● 胡小勤 周 蓓 王 強(qiáng) 吳燕春

血瘀證與NF-kB信號(hào)通路的相關(guān)性探討※

● 胡小勤*周 蓓 王 強(qiáng) 吳燕春

血瘀證見(jiàn)于多種疾病，是一種綜合性的病理狀態(tài)，形成機(jī)理非常復(fù)雜。研究證明，血瘀證形成與炎癥反應(yīng)、免疫失調(diào)關(guān)系密切。NF-κB通過(guò)調(diào)控眾多靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)而在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)等許多生理學(xué)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。血瘀證與NF-κB信號(hào)通路從理論和實(shí)驗(yàn)中的研究結(jié)果表明：NF-κB信號(hào)通路在血瘀證形成中扮演重要角色。血瘀證與NF-κB信號(hào)通路的相關(guān)性探討，將進(jìn)一步揭示血瘀證炎癥、免疫機(jī)制的分子生物學(xué)基礎(chǔ)，深化血瘀證形成機(jī)理的研究。

血瘀證 NF-κB信號(hào)通路 理論探討

證候本質(zhì)的研究一直是中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究的重要內(nèi)容。血瘀證見(jiàn)于多種疾病，是一種綜合性的病理狀態(tài)，形成機(jī)理非常復(fù)雜。研究證明，血瘀證形成與炎癥反應(yīng)、免疫失調(diào)關(guān)系密切[1]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，NF-κB(核因子-κB)信號(hào)通路在機(jī)體的免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)等方面發(fā)揮重要作用[2，3]。信號(hào)通路的研究對(duì)象是機(jī)體的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，是整體觀指導(dǎo)下的生物分子間相互作用及其傳遞規(guī)律，符合中醫(yī)學(xué)證候復(fù)雜性[4]的特點(diǎn)。血瘀證與NF-B信號(hào)通路雖然分屬中醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)兩個(gè)理論體系，但都與炎癥、免疫密切相關(guān)。

1 血瘀證與炎癥免疫

近年來(lái)，血瘀證一直是中醫(yī)學(xué)和中西醫(yī)結(jié)合研究中較為活躍的領(lǐng)域。血瘀證與炎癥反應(yīng)及免疫失調(diào)密切相關(guān)，相關(guān)研究已有大量文獻(xiàn)報(bào)道。

邵愛(ài)紅等[5]通過(guò)檢測(cè)血清樣本超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)與急性心肌梗死(AMI)患者血瘀證的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)AMI患者的血清hs-CRP表達(dá)較對(duì)照組顯著升高，且血瘀證組高于非血瘀證組；血瘀證與hs-CRP水平呈正相關(guān)(r=0.239，P<0.05)，認(rèn)為AMI患者具有一定程度炎性反應(yīng)而在血瘀證中表達(dá)更為明顯。

陳嬋等[6]探討了氣虛血瘀證與單核細(xì)胞(PBMC)的相關(guān)性及其可能的炎癥機(jī)制，通過(guò)復(fù)制心梗氣虛血瘀證動(dòng)物模型，采用半定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)模型組及假手術(shù)組動(dòng)物術(shù)后第7天、14天、28天外周血單核細(xì)胞TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同時(shí)間點(diǎn)模型組動(dòng)物單核細(xì)胞TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1的表達(dá)均高于假手術(shù)組動(dòng)物(P<0.05)。認(rèn)為氣虛血瘀證(心肌缺血)與單核細(xì)胞活化密切相關(guān)，可能成為該證候重要的微觀指標(biāo)。包怡敏等[7]通過(guò)皮下注射鹽酸腎上腺素復(fù)合冰水浴造成大鼠血瘀證模型。發(fā)現(xiàn)模型組血清細(xì)胞因子TNF-α濃度與正常對(duì)照組比較顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。江泳等[8]將受試者分為陰虛熱盛證、濕熱困脾證、氣陰兩虛證、陰陽(yáng)兩虛證4組，每組之中再分成兼血瘀證和無(wú)血瘀證兩個(gè)亞組，檢測(cè)血漿可溶性細(xì)胞間黏附分子-1(sICAM-1)等細(xì)胞因子含量。結(jié)果兼血瘀證組sICAM-1濃度顯著大于無(wú)血瘀證組(P<0.05)。認(rèn)為血瘀證貫穿于糖尿病始終，且與血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙具有相關(guān)性。

以上研究表明血瘀證與CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1、sICAM-1等炎性因子存在密切相關(guān)性。

血瘀證與免疫功能失調(diào)關(guān)系密切。劉雅等[9]發(fā)現(xiàn)氣虛血瘀證大鼠外周血T細(xì)胞亞型計(jì)數(shù)以CD8+T的減少更為顯著，3H-TdR摻入量顯著降低，腎上腺皮質(zhì)功能先亢進(jìn)而后又轉(zhuǎn)入了抑制狀態(tài)。認(rèn)為氣虛血瘀證動(dòng)態(tài)演變過(guò)程中始終存在以T細(xì)胞數(shù)量、T細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力以及HPA軸免疫調(diào)節(jié)功能異常為主的免疫功能失衡。張博生等[10]對(duì)缺血性中風(fēng)血瘀證患者的紅細(xì)胞免疫功能進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，患者RBC-C3bRR明顯低于正常，而RBC-ICR則明顯高于正常，均有非常顯著意義。認(rèn)為缺血性中風(fēng)血瘀證的發(fā)病與紅細(xì)胞免疫功能減退有密切關(guān)系。

以上研究表明：血瘀證與外周血T細(xì)胞數(shù)量、T細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、HPA軸免疫調(diào)節(jié)功能異常及紅細(xì)胞免疫功能減退等相關(guān)。

馬曉娟等[11]利用表達(dá)譜芯片技術(shù)，按照單通道芯片差異基因的篩選原則，分別篩選與冠心病血瘀證和非冠心病血瘀證相關(guān)的差異基因，兩者共同的部分認(rèn)為是血瘀證相關(guān)的差異基因。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與炎癥免疫相關(guān)的基因有5個(gè)，5條通路涉及炎癥免疫反應(yīng)。認(rèn)為炎癥和免疫反應(yīng)在一定程度上介導(dǎo)了血瘀證的發(fā)生發(fā)展。

2 NF-κB信號(hào)通路與炎癥免疫

NF-κB是一類(lèi)能特異性地識(shí)別結(jié)合DNA的Rel類(lèi)蛋白質(zhì)二聚體轉(zhuǎn)錄因子。NF-κB家族有5個(gè)成員，最常見(jiàn)的形式是由p65和p50組成的異源二聚體。在靜息細(xì)胞中，NF-κB與抑制性蛋白IκBs結(jié)合形成復(fù)合物，并被滯留于細(xì)胞質(zhì)中而處于非活化狀態(tài)；當(dāng)細(xì)胞受到各種胞內(nèi)外刺激時(shí)，IκBs被迅速地降解，NF-κB得以釋放并進(jìn)入細(xì)胞核，從而發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能。NF-κB通過(guò)調(diào)控眾多靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)而在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)等許多生理學(xué)過(guò)程中發(fā)揮重要作用[12]。

3 血瘀證與NF-κB信號(hào)通路

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是當(dāng)前生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)[13]。目前，已有學(xué)者開(kāi)始通過(guò)分析證候與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之間的相關(guān)性來(lái)研究證候?qū)嵸|(zhì)。如李煒弘等[14]利用第一代功能分類(lèi)基因芯片技術(shù)分析了老齡腎陽(yáng)虛證與Wnt/β-catenin信號(hào)通路的相關(guān)性。

關(guān)于血瘀證與NF-κB信號(hào)通路的相關(guān)性，尚未見(jiàn)詳細(xì)報(bào)道。目前有少量文獻(xiàn)報(bào)道了血瘀證與NF-κB蛋白表達(dá)之間的關(guān)系。如黃政德等[15]發(fā)現(xiàn)血瘀證心肌缺血再灌注損傷(IRI)兔心肌細(xì)胞NF-κB蛋白表達(dá)顯著增高。本課題組在以往的研究中發(fā)現(xiàn)，血瘀證大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子ICAM-1、VCAM-1及炎癥酶iNOS表達(dá)增高[16]，而這些炎癥細(xì)胞因子和炎癥酶的基因均為NF-κB的靶基因[17]。

血瘀證與NF-κB信號(hào)通路從理論和實(shí)驗(yàn)中的研究結(jié)果表明：NF-κB信號(hào)通路在血瘀證形成中扮演重要角色。血瘀證與NF-κB信號(hào)通路的相關(guān)性探討，將進(jìn)一步揭示血瘀證炎癥、免疫機(jī)制的分子生物學(xué)基礎(chǔ)，深化血瘀證形成機(jī)理的研究，也為尋找新型活血化瘀藥物作用靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)，將為中醫(yī)學(xué)證候?qū)嵸|(zhì)研究提供方法學(xué)上的借鑒，具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。

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廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科技專(zhuān)項(xiàng)課題(GZKZ10-039)；廣西中醫(yī)藥大學(xué)重點(diǎn)課題(ZD2010005)

胡小勤，男，醫(yī)學(xué)博士，教授。主要從事血瘀證臨床和基礎(chǔ)研究。

廣西中醫(yī)藥大學(xué)(530001)