丹酚酸B純化用大孔吸附樹脂的篩選

孫良明 保紅云 張媛媛 萬(wàn)亞靜 鄭學(xué)雙 孫百玲

（上海綠谷生命園醫(yī)藥有限公司 上海 201707）

丹酚酸B純化用大孔吸附樹脂的篩選

孫良明*保紅云 張媛媛 萬(wàn)亞靜 鄭學(xué)雙 孫百玲

（上海綠谷生命園醫(yī)藥有限公司 上海 201707）

目的：篩選出適合丹酚酸B純化的大孔吸附樹脂。方法：通過(guò)靜態(tài)-動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)對(duì)丹酚酸B純化用大孔吸附樹脂進(jìn)行篩選。以靜態(tài)吸附率、解吸率，動(dòng)態(tài)吸附率、洗脫率及合格洗脫率為指標(biāo)考察不同型號(hào)及同一型號(hào)不同廠家的樹脂純化丹酚酸B的性能。結(jié)果：D101型大孔吸附樹脂較其他型號(hào)樹脂更適合丹酚酸B的純化；而天津海光及西安藍(lán)曉兩個(gè)廠家D101型大孔吸附樹脂純化丹酚酸B的性能略有差異性。結(jié)論：D101型大孔吸附樹脂適用于丹酚酸B的純化。

丹參 丹酚酸B 大孔吸附樹脂

丹酚酸B是中藥丹參水溶性主要成分，具有抗腦及心肌缺血、調(diào)節(jié)血脂代謝、促血管生成及抗血小板等作用[1]，對(duì)冠心病、心絞痛[2-3]等疾病療效顯著。大孔吸附樹脂因吸附量大、選擇性高、易洗脫、易再生及操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)[4-5]，較常用于丹酚酸B的富集與純化[6-8]。目前，大孔吸附樹脂分離純化丹酚酸B一般針對(duì)樹脂型號(hào)、樹脂用量、除雜劑、洗脫劑、流速等參數(shù)進(jìn)行研究，尚未進(jìn)行相同型號(hào)不同廠家樹脂洗脫效果的探討。由于目前市場(chǎng)上大孔吸附樹脂種類眾多，生產(chǎn)的大孔吸附樹脂在樹脂材料方面缺乏統(tǒng)一、嚴(yán)格的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致大孔吸附樹脂在性能、安全性方面存在較大差異，甚至同一型號(hào)不同廠家的樹脂吸附洗脫能力也有不同，因此在研究大孔吸附樹脂分離純化丹酚酸B時(shí)，除了確定常規(guī)參數(shù)外，有必要對(duì)不同廠家同一型號(hào)樹脂進(jìn)行對(duì)比研究。我公司一直致力于丹酚酸B分離純化的研究，具有較成熟的大孔吸附樹脂分離純化丹酚酸B工藝。本研究根據(jù)我公司生產(chǎn)需求及樹脂生產(chǎn)現(xiàn)狀，對(duì)不同型號(hào)及同一型號(hào)不同廠家大孔吸附樹脂對(duì)丹酚酸B的吸附洗脫效果進(jìn)行考察，篩選出純化丹酚酸B效果較佳的大孔樹脂，為其應(yīng)用于丹酚酸B產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 儀器、試劑與材料

1200型高效液相色譜儀，配備四元泵及二極管陣列檢測(cè)器、Chemstation數(shù)據(jù)處理軟件（美國(guó)Agilent公司）；R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；AB135-S型電子天平（瑞士Mettler Toledo）。

D101型大孔吸附樹脂（西安藍(lán)曉科技有限公司，天津海光化工有限公司）；HP20型大孔吸附樹脂（日本三菱樹脂公司）；LX101、LX17型大孔吸附樹脂（西安藍(lán)曉科技有限公司）；丹參藥材（購(gòu)于山東魯安中藥飲片有限公司）；丹酚酸B對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定所，95.4%，批號(hào)111562-201212）；甲醇為色譜純；水為重蒸水；磷酸為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 上柱溶液的制備

將丹參藥材切粒，取丹參粗顆粒200 g，分別加入70%乙醇1 600、1 400、1 400 ml在80±3 ℃回流提取3次，每次2 h。合并提取液并減壓過(guò)濾，濾液在真空度-0.06～-0.1 MPa、溫度為60 ℃下濃縮至約200 ml，濃縮液加4倍量重蒸水充分?jǐn)嚢瑁o置4 h以上，減壓過(guò)濾，即得上柱溶液。

2.2 丹酚酸B的測(cè)定

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Zorbax C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-5 mmol/L磷酸二氫鉀（30∶70）；進(jìn)樣量10 μl，流速1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)290 nm；柱溫25 ℃；理論塔板數(shù)按丹酚酸B計(jì)算不低于1 500，丹酚酸B峰與相鄰峰的分離度應(yīng)大于2.0。

根據(jù)企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，在此檢測(cè)條件下，丹酚酸B（色譜）純度 ＞ 80%，峰面積 ＞ 500 mAU·s為合格洗脫液。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

取丹酚酸B對(duì)照品15 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2.0 ml，置20 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 樣品溶液的制備

精密吸取上柱溶液或洗脫液200 μl，用流動(dòng)相稀釋至1.5 ml，0.22～0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾后備用。

2.3 不同型號(hào)大孔吸附樹脂的篩選

2.3.1 靜態(tài)吸附法篩選大孔吸附樹脂

稱取HP20、LX101、D101（天津海光、西安藍(lán)曉）、LX17型樹脂適量（相當(dāng)于干樹脂1 g）置于100 ml錐形瓶中，精密加入上柱溶液30 ml（丹酚酸B 252 μg/ml），室溫下振搖24 h（100 r/min），濾紙過(guò)濾，取濾液進(jìn)行色譜檢測(cè)，按照式1計(jì)算吸附率；將濾出的樹脂加入到另一錐形瓶中，精密加入30%乙醇30 ml，室溫下振搖24 h，取濾液進(jìn)行色譜檢測(cè)，按照式2計(jì)算解吸率。

注：M0、M1和M2分別為上柱液、吸附后濾液和30%乙醇洗脫液中丹酚酸B質(zhì)量（μg）

2.3.2 動(dòng)態(tài)吸附法篩選大孔吸附樹脂

將檢測(cè)合格的大孔吸附樹脂160 g（約250 ml）裝入層析柱（5 cm×35 cm）中，用重蒸水進(jìn)行沖洗至流出液澄清。用3倍量柱體積（bed volume，BV）的95%乙醇以2.5 ml/min的流速進(jìn)行洗滌，再用重蒸水沖洗至無(wú)醇味。

取上柱溶液450 ml以0.5 BV/h的流速上樣，然后用3 BV的純化水以1.5 BV/h的流速進(jìn)行水洗，接著用2 BV 10%乙醇溶液以1 BV/h的流速進(jìn)行洗滌除雜，流出液、水洗液和洗滌液分別取樣并進(jìn)行HPLC檢測(cè)。

最后用4 BV 30%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，流速為1 BV/h，每10 min取樣進(jìn)行HPLC檢測(cè)，根據(jù)式3～5計(jì)算吸附率、洗脫率及合格洗脫率，并繪制洗脫曲線。

注：C0、C1、C2和C3分別為上柱液、流出液和水洗液及10%乙醇洗滌液、洗脫液和合格洗脫液中丹酚酸B濃度（mg/ml）； V0、V1、V2和V3為上柱液、流出液和水洗液及10%乙醇洗脫液、洗脫液和合格洗脫液總體積（ml）

2.4 兩廠D101大孔吸附樹脂純化丹酚酸B效果比較

稱取檢測(cè)合格的天津海光及西安藍(lán)曉生產(chǎn)的D101型樹脂160 g 各5份（柱體積250 ml），濕法裝柱并進(jìn)行預(yù)處理后，分別量取上柱溶液300、375、450、500 和550 ml同上吸附、洗滌和洗脫，每步取樣并進(jìn)行色譜檢測(cè)，計(jì)算吸附率、洗脫率、合格洗脫率。

3 結(jié)果

3.1 不同型號(hào)大孔吸附樹脂的篩選

3.1.1 靜態(tài)吸附法篩選大孔吸附樹脂

5種樹脂對(duì)丹酚酸B吸附-解吸能力見(jiàn)圖1；綜合比較靜態(tài)吸附率及靜態(tài)解吸率，D101型大孔吸附樹脂對(duì)丹酚酸B的吸附解吸效果最好，而LX17型大孔樹脂作為一種極性樹脂對(duì)丹酚酸B的吸附解吸能力較差，不利于丹酚酸B的純化。

圖1 5種樹脂靜態(tài)吸附-解吸結(jié)果

3.1.2 動(dòng)態(tài)吸附法篩選大孔吸附樹脂

5種樹脂動(dòng)態(tài)洗脫丹酚酸B的結(jié)果表明，D101型（西安、天津）大孔樹脂洗脫曲線的對(duì)稱性較好，峰面積較大；而LX101及LX17型樹脂洗脫曲線中丹酚酸B峰面積普遍較小，曲線對(duì)稱性較差，有明顯的拖尾現(xiàn)象導(dǎo)致合格洗脫液增多，不利于洗脫液的收集（圖2）。此外，D101型大孔吸附樹脂（西安、天津）吸附率、洗脫率、合格洗脫率均較高，合格洗脫液點(diǎn)數(shù)較少，收集容易，且合格洗脫液質(zhì)量較高；LX101型大孔樹脂對(duì)丹酚酸B具有較好的吸附能力，但洗脫能力較差，導(dǎo)致合格洗脫液增多，合格洗脫液質(zhì)量降低，合格洗脫率較低，不利于丹酚酸B的純化（表1）。

圖2 不同型號(hào)樹脂洗脫曲線

表1 4種型號(hào)樹脂吸附、洗脫比較

3.2 兩廠D101大孔吸附樹脂純化丹酚酸B效果比較

對(duì)兩個(gè)廠家D101型大孔吸附樹脂進(jìn)行純化丹酚酸B效果比較，隨著上樣量的增大，它們的吸附率、洗脫率及合格洗脫率均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)；天津海光和西安藍(lán)曉D101型大孔吸附樹脂最佳上樣量、吸附率、洗脫率及合格洗脫率分別為21.25vs24.81 mg/g（丹酚酸B/大孔吸附樹脂），91.83%vs92.53%、94.00%vs91.12%、87.22%vs86.01%（表2）。它們均適用于丹酚酸B的純化，只是吸附洗脫性能略有不同。

表2 上樣量對(duì)丹酚酸B純化效果的影響

4 討論

本論文采用靜態(tài)和動(dòng)態(tài)吸附-解吸法對(duì)不同型號(hào)及同一型號(hào)不同廠家的樹脂進(jìn)行篩選研究，除以吸附率、洗脫率等常規(guī)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)外，還在規(guī)定合格洗脫液標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，增加了以合格洗脫液及洗脫曲線作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，能更加充分地評(píng)價(jià)樹脂分離純化丹酚酸B的效果；與其他純化方法相比，本研究能在保證較高吸附率和洗脫率的基礎(chǔ)上得到純度大于80%的丹酚酸B，所建立的大孔樹脂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及大孔吸附樹脂純化丹酚酸B的工藝對(duì)工業(yè)化生產(chǎn)中樹脂型號(hào)、生產(chǎn)廠家篩選具有一定的借鑒意義。

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Screening of macroreticular resin for the purification of salvianic acid B from Salvia miltiorrhiza

SUN Liangming*, BAO Hongyun, ZHANG Yuanyuan, WAN Yajing, ZHENG Xueshuang, SUN Bailing

(Shanghai Green-Valley Shengmingyuan Pharmaceutical Co. Ltd., Shanghai 201707, China)

Objective:To select a kind of macroreticular resin for separating salvianolic acid B from Salvia miltiorrhiza.Methods:Macroreticular resins for the purification of salvianolic acid B were screened by the static-dynamic absorption experiment. The different types of resins and the same type of resins from different companies were evaluated for their abilities to purify salvianolic acid B by measuring the rates of the static and dynamic absorption and elution and the qualified elution rate.Results:Macroreticular resin D101 was more effective for purifying salvianolic acid B than others and its absorption-elution performance to salvianolic acid B was a little bit different between the resins produced in Tianjin Haiguang and Xi’an Lanxiao.Conclusion:Macroreticular resin D101 is suitable to the purification of salvianolic acid B.

Salvia mihiorrhiza; salvianolic acid B; macroreticular resin

R284.2; TQ460.6

A

1006-1533(2015)21-0073-04

2015-07-06）

孫良明（1972-），男，高級(jí)工程師，主要從事中藥工藝技術(shù)研究及質(zhì)量管理。E-mail：sunliangming136@sina.com