張　晉,張粉平

(1.甘肅省家畜繁育中心,甘肅 武威 733000；2.咸陽(yáng)巿渭城區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 )

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羊的胚胎移植技術(shù)要點(diǎn)

張晉1,張粉平2

(1.甘肅省家畜繁育中心,甘肅 武威 733000；2.咸陽(yáng)巿渭城區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 )

本文從胚胎移植的供體羊、受體羊的選擇，移植時(shí)間、手術(shù)方法，沖胚移植過(guò)程及產(chǎn)前產(chǎn)后的護(hù)理等方面進(jìn)行了詳細(xì)的闡述，得出在羊的胚胎移植中應(yīng)當(dāng)注意的各個(gè)事項(xiàng)，可大大提高胚胎移植羊的受胎率，及供受體羊的利用率。

胚胎移植；供體羊；受體羊

胚胎移植技術(shù)是改良家畜品種的一項(xiàng)高新技術(shù)，對(duì)于提高家畜品種質(zhì)量和促進(jìn)高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、高效畜牧業(yè)生產(chǎn)有著重要的意義。羊的胚胎移植技術(shù)是對(duì)生產(chǎn)性能優(yōu)良和遺傳性穩(wěn)定的母羊經(jīng)過(guò)超數(shù)排卵處理后，將多出自然排卵數(shù)幾倍的受精卵取出，分別移植到受體母羊輸卵管或子宮內(nèi)，使之產(chǎn)出優(yōu)良后代的技術(shù)。但是由于在移植中有些工作準(zhǔn)備不充足和操作過(guò)程中的不慎，會(huì)導(dǎo)致供體羊手術(shù)沖卵后利用率低和出現(xiàn)受胎難的現(xiàn)象。本人根據(jù)多年的實(shí)際應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，淺談一下提高供體受體母羊手術(shù)后受胎率的幾點(diǎn)措施，供同行商榷。

1　供體母羊和種公羊的選擇

1.1年齡及營(yíng)養(yǎng)狀況

選擇合適的供體和受體母羊是胚胎移植成功的基礎(chǔ)，供體母羊的年齡選擇應(yīng)在1.5～4.0歲左右，生育過(guò)1胎以上為佳，膘情較好，飼養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定，具備良好的繁殖能力，即沒(méi)有遺傳缺陷和其他的生殖疾病，性周期正常，發(fā)情癥狀明顯；供體羊應(yīng)營(yíng)養(yǎng)良好，健康無(wú)病。在喂乳期間必須斷奶30 d后，補(bǔ)足營(yíng)養(yǎng)，恢復(fù)膘情方可選用。如果選用育成羊，須選體成熟、健康無(wú)生殖疾病、有兩次發(fā)情史以上且性周期正常的育成羊。

1.2種公羊的選擇

種公羊要求符合本品種特征，精液質(zhì)量好，遺傳性穩(wěn)定，切忌為了單純追求質(zhì)量和利潤(rùn)無(wú)論種羊好壞都進(jìn)行胚胎移植，生產(chǎn)不出合格種羊，影響種群質(zhì)量。

2　供體母羊的發(fā)情鑒定及人工授精

供體母羊在超排前必須觀察1～2個(gè)完整的發(fā)情周期，以母羊發(fā)情之日作為發(fā)情周期的0 d，在母羊發(fā)情周期的第13.0 d或13.5 d開始，每天早晚各注射一次FSH,連續(xù)3 d，遞減注射。確定超排羊發(fā)情后立即注射LH。如果FSH-P未注射完供體羊發(fā)情，停止注射。以供體母羊站立接受試情公羊爬跨為發(fā)情標(biāo)準(zhǔn)。

人工授精以鮮精為主，精液活力在70%以上，每次輸精量有效精子數(shù)不少于30×106，輸精次數(shù)不少于3次。確認(rèn)發(fā)情之后立即進(jìn)行一次輸精，之后間隔12 h輸精1次。

3　供體母羊的沖卵及胚胎質(zhì)量鑒定

3.1手術(shù)沖卵

羊的手術(shù)沖卵可根據(jù)需要選擇輸卵管沖卵和子宮沖卵法。手術(shù)部位選擇在離乳房前端約2 cm處，腹中線的兩側(cè)均可。手術(shù)前必須空腹24 h，只能飲水。手術(shù)時(shí)避開血管，手術(shù)部位縱向切開6～8 cm的切口，分離皮下組織，暴露肌膜。在骨盆腔，膀胱周圍觸摸子宮，將卵巢子宮引出切口外。

沖胚完成后用一定濃度的肝素溶液噴洗內(nèi)臟，洗掉凝血塊，用28℃的生理鹽水將內(nèi)臟沖洗干凈并注入液體石蠟5～10 mL以防黏連。創(chuàng)口采用三層縫合法，在肌肉與皮膚間撒適量的青、鏈霉素粉，以防創(chuàng)口感染。

3.2胚胎質(zhì)量鑒定

處于發(fā)育期2細(xì)胞的胚胎，卵裂球輪廓清楚，球體飽滿，透明度適中，數(shù)目吻合即可鑒定為1級(jí)，1/3卵裂球死亡可鑒定為2級(jí)，1/2卵裂球死亡可鑒定為3級(jí)，其余定位4級(jí)。1、2、3級(jí)胚胎均可進(jìn)行移植。

4　受體體母羊的選擇

受體母羊應(yīng)選擇繁殖性能正常，體況良好健康膘情在七成以上，發(fā)情周期正常，無(wú)傳染性疾病，符合品種特點(diǎn)，母性較好，奶量充足，以成年母羊年齡在2～6歲為好。

5　移植時(shí)間的選擇

種羊的胚胎移植工作，通常安排在種羊發(fā)情季節(jié)里。一般秋季的9月至11月底，早春的2月至4月這段時(shí)間種羊發(fā)情旺盛，內(nèi)分泌機(jī)能最活躍。選擇這一時(shí)期有利于超排工作的進(jìn)行，而且傷口愈合后能及時(shí)發(fā)情配種，配種時(shí)盡量用人工輸精方法，不失時(shí)機(jī)地檢查出供體羊出現(xiàn)的系列問(wèn)題，如污染造成的子宮內(nèi)膜炎和陰道炎、異常發(fā)情及持久黃體等。及時(shí)采取治療措施，提高受胎率。供體羊在超排前需觀察1～2個(gè)完整的發(fā)情周期。

6　手術(shù)方法和利用次數(shù)

采用配種后66～72 h輸卵管沖胚法。供體羊利用最好不超過(guò)兩次，而且用過(guò)一次，生育一胎后再利用第二次，能說(shuō)明供體羊沖胚后沒(méi)留下生殖上的疾患和其他后遺癥，保證下一次和受體羊配套。避免經(jīng)濟(jì)損失。采用腹腔鏡子宮內(nèi)沖胚法(7 d)最好不過(guò)3次，如果子宮不污染，傷口恢復(fù)快，發(fā)情周期正?？蛇B續(xù)沖胚1次。

7　受體羊的移植

受體羊創(chuàng)口縫合時(shí)嚴(yán)格按照外科手術(shù)規(guī)則進(jìn)行自身消毒，不得接觸其他無(wú)關(guān)物品，整個(gè)操作過(guò)程要迅速、準(zhǔn)確、仔細(xì)，避免生殖器官暴露過(guò)久，切忌頻繁、重度觸摸和拉扯生殖器官。 胚胎移植后要檢查移植器中是否有胚胎遺漏，確認(rèn)沒(méi)有遺漏后受體才能縫合。 吸取胚胎時(shí)用移植器先吸一段約1.0 cm長(zhǎng)的保存液，再吸一段約0.5 cm的空氣，然后吸取胚胎，含胚胎的液柱不超過(guò)1.5 cm。

8　沖胚過(guò)程中注意的環(huán)節(jié)

手術(shù)沖胚時(shí)，要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，手術(shù)處周圍羊毛要刮凈，嚴(yán)格消毒。術(shù)者要做好自身消毒，防止將病原微生物帶入供受體羊器官內(nèi)造成感染。供體羊超排后發(fā)情配種時(shí)間隔10～12 h用鮮精配種1次，3次即可，防止次數(shù)過(guò)多造成生殖道感染，影響下次的利用和再配種的受胎率。沖胚時(shí)，手術(shù)動(dòng)作要輕、要細(xì)致，防止輸卵管、輸卵管傘及其他部位出血，造成粘連和堵塞，使母羊喪失生育能力。沖胚完畢后，用20 mL生理鹽水稀釋80萬(wàn)IU的青霉素和100萬(wàn)IU的鏈霉素注入子宮內(nèi)，以防配種和手術(shù)時(shí)對(duì)子宮的污染，提高下次供體羊的利用率和受胎率。

9　沖胚后配種處理

供體羊沖胚后，從發(fā)情時(shí)算起10 d左右，肌注氯前列烯醇0.8～1.0 mL，以溶解卵巢上的多個(gè)黃體，以利于發(fā)情和避免形成持久黃體。供體羊沖胚后，由于體內(nèi)的外源激素仍然持續(xù)一定水平，第一次發(fā)情后，盡量不要配種，會(huì)有部分羊發(fā)情周期紊亂，排卵不正常，不易受胎。有的羊即使配種受胎率也較低。故第二情期配種較適宜，配種的同時(shí)肌注LRH-A3受胎率較高。供體羊發(fā)情時(shí)，發(fā)現(xiàn)分泌物混濁和子宮炎癥、陰道炎的，及時(shí)沖洗、消炎處理后再配種。對(duì)沖胚后較長(zhǎng)時(shí)間不發(fā)情的羊只可采用CIRD放入陰道，置13 d肌注氯前列烯醇0.8 mL后10 h取出，發(fā)情即可配種。對(duì)春季末沖胚的母羊，由于天氣越來(lái)越熱，長(zhǎng)時(shí)間不發(fā)情的要根據(jù)情況盡量不催情配種。因?yàn)榉醇竟?jié)催情，氣溫高更易造成母羊生殖道感染，受胎率也較低，故可使其休情，在早秋抓住時(shí)機(jī)配種，能大大提高利用率和受胎率。

[1]桑潤(rùn)滋.牛、羊胚胎移植在中國(guó)的發(fā)展[J].黑龍江動(dòng)物繁殖.2003，11(2)：17-20.

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[3]蔡正華，張堅(jiān)忠.用超數(shù)排卵測(cè)定羊冷凍精液受胎率方法[J]，中國(guó)畜牧雜志，1980，4(15)：19-20.

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Technique of Embryo Transfer in Sheep

ZHANG Jin1, ZHANG Fen-ping2

(1.LivestockBreedingCenterofGansuProvince,WuweiGansu733000China;2.AnimalHealthSupervisionInstituteofWeichengdistractinXianyangCity)

This paper clearly illustrated some main points, such as the selection for donor sheep and receptor sheep during embryo transplantation, the transplantation method, surgical methods, the process of rushing embryo transplantation, prenatal and postnatal care etc. It was concluded that every matter should be paid attention to in the sheep embryo transplantation, which could greatly improve the pregnancy rate and the utilization of the donor and receptor sheep.

Embryo transplantation; donor sheep; receptor sheep

1004-6704(2016)04-0124-02

2016-05-12

張晉(1983-),女,甘肅武威人,本科，畜牧師，主要從事冷凍精液生產(chǎn)和凍精質(zhì)量技術(shù)檢測(cè)工作。

S 814.6

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