■馮志華 邵麗瑋 趙國先 龔建剛 張一為

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，河北保定071000；2.河北省畜牧獸醫(yī)研究所，河北保定071000；3.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，河北保定071000；4.天津市飼草飼料工作站，天津河西300210）

枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)是一類分布廣泛的好氧型、革蘭氏陽性桿狀細(xì)菌，能夠產(chǎn)生孢子，耐熱、抗逆性強，普遍存在于土壤和植物的表面，對人畜無毒無害，且不污染環(huán)境。由于枯草芽孢桿菌營養(yǎng)需求簡單、生長速度快，易于存活、定植及繁殖，可以分泌多種酶和抗生素，無致病性，而且還具備良好的發(fā)酵基礎(chǔ)，因此其用途十分廣泛。研究證實，枯草芽孢桿菌可改善腸道微生物組成，對病原菌有競爭排斥作用，對仔雞腸道內(nèi)致病性大腸桿菌具有抑制作用(LaRagione等，2001)；枯草芽孢桿菌能排斥來航仔雞腸道中沙門氏菌(LaRaglone等，2003)和產(chǎn)氣莢膜梭菌?？莶菅挎邨U菌還可以促進免疫器官發(fā)育及提高機體體液免疫功能。徐海燕等(2009)報道，飼糧中添加芽孢桿菌制劑能促進雛雞胸腺、脾臟和法氏囊發(fā)育，顯著提高血清中免疫球蛋白G的含量，增強抗應(yīng)激能力。

刺五加又名西伯利亞人參、五加參和刺拐棒等，與人參同屬五加科五加屬，為多年生落葉灌木，主要分布于我國東北、華北、陜西、西川以及廣西等地區(qū)，是我國東北地區(qū)典型的、豐富的藥用植物。我國對刺五加的研究始于其藥理作用，《神農(nóng)本草經(jīng)》列五加為上品，能“補中益氣，堅筋骨強意志，久服輕身抗衰老”。研究表明，刺五加含有刺五加多糖(ASPS)、皂苷和黃酮等主要活性成分，其中ASPS具有激活機體免疫應(yīng)答反應(yīng)、調(diào)節(jié)機體腸道微生態(tài)平衡、良好的抗腫瘤和抗感染等功效。王洪連等（2007）將從刺五加根中分離提取的水溶性多糖給予C57DL小鼠，結(jié)果小鼠胸腺增大。袁學(xué)千等（2004）研究表明，ASPS不僅能增加小鼠脾臟白髓總體積和淋巴結(jié)皮質(zhì)總體積，同時可以增加小鼠脾臟和腸系膜淋巴結(jié)的重量、細(xì)胞數(shù)目。尹富貴等（2007）和燕福永等（2010）研究表明，ASPS有助于提高斷奶仔豬腸道內(nèi)容物中乳酸桿菌數(shù)量，降低大腸桿菌數(shù)量，有利于盲腸中微生物多樣性。王淑潔（2008）和王長文等（2010）試驗表明，ASPS作為一種化學(xué)益生素，可提高犢牛消化道雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量，促進犢牛腸道有益菌群的生長繁殖。

枯草芽孢桿菌-刺五加多糖合生元在蛋雛雞上的應(yīng)用國內(nèi)外未見報道。本試驗擬通過飼養(yǎng)試驗和屠宰試驗研究一種枯草芽孢桿菌-刺五加多糖合生元對蛋雛雞的免疫器官指數(shù)及盲腸微生物的影響，對其全面評價枯草芽孢桿菌-刺五加多糖合生元在蛋雛雞日糧中的應(yīng)用效果具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗動物：海蘭褐蛋雛雞；金霉素，廣東粵農(nóng)獸藥集團有限公司，含量98%；

枯草芽孢桿菌-刺五加多糖合生元，由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院動物營養(yǎng)2345實驗室自制。

1.2 試驗設(shè)計

選擇600只健康、體重相似的1日齡海蘭褐蛋雛雞進行飼養(yǎng)試驗，試驗期56 d。隨機將蛋雛雞分成6組，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)25只。各組蛋雛雞飼養(yǎng)管理條件完全相同，試驗雞分為上、中、下三層全階梯籠養(yǎng)，各組均勻分布，消除位置不同帶來的影響，粉料投喂，自由采食、飲水，人工光照，機械通風(fēng)，常規(guī)免疫。具體分組設(shè)計見表1，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表2。

表1 飼養(yǎng)試驗設(shè)計

表2 日糧的組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗在河北省保定市易縣的河北青山種禽有限公司進行，試驗期56 d。雞舍進雛前對雞舍全面沖洗，消毒。試驗過程按養(yǎng)雞場的常規(guī)管理程序進行免疫，驅(qū)蟲，采光和通風(fēng)。采食方式、飲水方式、雞群密度按雞場程序調(diào)整。

在進雛當(dāng)天空腹稱雞重，分組，各組均勻分布于四層階梯式雞籠，消除位置引起的誤差。試驗期每天07:00和17：00各喂1次料，自由飲水。每天觀察雞群健康狀況，記錄死雞、病雞數(shù)量。

1.4 測定指標(biāo)和方法

1.4.1 免疫器官指數(shù)

分別在試驗結(jié)束時，從各重復(fù)中隨機取2只雞，空腹稱重后，頸靜脈放血處死，分離脾臟、胸腺和法氏囊，剔除脂肪后稱重、記錄，計算各免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=免疫器官濕重（g）/活體重（kg）。

1.4.2 盲腸微生物

盲腸微生物的檢測采用平板計數(shù)法。于試驗期結(jié)束時，各重復(fù)取2只雞進行宰殺，取盲腸末端2 cm腸段，液氮保存。在無菌操作臺上，取盲腸食糜0.5 g于滅菌離心管中，加入生理鹽水4.5 ml，稀釋成10-1，振蕩均勻后，吸取0.5 ml上清液轉(zhuǎn)入盛有4.5 ml生理鹽水的離心管稀釋至 10-2，按此法再逐級進行 10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的倍比稀釋，每個稀釋度設(shè)3個重復(fù)。大腸桿菌涂在麥康凱選擇性培養(yǎng)基上（北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠），37℃生化培養(yǎng)箱中有氧培養(yǎng)24 h后菌落計數(shù)；乳酸桿菌接種于乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基（MRS）上，雙歧桿菌接種于雙歧桿菌選擇性培養(yǎng)基（LB）上，均于37℃生化培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)48 h后進行菌落計數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2003處理，采用SPSS 17.0軟件進行方差分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，用Duncan's法進行數(shù)據(jù)間的多重比較，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 對蛋雛雞免疫器官指數(shù)的影響(見表3)

表3 枯草芽孢桿菌-刺五加多糖合生元對蛋雛雞免疫器官指數(shù)的影響

由表3數(shù)據(jù)可知，與Ⅰ組相比，Ⅳ、Ⅴ組胸腺指數(shù)比分別提高了5.84%、7.39%，差異均顯著（P＜0.05），Ⅲ、Ⅵ組差異均不顯著（P＞0.05）；與Ⅱ組相比，差異均不顯著（P＞0.05）；各試驗組間Ⅳ、Ⅴ顯著高于Ⅲ組（P＜0.05），Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組間差異均不顯著（P＞0.05），與Ⅰ組相比，Ⅳ、Ⅴ及Ⅵ組脾臟指數(shù)分別提高了5.83%、4.85%和2.91%，差異均顯著（P＜0.05），Ⅲ組差異不顯著（P＞0.05）；與Ⅱ組相比，Ⅳ、Ⅴ比Ⅱ組分別提高了4.81%、3.85%，差異均顯著（P＜0.05），Ⅲ、Ⅵ組差異均不顯著（P＞0.05）；各試驗組間，Ⅳ、Ⅴ組顯著高于Ⅲ、Ⅵ組（P＜0.05），Ⅳ和Ⅴ組間差異不顯著（P＞0.05）。與Ⅰ組相比，Ⅳ、Ⅴ組法氏囊指數(shù)分別提高了5.51%、7.09%，差異均顯著（P＜0.05），Ⅲ、Ⅵ組間差異均不顯著（P＞0.05）；與Ⅱ組相比，Ⅳ、Ⅴ及Ⅵ組比Ⅱ組分別提高了6.35%、7.94%、5.56%，差異均顯著（P＜0.05），Ⅲ組與Ⅱ組相比差異不顯著(P＞0.05)；各試驗組間Ⅳ、Ⅴ組顯著高于Ⅲ組，與Ⅵ組相比差異均不顯著（P＞0.05）。

2.2 對蛋雛盲腸微生物的影響

表4 枯草芽孢桿菌-刺五加多糖合生元對蛋雛雞盲腸微生物的影響（lg10/g）

從表4的數(shù)據(jù)可以得出，與Ⅰ組相比，盲腸大腸桿菌的數(shù)量Ⅴ、Ⅵ組分別降低了3.09%、4.40%，差異均顯著（P＜0.05），Ⅲ、Ⅳ組差異均不顯著（P＞0.05）；與Ⅱ組相比，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組分別提高了5.08%、2.87%、2.22%，差異均顯著（P＜0.05），Ⅵ組差異不顯著（P＞0.05）；各試驗組間，Ⅴ、Ⅵ組顯著低于Ⅲ、Ⅳ組（P＜0.05），Ⅴ和Ⅵ組間差異不顯著（P＞0.05）。與Ⅰ組相比，乳酸桿菌的數(shù)量Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組分別提高了4.44%、4.93%、2.96%，差異均顯著（P＜0.05），Ⅲ組差異不顯著（P＞0.05）；與Ⅱ組相比，Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組分別提高了5.35%、5.85%、3.86%，差異均顯著（P＜0.05），Ⅲ組與Ⅱ組相比差異不顯著（P＞0.05）；各試驗組間，Ⅳ、Ⅴ組顯著高于Ⅲ、Ⅵ組（P＜0.05），Ⅳ和Ⅴ組間差異不顯著（P＞0.05）。與Ⅰ組相比，雙歧桿菌的數(shù)量Ⅳ、Ⅴ組分別提高了2.90%、1.81%，差異均顯著（P＜0.05），Ⅲ、Ⅵ組間差異均不顯著（P＞0.05）；各試驗組間，Ⅳ、Ⅴ組顯著高于Ⅲ、Ⅵ組（P＜0.05），Ⅳ和Ⅴ組間差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 對免疫器官指數(shù)的影響

法氏囊、胸腺和脾臟是動物機體重要的免疫器官。它們是動物機體免疫功能的產(chǎn)生者和維持者，其生長發(fā)育狀況和結(jié)構(gòu)變化會直接影響機體免疫狀態(tài)。免疫器官重量的相對大小，從某種程度上反應(yīng)其免疫功能的強弱。一般認(rèn)為，動物免疫器官重量增加表明機體的免疫機能提高，重量減少表明機體免疫水平下降。許多研究表明，益生素可通過調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，改善腸道免疫屏障，進一步促進免疫器官的生長發(fā)育，提高機體免疫能力。靳二輝等研究發(fā)現(xiàn)，添加芽孢桿菌類益生素可明顯提高21和42日齡肉雞的法氏囊器官指數(shù)，以及42日齡肉雞的胸腺器官指數(shù)，但對21和42日齡肉雞的脾臟器官指數(shù)無顯著影響。芽孢桿菌類益生素對肉雞免疫器官生長發(fā)育有明顯促進作用，但其與肉雞日齡、生理狀態(tài)和添加劑量密切相關(guān)。本試驗中，不同水平的枯草芽孢桿菌-刺五加多糖合生元對蛋雛雞各免疫器官指數(shù)影響也不同。添加量為0.1%和0.8%時，對蛋雛雞胸腺、脾臟、法氏囊的指數(shù)無顯著影響；當(dāng)添加量為0.2%～0.4%時，作用效果均顯著，對胸腺指數(shù)的影響與金霉素作用相當(dāng)，對脾臟和法氏囊指數(shù)的影響作用顯著優(yōu)于金霉素，且添加量在0.2%～0.4%之間變化時，作用效果變化不顯著。

3.2 對盲腸微生物的影響

大腸桿菌是人和動物腸道中主要且數(shù)量較多的一種細(xì)菌，一般情況下不致病，為人和動物腸道中的必不可少的常居菌；但在一定條件下，它能侵入機體的某些部位，引起腸道感染，如膽囊炎、腹膜炎、膀胱炎及腹瀉等。所以大腸桿菌是一種既對機體有益又有潛在危險的雙性菌，我們必須要控制它的數(shù)量水平以防止其大量生長、繁殖進而引起機體病變。而乳酸桿菌、雙歧桿菌是存在于人和動物體內(nèi)兩種重要的益生菌，它們具有促進動物生長，調(diào)節(jié)胃腸道微生物菌群平衡，提高胃腸道健康，提高飼料利用率，提高機體免疫力等功能。人們往往把檢測腸道這三種菌的數(shù)量作為評價動物腸道菌群是否平衡和健康的指標(biāo)。從表4的數(shù)據(jù)及結(jié)果分析，我們可以看出，與對照組相比，0.4%和0.8%組可以顯著降低盲腸大腸桿菌數(shù)量，0.1%和0.2%組效果不顯著；0.1%、0.2%、0.4%組效果不如金霉素，0.8%組與金霉素作用相當(dāng)。在提高乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量上0.1%組效果不顯著，0.2%、0.4%效果均顯著，0.8%組可以顯著提高乳酸桿菌的數(shù)量卻不能顯著提高雙歧桿菌的數(shù)量，這可能與腸道內(nèi)菌群之間的拮抗、協(xié)同作用有關(guān)。綜合這3種菌的數(shù)量變化可得出，枯草芽孢桿菌-刺五加多糖合生元可以改善盲腸微生物平衡，且0.4%組效果最好。

4 結(jié)論

在本試驗條件下，枯草芽孢桿菌-刺五加多糖合生元產(chǎn)品對蛋雛雞免疫器官指數(shù)及盲腸微生物有顯著改善作用，其效果與添加量有關(guān)，就免疫器官指數(shù)而言，添加量為0.2%和0.4%時可以顯著提高蛋雛雞胸腺、脾臟、法氏囊器官指數(shù)，且0.2%與0.4%組差異不顯著；在改善盲腸微生物平衡方面，添加量為0.4%時可以顯著降低大腸桿菌數(shù)量，提高乳酸桿菌數(shù)量和雙歧桿菌數(shù)量。綜合考慮，0.4%組在提高免疫器官指數(shù)、改善盲腸微生物平衡方面效果較佳。

（參考文獻18篇，刊略，需者可函索）