龐寶成+王憲岱+梁久征

摘要：把蝦夷扇貝作為實驗材料，掌握蝦夷扇貝血涂片的制作方法，并運用HE染色組織切片的方法對蝦夷扇貝的組織結(jié)構(gòu)進行觀察以及分析。用5 mL注射器吸取2 mL肝素鈉，抽取1 mL左右蝦夷扇貝心臟血液，從載玻片一端滴一滴血液，左手水平拿著玻片，右手用另一個載玻片水平輕推血液，使其展平，在陰涼處風(fēng)干，同樣方法制取五個血涂片。留一個做空白對照，取兩個血涂片用瑞氏染液染色，其他兩個吉姆薩染液染色，放于陰涼處晾干留作觀察。取新鮮扇貝組織切成1.0 cm×1.0 cm×0.3 cm的組織塊，經(jīng)過固定、脫水與透明、浸蠟、包埋等過程后把組織塊切成4～6μm的石蠟切片。再經(jīng)過蘇木素染色鹽酸酒精褪色，后用伊紅染液復(fù)染等過程后用中性樹膠完成封片，待干后進行顯微鏡的觀察以及拍照。最后通過觀察與人體以及魚類相關(guān)的組織結(jié)構(gòu)進行分析對比。

關(guān)鍵詞：蝦夷扇貝;血涂片;蘇木素-伊紅染色法;組織結(jié)構(gòu)分析

蝦夷扇貝于1982年引進我國[1]。其原產(chǎn)于日本、俄羅斯千島群島等地，主要分布于鹽度較高，底質(zhì)硬，淤沙少且水深不超過40 m的沿岸海區(qū)[2]。后引進我國，主要養(yǎng)殖區(qū)域集中在遼東半島、山東長島等海區(qū)，生長速度較慢。蝦夷扇貝是近些年來貝類水產(chǎn)品的主要生產(chǎn)品種，其內(nèi)含有大量蛋白質(zhì)、EPA、DHA等對人體有益的成分[3]。具有相當(dāng)高的營養(yǎng)經(jīng)濟價值。并且因為蝦夷扇貝漂亮的外形，在我國南方將其稱為“圓貝”，其圓滿的造型象征著團聚、美滿，雌雄半殼貝作為“鴛鴦喜貝”經(jīng)常被搭配擺上婚宴餐桌，代表著對新人的祝福;同時蝦夷半殼貝圓滿的造型還是中秋佳節(jié)一家人團聚時候必不可少的美味佳肴，代表著團圓美好。

蝦夷扇貝由我國引入后，進行了較為成功的人工育苗和養(yǎng)殖試驗。現(xiàn)如今蝦夷扇貝在我國的大規(guī)模人工養(yǎng)殖和增殖也主要集中于遼寧、山東等北方沿海地區(qū)，并且養(yǎng)殖面積已經(jīng)達到了10萬平方公里[4]。在2011年，我國蝦夷扇貝產(chǎn)量達到1.3×106 t。遼寧大連的獐子島，因為其地理位置以及氣候環(huán)境等因素達到蝦夷扇貝成長所必須的要求，近年已經(jīng)發(fā)展成為國內(nèi)最大的蝦夷扇貝底播養(yǎng)殖基地，現(xiàn)已發(fā)展成為2 000多平方公里的海洋牧場。大連海洋島蝦夷扇貝生產(chǎn)基地也是因其含有蝦夷扇貝生長必須的營養(yǎng)鹽，并且海水的理化因子穩(wěn)定，周年穩(wěn)定的水溫，以及良好的水源環(huán)境和合適的鹽度發(fā)展成為了最為適宜蝦夷扇貝生長的理想之地。當(dāng)?shù)爻墒煳r夷扇貝個體大、貝柱肥、肉質(zhì)細(xì)、顆粒飽滿從而使海洋島蝦夷扇貝享譽國內(nèi)外[5]。但是近年來隨著蝦夷扇貝養(yǎng)殖規(guī)模的不斷變大、扇貝品種、環(huán)境、病害的問題，并且伴因為連續(xù)多代的人工繁殖，蝦夷扇貝的群體內(nèi)出現(xiàn)了近親雜交現(xiàn)象，因此蝦夷扇貝的養(yǎng)殖環(huán)境以及生長條件發(fā)生了劇變，導(dǎo)致近年的蝦夷扇貝各種問題，所以對蝦夷扇貝的觀察與組織結(jié)構(gòu)分析就顯得尤為重要[6]。

本次實驗利用血涂片的制作以及常規(guī)的組織切片、蘇木素-伊紅染色（HE染色）的方法，更加細(xì)致直觀的對蝦夷扇貝的組織器官細(xì)胞進行觀察以及分析，并且通過和魚類、哺乳動物同類別的組織細(xì)胞進行對比，了解其組織器官的特性，加深對蝦夷扇貝的了解。掌握這種方法也可以運用此種方法對其他動物組織進行試驗，更加精確的反應(yīng)一個生物的組織結(jié)構(gòu)。

1實驗材料及方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗器材5 mL注射器、1 mL注射器、1 000 mL試劑瓶、500 mL試劑瓶、紗布、鑷子、剪刀、電爐、洗衣粉、250 mL試劑瓶、染色缸、染色架、切片機、恒溫水浴鍋、載玻片、蓋玻片、烘箱。

1.1.2實驗藥品瑞氏染色試劑盒、苦味酸、碘酸鈉、明礬、95%乙醇、石蠟、氨水、檸檬酸、甘油、冰醋酸、鹽酸羥胺、蘇木素、伊紅、鉀明礬、中性樹膠、二甲苯、100%乙醇、鹽酸。

1.1.3實驗對象蝦夷扇貝（市場購得）。

1.2實驗方法

1.2.1藥品配制

波恩氏液：苦味酸飽和水溶液75 mL、冰醋酸5 mL以及甲醛溶液25 mL，三者充分互溶，此液體必須現(xiàn)用現(xiàn)配，用作組織固定液。

蘇木素液[7]：用1 000 mL蒸餾水將0.2 g碘酸鈉加溫到100 ℃溶解后加入1g蘇木素，使其呈現(xiàn)深櫻桃紅色，再加50 g明礬，使溶液變?yōu)樗{紫色，再繼續(xù)加熱煮沸，大約5 min過后加入50 g水合氯醛，并且攪拌，使液體變?yōu)樽霞t色，溶解完成后加入1g的檸檬酸，冷卻過濾后備用。該液體可以長時間的保存，若陳液水分蒸發(fā)，可以加入適量的2%鉀礬液稀釋即可。

伊紅：為了使實驗效果更好本次配制的伊紅染液為醇溶性伊紅，取伊紅2.5 g加入蒸餾水（少許）慢慢攪動，再加入95%的酒精500 mL，在加入酒精的過程中要不停的攪拌，直到徹底溶解。此時的試劑有些渾濁，可取少量的冰醋酸加入到試劑中，試劑會逐漸變得澄澈，并且試劑顏色變?yōu)轷r紅色。

1.2.2外部形態(tài)觀察從實驗所用的蝦夷扇貝中選取個體較大，結(jié)構(gòu)較為清晰，沒有明顯傷痕的扇貝，進行初步的外形觀察：蝦夷扇貝的外形呈標(biāo)準(zhǔn)的扇形，像一把打開的扇子，外形十分漂亮。觀察可見其殼頂位于中央、等側(cè)，并且殼頂兩側(cè)的殼耳大小相等，十分對稱。并且右殼的前耳有足絲孔。對貝殼的表面進行觀察可見貝殼的表面有15～20條放射肋，右殼的肋比較寬大短小，肋之間較為狹窄;左殼肋較細(xì)，肋間較寬有的有網(wǎng)目雕刻。右殼較左殼相對大些，并且呈現(xiàn)出黃白色，比較突出。而左殼相對平整，一般呈現(xiàn)紫褐色。殼內(nèi)面為淺白色，位于殼頂下方的內(nèi)韌帶呈倒三角，蝦夷扇貝為單柱類，其閉殼肌大，在殼的中后部[8]。

1.2.3血涂片制作選用5 mL的注射器抽取肝素鈉2 mL，再從蝦夷扇貝的心臟中抽取1 mL左右血液，從載玻片的一端滴一滴扇貝血液，左手拿玻片保持玻片水平，右手用另一個載玻片水平的輕輕將血液展平，置于陰涼處晾干，用相同方法制作五個血涂片。取其中兩個用瑞氏染液染色，再取兩個用吉姆薩染液染色，放于陰涼處晾干，清洗，留做后續(xù)觀察。