王 琰

（新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第六師五家渠市畜牧獸醫(yī)工作站，新疆五家渠 831300）

布魯氏菌病抗體檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

王 琰

（新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第六師五家渠市畜牧獸醫(yī)工作站，新疆五家渠 831300）

隨著醫(yī)療設(shè)備以及醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展和進(jìn)步，布魯氏菌病抗體的研究也有了新的進(jìn)展和方向，通過(guò)使用膠體免疫層析技術(shù)，將大腸桿菌進(jìn)行轉(zhuǎn)化和重組，利用其產(chǎn)生的重組蛋白作為檢測(cè)布魯氏菌病抗體的原料，本文主要對(duì)該種方法進(jìn)行簡(jiǎn)單的敘述，希望能夠?qū)Σ剪斒暇】贵w檢測(cè)技術(shù)的研究和發(fā)展提供一些文本思考和幫助。

布魯氏菌病抗體；檢測(cè)技術(shù)；研究進(jìn)展

在對(duì)布魯氏菌病進(jìn)行檢測(cè)技術(shù)研究的過(guò)程中，主要采用了布病虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）、布病試管凝集試驗(yàn)（SAT）、競(jìng)爭(zhēng)ELISA試驗(yàn)（cELISA）技術(shù)，但是對(duì)于布魯氏菌病抗體的檢測(cè)速度和效果卻沒(méi)有達(dá)到理想中的結(jié)果，在此，本文主要針對(duì)布魯氏菌病抗體快速檢測(cè)新方法-膠體金技術(shù)進(jìn)行簡(jiǎn)單的分析和研究，希望能對(duì)布魯氏菌病抗體檢測(cè)技術(shù)的研究提供一些幫助。

1 傳統(tǒng)布魯氏菌病檢測(cè)技術(shù)分析

1.1 虎紅平板凝集試驗(yàn)

該種試驗(yàn)方式主要是快速凝集反應(yīng)，主要用于檢測(cè)動(dòng)物是否感染布魯氏菌病。當(dāng)前，在我國(guó)國(guó)內(nèi)只有中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院流行病學(xué)微生物研究所生產(chǎn)供應(yīng)布魯菌病虎紅平板試驗(yàn)抗原，材料包括陰性血清、陽(yáng)性血清以及陰陽(yáng)同一試管凝集反應(yīng)的陰陽(yáng)性血清。

被檢測(cè)血清和布魯菌病虎紅平板凝集抗原各取0.03ml滴于玻璃板的方格內(nèi)，每份血清都要進(jìn)行攪拌，攪拌過(guò)程盡可能手動(dòng)，攪拌工具可以使用火柴或者牙簽，攪拌完成后，室溫20℃保持4min內(nèi)即可進(jìn)行判定，對(duì)該過(guò)程中所產(chǎn)生的反應(yīng)進(jìn)行記錄，與此同時(shí)和陰性血清以及陽(yáng)性血清作為對(duì)照。

在血清的對(duì)照下，被檢測(cè)血清出現(xiàn)任何程度的凝集現(xiàn)象都判定其為陽(yáng)性，不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象即為陰性，沒(méi)有癥狀感染。

1.2 試管凝集試驗(yàn)

布魯氏菌病試管凝集試驗(yàn)抗原主要表現(xiàn)為乳白色的懸濁液，久置之后會(huì)出現(xiàn)沉淀，溶液會(huì)變得清亮透明。

在試驗(yàn)時(shí)，抗原要進(jìn)行稀釋?zhuān)♂尡壤秊?：20，被檢測(cè)的血清按照1：12.5、1：25、1：50、1：100、1：200來(lái)進(jìn)行稀釋?zhuān)瑫r(shí)還要設(shè)置基礎(chǔ)血清作為對(duì)照。將抗原和血清一起加入試管中，加入劑量為0.5ml，在37～40℃環(huán)境下維持24h，觀察其凝集結(jié)果。對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定，牛、馬、鹿、駱駝血清1：100“++”為陽(yáng)性，1：50“++”為可疑。豬、羊、犬1：50“++”為陽(yáng)性，1：25“++”為可疑。試驗(yàn)結(jié)果表現(xiàn)為可疑的動(dòng)物，應(yīng)該在21～28d時(shí)間后重新進(jìn)行試驗(yàn)，若其混合血清仍然為可疑，則判定其為陽(yáng)性。

1.3 cELISA試驗(yàn)

C-ELISA檢測(cè)試劑盒和新型布病C-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，用于免疫接種動(dòng)物和感染動(dòng)物的鑒別診斷及布魯氏菌病的確診診斷。布魯氏菌病競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)試劑盒是在間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果的基礎(chǔ)上，區(qū)別被檢動(dòng)物是真正患病還是注射疫苗免疫過(guò)的動(dòng)物。此方法敏感性高，特異性強(qiáng)。能夠區(qū)分陽(yáng)性動(dòng)物的真假性即免疫與患病動(dòng)物的區(qū)分。這樣保證了布魯氏菌ELISA試劑盒的特異性與敏感性。

布魯氏菌病快速I(mǎi)-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒技術(shù)指標(biāo)：對(duì)感染動(dòng)物（牛、豬、綿羊、山羊和鹿等等）抗體檢測(cè)特異性達(dá)99%，敏感性達(dá)97%，檢測(cè)所需時(shí)間為15分鐘，眼觀判定結(jié)果。

布魯氏菌病C-ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)指標(biāo)：對(duì)感染動(dòng)物（牛、豬、綿羊、山羊和鹿等等）血清抗體檢測(cè)特異性達(dá)98%，敏感性達(dá)97%（感染山羊的檢測(cè)敏感性達(dá)84%）。鑒別診斷疫苗免疫動(dòng)物的血清抗體檢測(cè)特異性達(dá)98%，敏感性達(dá)75%。

1.4 三種試驗(yàn)特點(diǎn)

以上三種試驗(yàn)在操作過(guò)程中，都會(huì)存在對(duì)試劑的配置和人為操作試劑，以及人為對(duì)試劑所表現(xiàn)出來(lái)的現(xiàn)象進(jìn)行分析，后續(xù)還要通過(guò)計(jì)算和觀察的形式來(lái)對(duì)比例或者數(shù)據(jù)進(jìn)行研究，這很有可能會(huì)給試驗(yàn)帶來(lái)很大的誤差。

2 布魯氏菌病抗體快速檢測(cè)新方法-膠體金技術(shù)

2.1 測(cè)定試劑

（1）測(cè)定試劑主要有氯金酸、檸檬酸三鈉、碳酸鉀、金黃色葡萄球菌蛋白A四種，該四種試劑在使用前一定要對(duì)其純度進(jìn)行檢測(cè)，試劑準(zhǔn)備完成之后，分別支撐布魯氏菌可溶性蛋白多糖復(fù)合物抗原，金黃色葡萄球菌蛋白A膠體金探針，在塑料底板上分別將吸水紙墊、硝酸纖維膜、金標(biāo)墊以及玻璃纖維膜楊平墊組裝在一起。

（2）人體血清，血清要選擇臨床確診為布魯氏菌病患者的血清，以及正常人的血清。

2.2 操作

取代檢驗(yàn)血清10μ l按照1：400的比例加入生理鹽水400μ l，混合之后作為檢測(cè)液備用。

將血清標(biāo)本檢測(cè)液滴加3至4滴到布魯氏菌病快速診斷盒中，靜置兩分鐘后即可開(kāi)始觀察結(jié)果，15min后停止觀察，在診斷窗口對(duì)照處出會(huì)出現(xiàn)一條紅色沉淀線(xiàn)，出現(xiàn)此現(xiàn)象即可說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果為陰性，也就是不存在布魯氏菌病感染，如果診斷窗口對(duì)照和檢測(cè)處出現(xiàn)了兩條紅色沉淀線(xiàn)，出現(xiàn)此現(xiàn)象即可說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，存在布魯氏菌病感染，如果診斷窗口對(duì)照處沒(méi)有出現(xiàn)紅色沉淀線(xiàn)，則說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果失效，應(yīng)該重新進(jìn)行試驗(yàn)檢測(cè)。

3 結(jié)論

通過(guò)上述分析和說(shuō)明，在進(jìn)行布魯氏菌病抗體的檢測(cè)過(guò)程中，當(dāng)前階段采用的方法主要有虎紅平板凝集試驗(yàn)、試管凝集試驗(yàn)、cELISA試驗(yàn)三種，但是其在使用過(guò)程中都會(huì)存在著或多或少的弊端，而新提出的快速檢測(cè)方法=膠體金技術(shù)，在使用期間，盡可能的減少人為參與，避免人為操作過(guò)程中出現(xiàn)的失誤，是當(dāng)前布魯氏菌病抗體檢測(cè)工作中一項(xiàng)新興的技術(shù)，希望能對(duì)今后布病以及布病抗體的檢測(cè)工作提供更好的試驗(yàn)方法和途徑。

[1] 藺國(guó)珍.布魯氏菌病LAMP檢測(cè)方法的建立及雙基因共表達(dá)分子疫苗研究[D].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2012.

[2] 王芳，馮宇，張閣，等.牛布魯氏菌間接ELISA抗體檢測(cè)方法的建立[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，49（9）：1818-1825.

新疆兵團(tuán)第六師五家渠市《2016年度師市科技計(jì)劃和重大科技專(zhuān)項(xiàng)計(jì)劃》（1623號(hào)）

王琰（1987—），女，本科學(xué)歷，助理獸醫(yī)師，現(xiàn)從事動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)工作。