張鳳華，仲偉平，阮武營，李國枝，刁睿鑫

（開封市動物疫病預(yù)防控制中心，河南 開封　475000）

臨床病例

一例高致病性藍耳病的診斷及其綜合防控建議

張鳳華，仲偉平，阮武營，李國枝，刁睿鑫

（開封市動物疫病預(yù)防控制中心，河南 開封475000）

2016年4月，開封市北郊一豬場于半月前從外省購入380多頭土豬，購入半月以來陸續(xù)有230多頭豬發(fā)病，其中113頭死亡，通過臨床癥狀、病理變化和實驗室診斷，最終確診為高致病性藍耳病。

1　流行病學調(diào)查

該養(yǎng)殖場半月前從外省豬販手中購入380頭土豬，1～2月齡，體質(zhì)量10～20 kg不等，免疫情況和原場既往病史均不詳細。購入4 d內(nèi)陸續(xù)發(fā)現(xiàn)19頭豬發(fā)病，其臨床癥狀為食欲減退，扎堆明顯，測量體溫升高到40℃。于是將豬群轉(zhuǎn)移至另一場點，可能由于路途運輸應(yīng)激，發(fā)病豬明顯增多，在購入后的16 d內(nèi)共有230頭豬發(fā)病，其中113頭死亡。

2　臨床癥狀

大多發(fā)病豬臨床癥狀為體溫升高，不食，呼吸困難，耳和腹部發(fā)紫，拉黑綠色水樣糞便，個別豬關(guān)節(jié)腫大，有神經(jīng)癥狀。

3　病理變化

對3頭瀕臨死亡豬進行解剖，病理變化主要為肺臟腫大、出血、有淀粉樣病變和壞死點、腎臟腫大、腸系膜淋巴結(jié)腫大、出血。

4　診療情況

對發(fā)燒豬用青霉素、鏈霉素、氨基比林、地塞米松肌肉注射、連用3 d后治療效果明顯，但幾天后又反復發(fā)作。

對拉稀豬用慶大霉素和氯霉素治療，效果明顯。

5　實驗室診斷

5.1免疫學檢測

根據(jù)臨床癥狀，對15頭病豬進行采血，分別對其進行豬瘟抗體、藍耳病抗體和偽狂犬抗體檢測，以對其抗體水平進行了解。

5.1.1豬瘟抗體檢測

取所需用量酶標板條，設(shè)陰性/陽性對照各2孔，分別加入陰、陽性對照100 μl，樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100 μl，混勻，置37℃反應(yīng)15分鐘；扣去孔內(nèi)液體，每孔加250 μl洗滌液，重復洗滌5次，拍干；每孔加酶標記物100 μl，置37℃反應(yīng)15 min；扣去孔內(nèi)液體，每孔加250 μl洗滌液，重復洗滌5次，拍干；每孔依次加顯色液100 μl，混勻，37℃避光反應(yīng)15 min；每孔加終止液50 μl，混勻，于450 nm測定各孔吸光值（OD值）。判定標準：樣品OD值≥0.8為陽性；樣品OD值＜0.6為陰性，0.6≤樣品OD值＜0.8為可疑。

5.1.2藍耳抗體檢測

將血清樣品200倍稀釋，取陽性和陰性對照、稀釋好的待檢血清50 μl加入到反應(yīng)板中，37℃反應(yīng)60 min，取出，用洗滌液洗滌3遍，每孔加入50 μl酶標抗體，37℃反應(yīng)60 min，洗滌3遍，每孔加入50 μl底物，20～25℃作用10 min，每孔加入50 μl終止液。在450 nm下讀數(shù)并記錄結(jié)果，結(jié)果用IRPC表示，用公式IRPC=（OD450樣品-OD450陰性對照平均值）/（OD450陽性對照平均值-OD450陰性對照平均值）×100計算。判斷標準：IRPC值＞20表示藍耳抗體陽性，IRPC值≤20表示藍耳抗體陰性。

5.1.3偽狂犬抗體檢測

取出PRV，抗原包被板，分別加100 μl 2倍稀釋的陰性對照血清和陽性對照血清各2孔，將100 μl稀釋好的樣品加至相應(yīng)的孔；室溫（18～26℃）孵育1 h；每孔用大約300 μl洗液洗滌微孔3～5次；每孔加入100μl酶標抗體；室溫（18～26℃）孵育20 min；重復洗滌3～5次；每孔加100 μl TMB底物溶液，室溫（18～26℃）孵育15 min；每孔加入50 μl終止液終止反應(yīng)，在650 nm下測量和記錄樣品和所有對照的吸光值。計算結(jié)果：陰性對照平均值NC=（NC1 A（650）+ NC2 A（650））/2；陽性對照平均值PC=（PC1 A（650）+ PC2A（650））/2；樣品/陰性對照比率S/N=樣本A（650）/ NC。結(jié)果判定：若S/N值≤0.60，樣品為PRV抗體陽性；若0.6＜S/N值≤0.70，該樣品必須重測；若S/N值＞0.70，則為PRV抗體陰性。

通過對15頭病豬進行豬瘟、藍耳和偽狂犬抗體檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分病豬的藍耳病抗體存在異常情況（根據(jù)以往檢測經(jīng)驗，藍耳病正常免疫抗體IRPC值一般不會超過150）。

5.2病原學檢測

將3頭病豬進行解剖后分別采樣，通過熒光RT-PCR方法分別對豬瘟病毒和高致病性藍耳病病毒進行檢測，檢測結(jié)果為：3份樣品豬瘟病毒檢測結(jié)果全部為陰性，高致病性藍耳病病毒檢測結(jié)果全部為陽性。

根據(jù)流行病學調(diào)查、病理變化及實驗室診斷，最終確診為高致病性藍耳病。

6　綜合防控建議

預(yù)防高致病性豬藍耳病必須從科學養(yǎng)殖入手，采用合理的免疫程序，改善飼養(yǎng)環(huán)境，加強綜合管理，主要應(yīng)做好如下工作：

科學免疫。免疫是預(yù)防各種疫病的有效手段，特別是目前需要免疫的疫苗種類很多，一定要按照當?shù)孬F醫(yī)部門的建議或者本場情況，制定合理的免疫程序，適時做好高致病性豬藍耳病的免疫。一般情況下，商品豬在23～25日齡時，免疫1次高致病性藍耳病疫苗。種母豬除在23～25日齡免疫外，配種前應(yīng)加強免疫1次。種公豬除在23～25日齡免疫外，每隔6個月還應(yīng)免疫1次。發(fā)病地區(qū)，建議在首次免疫后或緊急免疫后21～28 d進行1次加強免疫。在免疫過程中，要使用農(nóng)業(yè)部批準生產(chǎn)或使用的疫苗，還要注意規(guī)范免疫操作。

加強飼養(yǎng)管理。在高熱季節(jié)，做好豬舍的通風和防暑降溫，提供充足的清潔飲水。保持豬舍干燥，保持合理的飼養(yǎng)密度，降低應(yīng)激因素。冬天既要注意豬舍的保暖，又要注意通風。保證充足的營養(yǎng)，增強豬群抗病能力，采用“全進全出”的養(yǎng)殖模式，杜絕混養(yǎng)，散養(yǎng)的豬要實行圈養(yǎng)。

嚴格消毒。搞好環(huán)境衛(wèi)生，及時清除豬舍糞便及排泄物，對各種污染物品進行無害化處理。定期對飼養(yǎng)場、豬舍內(nèi)及周邊環(huán)境進行消毒。

藥物預(yù)防繼發(fā)感染。在獸醫(yī)技術(shù)人員的指導下，選擇合適的抗菌類藥物、制定合理的用藥方案，預(yù)防豬群的細菌性繼發(fā)感染。

嚴格檢疫。要從沒有疫情的地方購進仔豬，同時，購買前要查看檢疫證明，購進后一定要隔離飼養(yǎng)14 d以上，無異常情況再混群飼養(yǎng)。

發(fā)現(xiàn)病豬要報告。發(fā)現(xiàn)病豬后，要立即對病豬進行隔離，并立即報告當?shù)匦竽莲F醫(yī)部門，在當?shù)孬F醫(yī)人員的指導下按有關(guān)規(guī)定處理。

嚴格處置病死豬。按照《動物防疫法》和國家有關(guān)規(guī)定，嚴格對病死豬采取“四不一處理”處置措施，即不準宰殺、不準食用、不準出售、不準轉(zhuǎn)運，對病死豬必須進行無害化處理。

做好其他疫病的預(yù)防工作。在認真做好高致病性豬藍耳病預(yù)防的同時，還必須做好其他豬病的預(yù)防工作，如豬瘟、偽狂犬、口蹄疫、豬鏈球菌病等。

S851文獻標識碼：B

1004-5090（2016）08-0031-02

2016-05-18）