Bcl-2蛋白與雌激素受體在不同程度宮頸病變中的相關(guān)性研究

·論著·

Bcl-2蛋白與雌激素受體在不同程度宮頸病變中的相關(guān)性研究

倪麗芳1，路世芳2，高煥云3，陳硯凝4*

(1.河北省寧晉縣婦幼保健院檢驗科，河北 寧晉 055550；2.河北省寧晉縣婦幼保健院兒科，河北 寧晉 055550；3.河北省寧晉縣婦幼保健院外科，河北 寧晉 055550；4.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院病理科，河北 石家莊 050011)

[摘要]目的觀察Bcl-2蛋白與雌激素受體在不同程度宮頸病變中的表達。方法選取180例宮頸組織蠟塊，其中慢性宮頸炎40例，低度宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia Ⅰ,CINⅠ)40例，高度宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅡ～Ⅲ)60例，宮頸癌40例(其中鱗癌35，腺癌5例)。免疫組織化學(xué)法檢測ER蛋白和Bcl-2蛋白的表達水平，并進行相關(guān)性分析。結(jié)果隨著宮頸病變進展,ER的陽性率逐漸降低，與慢性宮頸炎組比較，CINⅡ～Ⅲ組、宮頸鱗癌組和腺癌組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，而CINⅠ組差異無統(tǒng)計學(xué)意義；隨著宮頸病變進展，Bcl-2蛋白陽性率逐漸升高，與慢性宮頸炎組比較，CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、宮頸鱗癌組和腺癌組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。CINⅡ～Ⅲ組中ER與Bcl-2的表達存在相關(guān)性，在其余組中不具有相關(guān)性。結(jié)論ER蛋白的表達水平隨宮頸病變程度的提高而降低，Bcl-2蛋白的表達水平則隨之升高，2種蛋白在高度分化的宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中具有明顯的相關(guān)性，聯(lián)合表達陽性可能是高度宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)生的主要機制之一。

[關(guān)鍵詞]宮頸腫瘤；宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變；受體，雌激素doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2015.08.031

[收稿日期]2014-12-19；[修回日期]2015-01-04

[作者簡介]倪麗芳(1979-),女，河北寧晉人，河北省寧晉縣婦幼保健院主管檢驗師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事臨床檢驗學(xué)研究。

通訊作者*

[中圖分類號]R737.33[文獻標志碼]B

宮頸癌是嚴重危害女性健康的惡性腫瘤，其在女性中的發(fā)病率僅位于乳腺癌之后，近年來有年輕化趨勢[1]。目前認為，高危型人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)感染直接導(dǎo)致宮頸癌的前期病變，且HPV與雌激素具有協(xié)同的致癌作用[2]。雌激素受體(estrogenreceptor，ER)是位于細胞膜上參與雌激素非基因轉(zhuǎn)錄效應(yīng)的一種配體依賴型轉(zhuǎn)錄因子，是雌激素與腫瘤發(fā)生聯(lián)系的關(guān)鍵中間物質(zhì)，其與雌激素結(jié)合后可通過雌激素應(yīng)答元件調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄[3]。Bcl-2蛋白是與細胞凋亡密切相關(guān)的細胞因子，受ER和雌二醇的影響。雖然目前已有報道顯示ER、Bcl-2蛋白在宮頸癌中有不同程度的異常表達，但兩者的表達水平是否有相關(guān)性目前并不清楚。本研究檢測不同程度宮頸病變組織中ER和Bcl-2蛋白的表達水平，并探討兩者在宮頸癌病變中的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1標本來源選取2012年2月—2013年12月河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院保存的180例宮頸組織石蠟標本。依據(jù)WHO病理組織學(xué)標準進行診斷，其中慢性宮頸炎組織石蠟標本40例，低度宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervicalintraepithelialneoplasiaⅠ,CINⅠ)組織石蠟標本40例，高度宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅡ～Ⅲ)組織石蠟標本60例，宮頸癌組織石蠟標本40例(鱗癌35例，腺癌5例)。慢性宮頸炎組織標本取自患有子宮肌瘤而進行子宮全切除手術(shù)的患者。排除標準：①接受過放化療的患者；②同時患有其他惡性腫瘤的患者；③妊娠及哺乳期婦女；④代謝性疾病患者；⑤近期使用過甾體類激素的患者?；颊吣挲g24～68歲，平均(36.5±12.4)歲，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，不同程度宮頸病變患者年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2試劑鼠抗人ER單克隆抗體(博士德)、鼠抗人Bcl-2單克隆抗體(上海億欣)、二步法抗兔、鼠通用型免疫組織化學(xué)檢測試劑盒(Dako)、山羊血清(Hyclone)。

1.3檢測方法①石蠟切片：將所有樣品分別進行石蠟切片(切片厚度為4μm)，用3%過氧化氫孵育去內(nèi)源性過氧化物酶活性，然后進行抗原修復(fù)(微波修復(fù)，中火6min，重復(fù)4次)。②免疫組織化學(xué)染色：按照試劑盒說明分別進行ER、Bcl-2免疫組織化學(xué)染色。首先用血清進行封片，分別滴加一抗，于4 ℃孵育過夜，然后加二抗室溫孵育1h，加二氨基聯(lián)苯胺顯色后用蘇木素進行復(fù)染，最后用中性樹膠封片，鏡檢。

1.4診斷標準細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為ER染色的陽性表達細胞，胞漿或細胞膜呈現(xiàn)棕黃色顆粒為Bcl-2陽性表達細胞。鏡檢時，隨機選取5個視野，使用圖像掃描分析系統(tǒng)計算陽性細胞率，并以下面標準判斷切片為陽性或陰性：陽性標準為陽性細胞率>10%，陰性標準為陽性細胞率<10%。

2結(jié)果

2.1ER蛋白和Bcl-2蛋白的表達慢性宮頸炎組織(圖1A)和宮頸上皮內(nèi)瘤變組織(圖1B和C)中的鱗狀上皮細胞、腺上皮細胞和間質(zhì)細胞均有ER蛋白的分布，受癌細胞侵犯的腺體中無ER蛋白分布，癌巢中有少量ER蛋白的表達(圖1D和E)。慢性宮頸炎組織、宮頸上皮內(nèi)瘤組織的上皮和腺體組織中均無Bcl-2表達，血管組織則染色較為明顯；宮頸癌組織中在癌巢及血管處則多有分布(圖2)。

2.2不同宮頸病變組織中ER和Bcl-2表達比較鱗癌組ER表達較慢性宮頸炎組和CINⅠ組明顯降低(P<0.05)，CINⅡ～Ⅲ組ER表達較慢性宮頸炎組也降低(P<0.05)；CINⅠ組、CINⅡ～Ⅲ組、鱗癌組和腺癌組Bcl-2表達較慢性宮頸炎組升高(P<0.05)。見表1。

表1　不同宮頸病變組織中 ER和 Bcl-2表達比較　(例數(shù)，%)

*P<0.05與慢性宮頸炎比較#P<0.05與CINⅠ組比較(χ2檢驗)

2.3ER與Bcl-2在不同宮頸病變組織中的陽性表達及相關(guān)性在CINⅠ中，Bcl-2表達陽性率52.5%(21/40)與ER表達陽性率62.5%(25/40)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，ER與Bcl-2表達也無關(guān)聯(lián)(列聯(lián)系數(shù)=0.295,P=0.121)；在CINⅡ～Ⅲ中，Bcl-2表達陽性率60.0%(36/60)與ER表達陽性率40.0%(24/60)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，ER與Bcl-2表達有關(guān)聯(lián)(列聯(lián)系數(shù)=0.389,P=0.006)；在鱗癌中，Bcl-2表達陽性率74.3%(26/35)與ER表達陽性率22.9.%(8/35)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，ER與Bcl-2表達無關(guān)聯(lián)(列聯(lián)系數(shù)=0.089,P=0.683)；在腺癌中，Bcl-2表達陽性率80.0%(4/5)與ER表達陽性率20.0%(1/5)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，ER與Bcl-2表達無關(guān)聯(lián)(列聯(lián)系數(shù)=0.250,P=0.402)。見表2。

表2　 ER與 Bcl-2在不同宮頸病變組織中的陽性表達　(例數(shù))

3討論

宮頸癌從宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ)逐步發(fā)展到早期浸潤癌，然后再發(fā)展到浸潤癌。臨床研究發(fā)現(xiàn)宮頸浸潤癌5年存活率約為67%，早期癌為90%，宮頸上皮內(nèi)瘤變的存活率則為100%[4]。一般認為HPV感染和其他多種因素共同作用導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生[5]。對口服避孕藥的研究發(fā)現(xiàn)雌激素水平與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，且其并不因絕經(jīng)而發(fā)生變化[6]。雌激素不僅可以通過誘發(fā)細胞突變而導(dǎo)致宮頸癌細胞持續(xù)生長，還可以通過抑制細胞凋亡，致使感染HPV的宮頸細胞不斷增殖[7]。外源或內(nèi)源性雌激素與胞核內(nèi)的的ER結(jié)合后，同目的基因啟動子附近的雌激素受體反應(yīng)元件再結(jié)合，與相關(guān)輔助因子形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物，從而啟動基因的轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)雌激素促進細胞增殖、抑制細胞凋亡的功能[8]。Bcl-2蛋白是一種線粒體內(nèi)膜蛋白，可以減少由各種刺激引起的細胞損傷，從而抑制細胞凋亡[9]。染色體易位、轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)異常等因素均能導(dǎo)致Bcl-2蛋白的過度表達，在抑制細胞凋亡的同時，能保持突變基因促進腫瘤的發(fā)生[10]。有文獻報道，Bcl-2蛋白的表達水平因腫瘤分化程度不同而不同，在分化程度較高的腫瘤組織中Bcl-2蛋白的表達量也相應(yīng)較高[11]。本研究檢測了不同病變程度宮頸組織中ER和Bcl-2的表達水平，并探討了兩者在宮頸癌變中的相關(guān)性。研究結(jié)果顯示隨著宮頸病變的加重，ER蛋白表達的陽性率逐步降低，提示ER蛋白在宮頸癌進展中起著保護作用；鱗癌組與腺癌組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明ER蛋白的表達量與腫瘤類型和分化程度無關(guān)。ER蛋白在腫瘤組織中表達量相對較低的原因可能是因為較高的雌激素水平導(dǎo)致雌激素-ER蛋白二聚體增多，游離的ER蛋白相應(yīng)降低。Bcl-2蛋白在不同宮頸病變程度組織中的表達水平則與ER蛋白相反，其陽性率隨著病變程度的加重而升高，且鱗癌組與腺癌組表達差異也無統(tǒng)計學(xué)意義。提示Bcl-2蛋白的表達可能與宮頸病變的分化程度有關(guān)，而與腫瘤的類型無關(guān)，其表達量的升高在宮頸癌中是一個早期事件，這對患者的預(yù)后是很有利的。通過對不同宮頸病變組織中的ER蛋白和Bcl-2陽性表達進行相關(guān)性分析，得出在CINⅡ～Ⅲ中2種蛋白的表達具有相關(guān)性，在此階段2種蛋白的聯(lián)合表達率高于鱗癌和腺癌組，說明ER蛋白在CINⅡ～Ⅲ階段可能會調(diào)節(jié)Bcl-2的表達。雌激素-ER蛋白二聚體可通過增加內(nèi)源性Ca2+濃度，并激活MAPK而導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子的活化，從而進一步促進了Bcl-2的表達[12]。高度分化的宮頸上皮內(nèi)瘤變可能是雌激素作用的重要時期。

綜上所述，ER蛋白的表達水平隨宮頸病變程度的提高而降低，Bcl-2蛋白的表達水平則隨之升高，2種蛋白在高度分化的宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中具有明顯的相關(guān)性。(本文圖見封三)

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(本文編輯：劉斯靜)