于 丹 遼寧省撫順市動物疫病預(yù)防控制中心 113006

獸醫(yī)實驗室ELISA檢測中應(yīng)注意的問題

于 丹 遼寧省撫順市動物疫病預(yù)防控制中心 113006

本文主要從ELISA檢測的概述入手，對ELISA檢測中需要注意的問題，從血樣采取與處理、回溫、加樣、孵育、洗滌、顯色和保護(hù)等方面進(jìn)行了分析。

ELISA檢測；獸醫(yī)實驗室；問題

在獸醫(yī)實驗室中，ELISA檢測工作的核心問題就在于操作的精準(zhǔn)性，所以必須在血樣采取與處理、回溫、加樣、孵育、洗滌、顯色和保護(hù)工作中對其檢測的質(zhì)量進(jìn)行控制，才能更好地促進(jìn)這一工作的重要性彰顯。

1 ELISA檢測的概述

ELISA檢測，也就是酶聯(lián)免疫吸附劑測定的簡稱。在獸醫(yī)實驗室中，ELISA檢測的內(nèi)容包括豬瘟抗體、藍(lán)耳病抗體和口蹄疫抗體檢測。但是在檢測過程中，為了確保檢測結(jié)果的精準(zhǔn)性，就必須注意操作方法的正確性。

2 需要注意的問題分析

（1）在血樣采取與處理過程中應(yīng)確保采樣輕柔，預(yù)防出現(xiàn)溶血的情況，這主要是由于紅細(xì)胞在溶解過程中所釋放的物質(zhì)中具有過氧化物酶活性的特點，進(jìn)而對檢測結(jié)果帶來影響。而且標(biāo)本存儲的時間較長就會導(dǎo)致LGG聚合為多聚體，進(jìn)而出現(xiàn)本底過深和假陽性的出現(xiàn)，所以需要及時對血清樣板進(jìn)行測定，并將其放在4℃的保溫箱中。若測定的時間超過3天，應(yīng)將其低溫冰存。

（2）在回溫過程中應(yīng)盡可能地采取低溫，一般回溫溫度只要確保洗滌液的結(jié)晶在充分搖動的情況下可以完全溶解即可。

（3）在加樣過程中，由于其涉及的環(huán)節(jié)較多，所以在采用微量加樣器時，應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)定的加入量，將其加入到板孔之中，而且在加樣過程中應(yīng)確保加入的樣品處于板孔的底部。這樣就能有效預(yù)防在孔壁上存在的樣品，預(yù)防樣品濺出的同時還要避免其出現(xiàn)氣泡。而在加入不同的物質(zhì)時應(yīng)更換吸嘴，有效地預(yù)防和避免出現(xiàn)交叉感染的情況。但是在顯色過程中，主要是采取多道微量加樣器，這樣才能提高加液的速度，從而更好地統(tǒng)一加樣和顯色的時間，盡可能地將檢測的誤差降到最低。

（4）在孵育過程中，由于其在ELISA檢測中需要一定的時間，所以其在這一過程中始終處于恒溫狀態(tài)，具體的做法就是在恒溫箱中放置ELISA板。同時還要利用封板條將反應(yīng)孔封住，嚴(yán)禁將反應(yīng)板疊放，這樣就能夠有效地預(yù)防其蒸發(fā)，同時又能夠確保每個反應(yīng)板的溫度快速平衡，盡可能地確保溫育溫度與溫育時間的精準(zhǔn)性。

（5）由于洗滌直接影響ELISA實驗的結(jié)果，因此要注重洗滌工作的開展，通過洗滌將ELISA分離游離，同時利用與ELISA結(jié)合的酶標(biāo)記物，將在板孔內(nèi)殘留的物質(zhì)清除，這樣在反應(yīng)時就能夠避免這些物質(zhì)帶來的干擾。首先是預(yù)防由于血液凝固導(dǎo)致假陽性的出現(xiàn)，因為血液若凝固不全，將存在吸附纖維的情況，這樣洗板不干凈，就會導(dǎo)致一些非固相的殘留酶的形成，最終導(dǎo)致非特異性的顯色效果受到影響。而且當(dāng)顯色很深時，容易將其錯誤地認(rèn)為屬于強(qiáng)陽性。其次是在洗液過程中，盡可能地在臨時使用之前配置新鮮的洗液，預(yù)防由于較長的放置時間而出現(xiàn)渾濁的絮狀物，否則就會出現(xiàn)花板和堵孔的情況。因而在洗板機(jī)使用過程中應(yīng)對其間隔的時間和洗板液的使用量進(jìn)行嚴(yán)格控制。最后是在拍板過程中，還應(yīng)將殘余水分拍掉，但是應(yīng)輕拍輕打，盡可能地減少拍打次數(shù)。

（6）在顯色之后，應(yīng)在規(guī)定的時間內(nèi)利用酶標(biāo)儀及時讀取比色的情況，并對結(jié)果進(jìn)行精確判斷，這樣才能確保顯色的質(zhì)量。

（7）在保護(hù)過程中，由于TMB和OPD具有較強(qiáng)的致癌性，因而在這一檢測工作中，在操作時還應(yīng)注意影響檢測人員安全的因素，所以必須在檢測過程中規(guī)范每項檢測的標(biāo)準(zhǔn)和流程，強(qiáng)化檢測人員的管理，確保整個過程的安全。

3 結(jié)語

綜上所述，在獸醫(yī)實驗室ELISA檢測工作中，需要注意的問題較多，尤其是在血樣采取與處理、回溫、加樣、孵育、洗滌、顯色和保護(hù)等7個方面，確保檢測的精準(zhǔn)性和實驗結(jié)果的科學(xué)性。

[1]曲百友,王劍.獸醫(yī)實驗室ELISA檢測中應(yīng)注意的問題[J].山東畜牧獸醫(yī),2014,05:66.

[2]楊明彩.基層獸醫(yī)實驗室采樣檢測中應(yīng)注意的問題[J].中國畜禽種業(yè),2009,09:12-13.

[3]譚愛華.ELISA法檢測中應(yīng)注意的問題 [J].實用醫(yī)技雜志, 2008,19:2496-2497.