張愛華　任志成　王壯等

摘要：采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定12種生物農(nóng)藥對(duì)西洋參（Panax quiquefolium L.）主要病害病原菌的抑制作用，并進(jìn)行了4種藥劑對(duì)西洋參根病的田間防效試驗(yàn)。室內(nèi)抑菌測(cè)定結(jié)果表明，嘧菌酯、多黏類芽孢桿菌、2%氨基寡糖素水劑、熒光假單胞桿菌4種農(nóng)藥對(duì)西洋參黑斑病菌菌落生長(zhǎng)均有較好的抑制作用。嘧菌酯、2%氨基寡糖素水劑對(duì)西洋參疫病菌的抑制效果較好。多黏類芽孢桿菌、熒光假單胞桿菌對(duì)西洋參銹腐病病原菌的抑制效果較好。田間試驗(yàn)結(jié)果表明，熒光假單胞桿菌250倍液對(duì)西洋參病害的田間防治效果最好，防效最高可達(dá)95.17%。

關(guān)鍵詞：生物農(nóng)藥；西洋參病害；室內(nèi)抑菌；田間防效

中圖分類號(hào)： S435.675文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2015）11-0197-04

收稿日期：2014-10-21

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（編號(hào)：31070316、31100239、31200224）；吉林省科技發(fā)展計(jì)劃 （編號(hào)：20110926、20130206030YY、20140520159JH）。

作者簡(jiǎn)介：張愛華（1978—），女，山東泰安人，博士，副教授，研究方向?yàn)橹兴庂Y源生物技術(shù)。E-mail：blueice20021230@163.com。

通信作者：張連學(xué)，博士，教授，主要從事藥用植物資源研究。 E-mail：zlx863@163.com。西洋參（Panax quiquefolium L.）是五加科人參屬多年生草本植物，西洋參病害特別是西洋參根病是影響西洋參產(chǎn)量、質(zhì)量的重要因素[1-4]。導(dǎo)致西洋參根腐爛的主要包括銹腐病、黑斑病、疫病等，通稱根腐病[5-7]。西洋參根腐病研究在國內(nèi)外均有較多報(bào)道，目前生產(chǎn)上多采用化學(xué)農(nóng)藥防治西洋參根腐病，1年需施藥14次以上，病害高發(fā)期5 d左右即須噴藥1次，不但造成環(huán)境污染，而且?guī)磙r(nóng)藥殘留問題[8-9]。目前參農(nóng)仍然主要用代森類等化學(xué)源農(nóng)藥防治人參、西洋參根部病害，防治效果不理想，過度用藥造成的藥害現(xiàn)象經(jīng)常發(fā)生。如何有效控制人參、西洋參病害，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，成為人參、西洋參生產(chǎn)中亟需解決的問題。用生物源農(nóng)藥防治人參、西洋參病害，具有無毒、無污染等優(yōu)點(diǎn)，可以明顯減輕農(nóng)藥對(duì)環(huán)境的污染，提高人參、西洋參的產(chǎn)量及品質(zhì)。但是目前中藥材病害防治中還沒有已成型的生物制劑可以大面積應(yīng)用。本研究對(duì)生物源農(nóng)藥進(jìn)行了篩選，以期對(duì)推動(dòng)人參、西洋參產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試藥劑

107個(gè)/g多黏類芽孢桿菌細(xì)粒劑 （上海澤元海洋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)）；25%嘧菌酯懸浮劑[先正達(dá)（中國）投資有限公司生產(chǎn)]；2 %氨基寡糖素水劑（大連凱飛化學(xué)股份有限公司產(chǎn)）；3 000億個(gè)/g熒光假單胞桿菌粉劑（常州市蘭陵制藥有限公司生產(chǎn)

；2%春雷霉素液劑（南京柏藍(lán)科技有限公司生產(chǎn)

；80%乙蒜素乳油（河南科邦化工有限公司

；3%多抗霉素水劑（陜西康澤華工科技有限公司

；5%丙烯酸·香芹酚水劑（河北徐水縣農(nóng)藥廠

；88%水合霉素可溶性粉劑[華潤(rùn)（上海

生物科技有限公司]；2%寧南霉素水劑（黑龍江強(qiáng)爾生化技術(shù)開發(fā)有限公司

；3%中生菌素可濕性粉劑（福建省凱立生物制品有限公司

；10%井岡霉素水劑（浙江省桐廬匯豐生物化工有限公司）；80%代森錳鋅可濕性粉劑[先正達(dá)（中國）投資有限公司生產(chǎn)]。

1.2供試菌種

西洋參疫病菌（Phytophthora cactorum）、黑斑病菌（Alternaria panax）、銹腐病菌（Cylindrocarpon destructans）均由筆者所在實(shí)驗(yàn)室提供，用馬鈴薯瓊脂固體培養(yǎng)基（PDA）培養(yǎng)病菌。

1.3方法

1.3.1西洋參病原菌抑菌活性測(cè)定采用生長(zhǎng)速率法[10]測(cè)定西洋參病原菌抑菌活性。

1.3.1.1菌種的培養(yǎng)和菌餅的制備選皿底平坦、直徑為90 mm的潔凈培養(yǎng)皿，干燥滅菌，在無菌操作條件下，倒入PDA培養(yǎng)基，制成平板，待冷凝后接入供試菌種。置于25 ℃恒溫箱培養(yǎng)，待菌片均勻布滿培養(yǎng)皿時(shí)，用直徑為6 mm的打孔器在菌落邊緣切下帶菌培養(yǎng)基即為菌餅。

1.3.1.2帶毒培養(yǎng)基的制備在無菌條件下，待滅菌后的PDA培養(yǎng)基溫度降至55 ℃左右時(shí)，將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基自然分布均勻時(shí)，用移液槍迅速加入相應(yīng)濃度的農(nóng)藥，小心搖勻，靜置等待培養(yǎng)基冷卻凝固。

1.3.1.3菌餅的移植待上述含菌培養(yǎng)基冷凝后，把打孔器中的菌餅（銹腐菌、黑斑菌、疫病菌）移入不同處理的帶毒培養(yǎng)基中，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

1.3.1.4菌落直徑的測(cè)量及計(jì)算方法由于疫病病原菌生長(zhǎng)速度較快，所以疫病病原菌菌落初始直徑為0.2 cm，12 h測(cè)量1次菌落直徑。24 h測(cè)量1次銹腐病原菌、黑斑病原菌的菌餅直徑，連續(xù)測(cè)量4次。 每個(gè)菌落按十字交叉法測(cè)量3次，取其平均數(shù)代表菌落直徑。抑菌率計(jì)算公式如下：

抑制率=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/對(duì)照菌落直徑×100%。

1.3.2田間藥效試驗(yàn)

1.3.2.1試驗(yàn)地點(diǎn)及試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)在吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)藥用植物園進(jìn)行，試驗(yàn)地肥力中等，前茬作物為大豆，從移栽開始進(jìn)行試驗(yàn)。所有小區(qū)管理水平一致，藥后24 h無降雨，日平均氣溫在25 ℃左右。采取拉丁方隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，以更好地控制誤差。

1.3.2.2施藥與調(diào)查統(tǒng)計(jì)方法將藥劑稀釋成不同濃度，每7 d噴施1次農(nóng)藥，空白對(duì)照噴施等量清水。第3次噴藥前和最后1次噴藥后10 d分別調(diào)查并記錄每小區(qū)總株數(shù)、病株數(shù)。病株率、防治效果計(jì)算公式如下：

病株率=病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)×100%；

防治效果=（空白對(duì)照區(qū)病株率-處理區(qū)病株率）/空白對(duì)照區(qū)病株率×100%。

1.4數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2結(jié)果與分析

2.1農(nóng)藥的室內(nèi)抑菌篩選試驗(yàn)結(jié)果

農(nóng)藥的室內(nèi)抑菌篩選試驗(yàn)結(jié)果（表1）表明：化學(xué)源農(nóng)藥中，效果較好的是代森類藥，這與生產(chǎn)中所用農(nóng)藥相一致，因此本試驗(yàn)確定防治西洋參病害的主要農(nóng)藥為代森錳鋅。同時(shí)對(duì)生物源農(nóng)藥也進(jìn)行了篩選，其中春雷霉素、嘧菌酯、乙蒜素、多抗霉素、真菌凈、水合霉素、多黏芽孢桿菌、寧南霉素、中生菌素、井岡霉素、氨基寡糖素、熒光假單胞桿菌等13種農(nóng)藥均具有較好的室內(nèi)抑菌作用。筆者重點(diǎn)選用了嘧菌酯、多黏類芽孢桿菌、2%氨基寡糖素水劑、熒光假單胞桿菌進(jìn)行了田間防治試驗(yàn)。定期噴施各種農(nóng)藥，調(diào)查發(fā)病率，防治蟲害的主要農(nóng)藥是辛硫磷。

2.24種農(nóng)藥對(duì)西洋參疫病病原菌的室內(nèi)抑制效果

由圖1可知，4種農(nóng)藥中，嘧菌酯、2%氨基寡糖素水劑各稀釋度藥液對(duì)西洋參疫病菌菌落的生長(zhǎng)均具有一定的抑制作用，其中以高濃度300倍稀釋液抑菌效果較好，對(duì)西洋參疫病菌菌落生長(zhǎng)的抑制率最高。多黏類芽孢桿菌300～500倍稀

表1不同農(nóng)藥的室內(nèi)抑菌篩選試驗(yàn)

處理抑菌圈直徑（cm）銹病黑斑病2%春雷霉素100倍液0B25%嘧菌酯100倍液B+A+80%乙蒜素100倍液AA+3%多抗霉素100倍液0A5%丙·香水劑600倍液B-A-88%水合霉素100倍液0A-107個(gè)/g多黏類芽孢桿菌100倍液0B+2%寧南霉素100倍液003%中生菌素100倍液B-B+10%井岡霉素100倍液002%氨基寡糖素水劑250倍液A-A-3 000億個(gè)/g熒光假單胞桿菌250倍液A-A-80%代森錳鋅600倍液AA+注：“A+”代表抑菌圈直徑>6 cm，“A-” 代表6≥抑菌圈直徑>3 cm，“B+” 代表3≥抑菌圈直徑>2 cm，“B-” 代表2≥抑菌圈直徑>1.5 cm。

釋液具有抑菌效果。各稀釋度的熒光假單胞桿菌藥液對(duì)疫病菌菌落生長(zhǎng)均無抑制作用，這可能與熒光假單胞桿菌這類微生物農(nóng)藥的抑菌機(jī)理有關(guān)，由于熒光假單胞桿菌的生長(zhǎng)速度遠(yuǎn)不及疫病病原菌，所以田間防治疫病應(yīng)該早防早治，以防為主。

2.34種農(nóng)藥對(duì)西洋參黑斑病病原菌的室內(nèi)抑制效果

由圖2可知，4種農(nóng)藥中嘧菌酯、多黏類芽孢桿菌、熒光假單胞桿菌對(duì)西洋參黑斑病菌菌落的生長(zhǎng)均具有一定的抑制作用，其中嘧菌酯、多黏類芽孢桿菌以1 000倍液、1 500倍液抑菌效果較好，熒光假單胞桿菌以300倍液抑菌效果較好。嘧菌酯、多黏類芽孢桿菌、2%氨基寡糖素水劑、熒光假單胞桿菌對(duì)西洋參黑斑病菌菌落生長(zhǎng)的最高抑制率分別為6862%、55.52%、52.38%、55.52%。

2.44種農(nóng)藥對(duì)西洋參銹腐病原菌的室內(nèi)抑制效果

由圖3可知，多黏類芽孢桿菌、熒光假單胞桿菌500倍液對(duì)西洋參銹腐病病原菌的抑制效果較好，對(duì)西洋參銹腐病菌菌落生長(zhǎng)的抑制率最高分別為45.59%、31.21%。多黏類芽孢桿菌對(duì)西洋參銹腐病病原菌的抑制作用和嘧菌酯相當(dāng)，處于較高水平。2%氨基寡糖素水劑1 000倍液對(duì)西洋參銹腐病病原菌的抑制效果較好，抑制率為15.61%。

2.5不同生物農(nóng)藥對(duì)西洋參病害的田間防治效果

由表2可以看出，第2次施藥后20 d，2%氨基寡糖素水劑500倍液、熒光假單胞桿菌250倍液與多黏類芽孢桿菌500倍液的防效均值差異顯著。第2次施藥后20 d，2%氨基寡糖素水劑各濃度對(duì)西洋參病害的田間防效均高于嘧菌酯。2%氨基寡糖素水劑500倍液對(duì)西洋參病害的防效均值最高達(dá)86.97%，嘧菌酯500倍液防效均值最高達(dá)76.65%。熒光假單胞桿菌250倍液的防效均值在4種農(nóng)藥各濃度防效均值中均最大。熒光假單胞桿菌250倍液初始防效為95.17%，最終防效為76.03%。多黏類芽孢桿菌500倍液的田間防效均值與嘧菌酯2 000倍液相當(dāng)，多黏類芽孢桿菌1 500倍液、嘧菌酯500倍液和嘧菌酯1 000倍液的防效均值相當(dāng)。4種農(nóng)藥對(duì)西洋參病害防治效果由強(qiáng)到弱依次是：熒光假單胞桿

菌> 2%氨基寡糖素水劑> 嘧菌酯> 多黏類芽孢桿菌。其中熒光假單胞桿菌250倍液效果最好，其次是2%氨基寡糖素水劑500倍液。

3結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明，各濃度2%氨基寡糖素水劑、熒光假單胞桿菌對(duì)西洋參病害的田間防效比嘧菌酯稍好，多黏類芽孢桿菌500倍液、1 500倍液與各濃度嘧菌酯的防效均值接近，嘧菌酯各濃度的初始防效與其他3種生物農(nóng)藥的初始值較為接近，最終防效卻與3種生物農(nóng)藥產(chǎn)生了較大差異，這可能是因?yàn)?種生物農(nóng)藥對(duì)西洋參植株的防治效果較為持久，也有可能因?yàn)?種生物農(nóng)藥提高了西洋參植株對(duì)病害的抗性。

本研究的施藥頻率是依據(jù)常規(guī)化學(xué)農(nóng)藥來確定的，由于化學(xué)農(nóng)藥與生物農(nóng)藥防病機(jī)理不同，可以嘗試減少生物農(nóng)藥的施藥次數(shù)來防治病害，不僅可以降低農(nóng)藥成本，還可以降低勞動(dòng)強(qiáng)度。

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