PD檢測(cè)器，美國安捷倫科技有限公司；

乙腈：色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮標(biāo)準(zhǔn)品：純度為99.5%，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)應(yīng)用化學(xué)系合成實(shí)驗(yàn)室；

1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮樣品：3批，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)應(yīng)用化學(xué)系合成實(shí)驗(yàn)室；

實(shí)驗(yàn)所用其它試劑均為分析純。

1.2 色譜條件

色譜柱：DB–5型（30 m×0.25 mm，0.25μm）；進(jìn)樣口溫度：220℃；檢測(cè)器溫度：250℃；程序升溫：色譜柱初溫為150℃，保持1 min，以10℃／min升溫至240℃，保留2 min；載氣：高純氮，流量為1 mL／min；進(jìn)樣體積：1.0 μL。

1.3 樣品預(yù)處理

稱取約含1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮0.02 g(準(zhǔn)確至0.000 1 g)的試樣，置于25 mL容量瓶中，加適量乙腈，用超聲波振蕩器振蕩脫氣5 min，冷卻至室溫后，以乙腈定容至標(biāo)線，搖勻，用0.22 μm的有機(jī)相濾膜過濾后進(jìn)樣。

2 結(jié)果與討論

2.1 溶劑的選擇

分別選用乙酸乙酯、乙腈以及二氯甲烷溶解樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)樣品在乙酸乙酯中的溶解度較在乙腈及二氯甲烷中小；二氯甲烷作溶劑時(shí)樣品不出峰，原因可能是FPD檢測(cè)器對(duì)二氯甲烷的響應(yīng)值較?。贿x用乙腈作溶劑時(shí)，樣品溶解好且色譜峰形較好。故選用乙腈作溶劑。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

在1.2色譜條件下，1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖如圖1。由圖1可知，1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮色譜峰峰形尖銳、對(duì)稱，與溶劑峰分離良好。

圖1 1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和檢出限

稱取約含1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮0.01 g(準(zhǔn)確至0.000 1 g)的標(biāo)準(zhǔn)品，置于10 mL容量瓶中，加適量乙腈，用超聲波振蕩器振蕩脫氣5 min，冷卻至室溫后，以乙腈定容至標(biāo)線，然后用乙腈分別 稀 釋 成100，150，200，250，300，500 mg／L的 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，搖勻，用0.22 μm的有機(jī)相濾膜過濾，按照1.2色譜條件進(jìn)樣分析，將色譜峰面積與對(duì)應(yīng)溶液的質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，結(jié)果表明1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮的質(zhì)量濃度在100～1 000 mg／L范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，線性方程為y=0.786 6x-16.811，相關(guān)系數(shù)為0.997 6。以3倍噪比定義檢出限，檢出限為0.01 mg／L。

2.4 方法精密度和準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確稱取同一批次1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮樣品3份，分別加入一定量3種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每份添加設(shè)5個(gè)水平，充分混勻后按1.3方法處理后測(cè)定，同一添加樣品重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定結(jié)果見表1。由表1可知，1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮平均回收率為98.1%～107.9%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.67%～1.89%，表明本法測(cè)量精密度良好，準(zhǔn)確度較高。

表1 1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取200 mg／L 1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3處理后，在1.2色譜條件下重復(fù)測(cè)定5次，測(cè)定結(jié)果見表2。由表2可知，5次測(cè)定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差為±0.74，表明試驗(yàn)方法具有較好的重現(xiàn)性，測(cè)定數(shù)據(jù)可靠。

表2 200 mg／L 1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮溶液重復(fù)測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)語

采用氣相色譜法測(cè)定1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮，方法準(zhǔn)確可靠，精密度良好且分析速度快。本法可適用于1-(5-溴-1H-吲唑-1-基)乙酮的質(zhì)量控制，并為吲唑類衍生物的分析提供借鑒。

［1］Demetrio R，Benedetta M，Stella C A，et al. Synthesis and antiproliferativeactivity of 3-amino-N-phenyl-1H-indazole-1-carboxamides［J］. European Journal of Medicinal Chemistry，2009，44(l): 165–178.

［2］Bender S L，Kania R S，Borchardt A J，et al. Indazole compounds and pharmaceutical compo-sitions for inhibiting protein kinases，and methods for their use［P］. American Patent，7141587，2006–11–28.

［3］Rodgers J D，Sun J H，Teleha C A，et al. Efficient Synthesis of 5-(Bromolmethyl)-and 5–(Am-inomethyl)–1–THP–Indazole［J］.Journal of Organic Chemistry，1997，62(16): 5 627–5 629.

［4］吳仲可，張萍華，陶宇梁，等.一種新型生長物質(zhì)——吲唑酯(Ethychlozate)的分析［J］.上海農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，1990，8(3): 195.

［5］Ismall H，Hamed E F，Ehab E，et al. Development and application of a validated stability-indicating HPLC method for simultaneous determination of granisetron hydrochloride，benzyl alcohol and their main degradation products in parenteral dosage forms［J］.Talanta，2010，82: 184–195.

［6］Shuko T，Aiko F，Ken-ichi S，et al. Determination of a novel calmodulin antagonist，3-{2-［4-(3-chloro-2-methylphenyl)-1-piperazinyl］ethyl-5，6-dimethoxy-1-(4-imidazolylmethyl)-1Hindazole dihydrochloride 3.5 hydrate，DY–9760e，in human plasma using solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography with fluorescence detection［J］. Journal of Chromatography B，1999，734: 39–45.

［7］Ismall H，Hamed E F，Ehab E，et al. Development and application of a validated stability-indicating high-performance liquid chromatographic method using photodiode array detection for simultaneous determination of granisetron，methylparaben，propylparaben，sodium benzoate，and their main degradation products in oral pharmaceutical preparations［J］. Journal of AOAC InternatIonal，2011，94(5): 1 447–1 462.

［8］武玉潔，王夙博，袁天翊，等.新型Rho激酶抑制劑抑制劑DL0805–1大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)初步研究［J］ .中國藥理學(xué)通報(bào)，2014，30(8): 1 171–1 174.