高效液相色譜法測(cè)定參芪降糖顆粒中五味子甲素、五味子乙素含量

王建花

·實(shí)驗(yàn)研究·

高效液相色譜法測(cè)定參芪降糖顆粒中五味子甲素、五味子乙素含量

王建花

目的為控制五味子質(zhì)量,探討高效液相色譜測(cè)定參芪降糖顆粒中五味子甲素、五味子乙素含量的方法。方法色譜柱為Agilent Eclipse Plus-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流動(dòng)相為乙腈-水(56:44),流速1ml/min,檢測(cè)波長250nm,柱溫30℃。結(jié)果五味子甲素、五味子乙素線性范圍分別為5.045～100.8μg/ml (r=0.9999)、5.47～109.4μg/ml (r=0.9999),五味子甲素、五味子乙素平均回收率分別為99.13%、98.66%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為0.9%、1.3%。結(jié)論高效液相色譜專屬性、重復(fù)性好,可用于參芪降糖顆粒的質(zhì)量控制。

參芪降糖顆粒；五味子甲素；五味子乙素；高效液相色譜

參芪降糖顆粒(魯南厚普制藥有限公司)由人參(莖葉)皂苷、五味子、黃芪、山藥、覆盆子、麥冬、茯苓、天花粉、澤瀉、枸杞子組成［1］,具有益氣養(yǎng)陰、滋脾補(bǔ)腎的作用,主治消渴癥,用于2型糖尿?。?-6］。五味子為方中臣藥,五味子甲素、五味子乙素是參芪降糖顆粒的主要有效成分,目前該制劑現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未進(jìn)行質(zhì)量控制,故本文采用高效液相色譜法［7-10］測(cè)定參芪降糖顆粒中五味子甲素［11-15］、五味子乙素含量,為該制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供一定的參考?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260型高效液相色譜儀(美國),Sartorius CPA225D 分析天平(0.1mg)(瑞士賽多利斯公司)。

1.2 試藥 參芪降糖顆粒(批號(hào)：00116003、00116004、00116005),五味子甲素(批號(hào)：110764-200408)、五味子乙素(批號(hào)：110765-2007107)均來自中國食品藥品檢定研究院,需五氧化二磷干燥12h以上。乙腈為色譜純［16］,水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取五味子甲素、五味子乙素適量,加甲醇分別制成每1毫升中0.2018、0.2188mg的溶液,作為對(duì)照品貯備液Ⅰ、Ⅱ。精密量取貯備液各5ml置20ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,即得。

2.2 供試品溶液的制備 精密稱取參芪降糖顆粒3g置錐形瓶中,精密加入甲醇10ml,稱重,超聲處理30min,用甲醇補(bǔ)足減失重量,搖勻,用以0.22μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液即得。

2.3 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性 色譜柱Agilent Eclipse Plus-C18(250mm×4.6mm,5μm),柱溫30℃,流動(dòng)相：乙腈-水(56:44),流速1.0ml/min,檢測(cè)波長250nm。參考《中國藥典》2015年版一部五味子【含量測(cè)定】項(xiàng)下,選擇檢測(cè)波長250nm。取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl,供試品中五味子甲素、五味子乙素主峰與其他組分分離良好,無明顯干擾。見圖1,圖2。

圖1 對(duì)照品

圖2 樣品

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別精密吸取對(duì)照貯備溶液適量,加甲醇配成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,濃度依次為五味子甲素：5.045、25.22、50.45、75.68、100.8μg/ml,五味子乙素：5.470、27.35、54.70、82.05、109.4μg/ml,分別進(jìn)樣10μl,以對(duì)照品濃度(X)為橫坐標(biāo),峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果表明五味子甲素在5.045～100.8μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,其回歸方程為Y=20.457X-1.255(r=0.9999)；五味子乙素在濃度為5.47～109.4μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,其回歸方程為Y=16.905X-2.7495(r=0.9999)。

2.5 精密度考察 精密吸取同一混合對(duì)照品溶液(50μg/ml) 10μl,依法測(cè)定。結(jié)果五味子甲素、五味子乙素峰面積的RSD分別為0.7%、0.9%(n=6)。試驗(yàn)表明,本法精密度良好。

2.6 重復(fù)性考察 平行制備6份供試品溶液(批號(hào)：150601),分別進(jìn)樣10μl,按“2.3”項(xiàng)下色譜條件依法測(cè)定,記錄主峰峰面積,結(jié)果平均每克中五味子甲素、五味子乙素平均含量分別為0.1567、0.2472mg,RSD分別為1.5%、1.0%(n=6)。試驗(yàn)表明,本法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性考察 按“2.2”供試品溶液的制備項(xiàng)下配置供試品溶液一份(批號(hào)：150601),分別于0、2、4、8、12、24h時(shí)進(jìn)行測(cè)定,考察主峰峰面積,結(jié)果五味子甲素、五味子乙素峰面積的RSD分別為0.8%、0.9%(n=6)。表明供試品溶液在制備后24h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.8 準(zhǔn)確度考察 精密吸取6份已知濃度的參芪降糖顆粒1.5g,置錐形瓶中,精密加對(duì)照品儲(chǔ)備溶液Ⅰ1.2ml,對(duì)照品貯備液Ⅱ 1.8ml分別加入6份供試品中,分別精密加甲醇7ml,搖勻,稱重,超聲30min,放冷,用甲醇補(bǔ)足減失重量。以0.22μm微孔濾膜濾過,按“2.4”項(xiàng)下色譜條件依法測(cè)定,記錄峰面積,計(jì)算加樣回收率。結(jié)果表明,本法準(zhǔn)確度較好。見表1。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果

2.8樣品含量測(cè)定 取三批次供試品(批號(hào)：151109①、151109②、151109③),按“2.2”項(xiàng)制備,按“2.3”項(xiàng)下色譜條件依法測(cè)定,計(jì)算含量。結(jié)果五味子甲素含量分別為0.1571、0.1549、0.1566mg/g；五味子乙素含量分別為0.2472、0.2459、0.2461mg/g。

3 小結(jié)

參芪降糖顆粒原標(biāo)準(zhǔn)中未考察人參、黃芪一些成分進(jìn)行了質(zhì)量控制,本實(shí)驗(yàn)增加了對(duì)五味子甲素、五味子乙素進(jìn)行含量測(cè)定。高效液相色譜法準(zhǔn)確度高、精密度好、穩(wěn)定性佳、簡單易行,可考慮補(bǔ)充到該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。

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Determination of schizandrin A and schizandrin B contents in Shenqi Jiangtang granule by high performance liquid chromatography

WANG Jian-hua.Nanjing City Food and Drug Inspection Institute,Nanjing 210000,China

ObjectiveTo investigate determination method of schizandrin A and schizandrin B contents in Shenqi Jiangtang granule by high performance liquid chromatography,in order to control schisandra chinensis quality.MethodsAgilent Eclipse Plus-C18column (250mm×4.6mm,5μm) was applied,with acetonitrilewater (56:44) as mobile phase by 1ml/min as flow velocity,determine wavelength as 250nm and column temperature as 30℃.ResultsLinearity range of schizandrin A and schizandrin B were respectively 5.045～100.8μg/ml (r=0.9999) and 5.47～109.4μg/ml (r=0.9999).Schizandrin A and schizandrin B had average recovery rate respectively as 99.13% and 98.66%,with ralative standard deviation (RSD) as 0.9% and 1.3%.ConclusionHigh performance liquid chromatography shows good specificity and repeatability,and it is feasible to control Shenqi Jiangtang granule quality.

Shenqi Jiangtang granule; Schizandrin A; Schizandrin B; High performance liquid chromatography

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.18.196

2016-08-17］

210000南京市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)院