南文金，黃健強，胡鴻惠，吳靜波，彭國良

(1.韶關(guān)學院動物疫病實驗室，廣東韶關(guān) 512005；2.韶關(guān)學院英東農(nóng)業(yè)科學與工程學院，廣東韶關(guān) 512005；3.粵北生豬生產(chǎn)及疫病防控協(xié)同創(chuàng)新發(fā)展中心，廣東韶關(guān) 512005)

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獸醫(yī)臨床

某規(guī)?；i場豬瘟抗體水平的監(jiān)測

南文金1，3，黃健強1，3，胡鴻惠1，3，吳靜波1，3，彭國良2，3

(1.韶關(guān)學院動物疫病實驗室，廣東韶關(guān) 512005；2.韶關(guān)學院英東農(nóng)業(yè)科學與工程學院，廣東韶關(guān) 512005；3.粵北生豬生產(chǎn)及疫病防控協(xié)同創(chuàng)新發(fā)展中心，廣東韶關(guān) 512005)

摘要：為了對某豬場豬瘟疫苗免疫效果做出評估并進一步優(yōu)化免疫程序，應用豬瘟疫苗抗體阻斷ELSIA檢測試劑盒對該場不同日齡仔豬及育肥豬的豬瘟疫苗抗體水平進行檢測,對抗體合格率、平均阻斷率和變異系數(shù)統(tǒng)計分析。檢測數(shù)據(jù)顯示，該豬場豬瘟免疫空白期過長，疫苗免疫接種后抗體合格率較低，增加了感染豬瘟病毒的風險，應及時進行豬瘟免疫程序的優(yōu)化。豬瘟疫苗抗體水平監(jiān)測對豬瘟防控具有重要意義，可為規(guī)?；i場開展豬瘟疫苗抗體檢測，制定合理的免疫措施提供參考。

關(guān)鍵詞：豬瘟； 抗體水平；免疫程序;監(jiān)測

豬瘟(Classical swine fever, CSF)是一種高度接觸性傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須報告的動物疫病[1]。豬瘟是危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要傳染病之一，也是給養(yǎng)豬業(yè)帶來損失最直接、危害最嚴重的疫病之一。20世紀50年代我國專家研制的豬瘟兔化弱毒疫苗株經(jīng)臨床應用效果顯著，不少國家引進該疫苗后消滅了豬瘟，為世界養(yǎng)豬業(yè)做出了巨大貢獻。目前，我國對豬瘟采取強制免疫措施，有效的防控了豬瘟的暴發(fā)，但經(jīng)過幾十年的發(fā)展，豬瘟在我國至今沒有被消滅。

近些年，在高密度免疫下，經(jīng)典豬瘟的發(fā)生少有報道，出現(xiàn)了潛伏期長、排毒周期長、臨床癥狀不典型的非典型豬瘟，一旦發(fā)生，同樣影響豬場生產(chǎn)效益，造成嚴重經(jīng)濟損失。研究證明，豬瘟兔化弱毒疫苗對當前流行的豬瘟野毒株仍然有良好的保護作用，非典型豬瘟的發(fā)生和疫苗的免疫效果關(guān)系密切，因此對豬瘟疫苗抗體水平監(jiān)測，根據(jù)抗體水平變化制定科學的免疫程序，提高疫苗免疫效果對防控豬瘟發(fā)生具有重要意義[2]。本研究對某規(guī)?；i場豬瘟抗體水平進行監(jiān)測，通過抗體水平變化分析，對該豬場目前采取的豬瘟免疫程序科學性進行合理評價并提出優(yōu)化方案，為豬場豬瘟疫苗抗體監(jiān)測與免疫程序優(yōu)化提供參考。

1材料與方法

1.1材料

血清樣本來自粵北某豬場，該場存欄基礎(chǔ)母豬900多頭。根據(jù)該豬場生產(chǎn)模式情況，分別選擇懷孕30 d～40 d的母豬；出生 6 d～8 d、15 d～17 d、20 d～23 d的哺乳仔豬；出生28 d～34 d、37 d～44 d、45 d～51 d、52 d～60 d的保育仔豬和出生61 d～69 d、70 d～82 d、83 d～90 d的育肥豬，每一階段(批)的豬群中隨機選擇10頭豬前腔靜脈采血3 mL～5 mL，共計110份血液樣品，實驗室常規(guī)方法分離制備血清，4℃冷藏待檢。豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測試劑盒，美國Idexx公司產(chǎn)品，批號：D361。

1.2方法

1.2.1豬瘟免疫接種信息調(diào)查 認真調(diào)查該場豬瘟免疫程序，樣品采集時查看每一批次豬群的豬瘟疫苗詳細免疫接種記錄，包括免疫接種日期、疫苗生產(chǎn)廠家及規(guī)格、免疫接種劑量等免疫信息。

1.2.2豬瘟病毒抗體檢測按照美國Idexx公司豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測試劑盒操作說明書進行，檢測前試劑盒和檢測樣本恢復至室溫，試劑盒反應步驟置于23℃恒溫箱中進行孵育。

1.2.3試驗成立條件及結(jié)果計算按照試劑盒要求，只有陰性對照的平均OD值大于0.500，陽性對照的阻斷率大于50%時，該檢測結(jié)果才能有效。阻斷率=(陰性對照平均OD值-樣本OD值)/陰性對照平均OD值×100%。

1.2.4檢測結(jié)果判斷標準如果被檢測樣本的阻斷率大于或等于40%，該樣本可以判斷為陽性(有CSFV抗體存在)；如果被檢測樣本的阻斷率小于或等于30%，該樣本就可以判為陰性(無抗CSFV抗體存在)；如果被檢測樣本的阻斷率在30%～40%之間，則數(shù)據(jù)可疑，應在數(shù)日后再對該動物進行重測。如果被檢測樣本阻斷率大于等于50%，該樣品豬瘟抗體水平為合格，即能提供有效的保護力。

2結(jié)果

2.1該場豬瘟疫苗免疫接種信息調(diào)查

經(jīng)過現(xiàn)場調(diào)查和查看該場豬群豬瘟疫苗免疫接種記錄，該場豬瘟疫苗一直使用某公司生產(chǎn)的ST豬瘟活疫苗(傳代細胞源)。母豬豬瘟的免疫程序為普免和跟胎免疫接種相結(jié)合方式，即每年春秋兩季集中免疫接種2次，每窩仔豬斷奶當天母豬再跟胎免疫接種1次，免疫接種劑量為4頭份/頭；商品代豬21日齡左右首免豬瘟疫苗1頭份，60日齡左右二免豬瘟疫苗2頭份。根據(jù)每批商品代豬群豬瘟免疫接種記錄可以詳細了解采樣時各個批次豬群的豬瘟免疫接種信息，準確計算該豬群豬瘟疫苗距離首免和二免豬瘟疫苗的時間(表1)。

2.2母豬豬瘟疫苗抗體水平檢測結(jié)果

對采集的懷孕母豬豬瘟疫苗抗體檢測結(jié)果表明(表1)，該場懷孕母豬豬瘟疫苗抗體水平合格率達到100%，平均阻斷率為82.3%，變異系數(shù)為17.31%。

2.3哺乳仔豬豬瘟疫苗抗體水平結(jié)果

表1數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示，哺乳仔豬高水平母源抗體維持到2周齡左右，仔豬在出生后1周齡左右(出生6日齡～8日齡)母源抗體平均阻斷率為70.0%，抗體陽性率和合格率均為90%，在采集的15日齡～17日齡的仔豬樣品母源抗體水平平均阻斷率略有上升，達到71.3%，母源抗體陽性率和合格率還能達到90%，采集的20日齡～23日齡哺乳仔豬豬瘟病毒母源抗體抗體水平開始下降，抗體平均阻斷率為66.0%，抗體陽性率和合格率下降到70%。

2.4豬瘟疫苗免疫接種后抗體水平變化情況

研究分別采集了該場豬瘟疫苗首免后和二免后不同時間豬群樣本進行豬瘟疫苗抗體水平檢測，表1顯示，豬瘟疫苗首免后抗體水平開始下降，抗體離散度增加。首免后5 d豬瘟疫苗抗體合格僅為40%，平均阻斷率為44.2%；首免后20 d抗體陽性率為20%，抗體合格率為0，抗體水平平均阻斷率僅為27.9%；首免后26 d抗體陽性率和合格率分別為20%和10%，平均阻斷率和免疫接種后20 d相比沒有明顯提升；首免后36 d阻斷率上升到39.5%，樣品陽性率和合格率開始緩慢上升到40%和30%；豬瘟疫苗首免后45 d，二次免疫接種后6 d所采集的仔豬樣品豬瘟疫苗抗體陽性率和合格率才分別上升到80%和70%，抗體水平平均阻斷率也達到62.9%，但較高水平豬瘟疫苗抗體并沒有維持較長時間，在采集的出生83日齡～90日齡豬群樣品，即豬瘟二免后23 d，豬瘟疫苗抗體已經(jīng)下降到很低水平，雖然抗體陽性率為50%，但合格率僅為10%。

2.5豬瘟疫苗免疫接種對豬群抗體水平變化的影響

將采集的該場商品代豬群豬瘟疫苗抗體陽性率、合格率、平均阻斷率和變異系數(shù)以柱形圖進行表示，對豬瘟疫苗兩次免疫接種前后抗體水平變化情況進行比較分析，從圖1可以看出，在豬瘟疫苗首免前仔豬豬瘟母源抗體水平都維持在較高水平，抗體變異系數(shù)相對較低；仔豬進行豬瘟疫苗首次免疫接種后，采集的各階段豬群樣品抗體陽性率、合格率和平均阻斷率都迅速下降，抗體水平變異系數(shù)也呈增高趨勢，除首免后23 d，即出生45 d～51 d仔豬群抗體水平變異系數(shù)在30%左右外，其他日齡豬群抗體變異系數(shù)都在50%以上，其中首次免疫接種豬瘟疫苗后26 d(出生52 d～60 d豬群)，樣品抗體變異系數(shù)高達68.05%；首次免疫接種后45 d，二次免疫接種后6 d(出生70 d～82 d豬群)，抗體水平才明顯提高，抗體均勻度也顯著改善，抗體合格率達到70%，變異系數(shù)降低到30%以下；二次免疫接種后23 d(出生83 d～90 d豬群)采集的樣品豬瘟疫苗抗體水平再次降低，變異系數(shù)升高到50%以上。

2.6該豬場豬瘟免疫效果評價及免疫方案優(yōu)化

根據(jù)豬瘟疫苗抗體檢測結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，該豬場豬瘟疫苗免疫程序不科學，21日齡左右首免時間過早，來自疫苗的抗原被高水平母源抗體中和了，少量的疫苗抗原無法刺激機體免疫反應，導致母源抗體迅速下降而疫苗刺激機體抗體上升緩慢；間隔40 d左右進行豬瘟疫苗二免時按常規(guī)免疫接種劑量進行免疫操作，而此時一免產(chǎn)生的抗體正處于高峰，二次免疫接種的疫苗抗原再次被抗體中和，形成免疫復合物被機體免疫系統(tǒng)清除，無法激活免疫記憶細胞啟動體液免疫機制迅速產(chǎn)生疫苗抗體，導致二免后20多天豬瘟抗體水平不升反降。鑒于該豬場母豬豬瘟抗體水平較高，結(jié)合仔豬抗體檢測結(jié)果，可以采用30日齡～35日齡首次免疫接種豬瘟疫苗，60日齡～65日齡進行豬瘟二次免疫接種，具體免疫效果還需進一步監(jiān)測。

表1　豬瘟疫苗血清抗體水平統(tǒng)計結(jié)果

注：“-”未進行免疫接種。

Note: "-"non vaccination.

圖1　豬瘟疫苗免疫接種對豬瘟抗體水平變化的影響

3討論

抗體監(jiān)測在豬瘟免疫效果評價及免疫程序制定中具有重要指導意義。國內(nèi)外學著建立了多種豬瘟疫苗抗體檢測方法，目前應用最廣泛的ELISA是美國Idexx公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗抗體阻斷ELISA檢測試劑盒，該試劑盒判斷標準中，阻斷率大于等于40%為豬瘟疫苗抗體陽性，但根據(jù)阻斷率和病毒中和試驗間關(guān)系研究結(jié)果，該試劑盒檢測豬瘟疫苗抗體阻斷率達到50%時的豬瘟疫苗抗體水平相當于中和抗體滴度1∶32，此水平的中和抗體水平才對豬群具有保護力[3]，實際生產(chǎn)中要以阻斷率大于50%作為豬瘟疫苗抗體合格標準。一些利用該試劑盒進行豬瘟疫苗抗體檢測研究的報道中以陽性率(阻斷率大于40%)來作為判斷抗體是否合格的標準不能反應豬群豬瘟疫苗抗體真實水平。本研究圖1顯示，豬瘟疫苗抗體陽性率和合格率有時差異較大，在某些階段豬群中，豬瘟疫苗抗體陽性率達到50%，但抗體合格率卻很低，甚至為0。因此，在利用Idexx公司豬瘟疫苗抗體阻斷ELISA監(jiān)測抗體是要以阻斷率達到50%為判斷抗體合格的最低標準，阻斷率大于40%小于50%只代表抗體陽性，不代表中和抗體能抵抗豬瘟野毒侵襲[4]。

豬瘟疫苗抗體水平檢測數(shù)據(jù)的科學分析是評價豬群豬瘟疫苗免疫效果的前提。豬場豬瘟疫苗免疫抗體合格率高于90%，變異系數(shù)母豬豬群小于25%，商品豬群小于30%是比較理想狀態(tài)[4]。本試驗監(jiān)測的該豬場豬瘟疫苗抗體數(shù)據(jù)表明，該場母豬群豬瘟免疫接種效果較好，豬瘟疫苗抗體合格率為100%，抗體阻斷率超過80%，變異系數(shù)小于20%，但商品代豬群豬瘟疫苗首免以后抗體下降迅速，抗體離散度較大，變異系數(shù)都高于50%，免疫空白期超過1個月，保育豬群風險較高。慕國輝等[5]在對仔豬豬瘟免疫相關(guān)因素系統(tǒng)研究后證實，高水平母源抗體對豬瘟疫苗首免影響顯著，首免后豬瘟抗體上升率和上升幅度和母源抗體水平呈負相關(guān)。本研究檢測的21日齡左右豬群豬瘟疫苗母源抗體水平還比較高，而此時進行豬瘟疫苗免疫接種是導致保育階段豬群豬瘟抗體水平不理想的主要原因。

規(guī)模養(yǎng)豬是以群體免疫接種而不是個體免疫的理念進行疫苗免疫接種，在進行抗體監(jiān)測時的抽樣方式要代表一個群體的免疫狀態(tài)，只有這樣檢測的數(shù)據(jù)才能對生產(chǎn)具有指導意義。在針對特定豬場豬瘟疫苗抗體監(jiān)測研究的報道中[6-7]，采用采集出生0、7、14、21、28 d，以此類推，間隔7 d采集一批樣品的采樣方式雖然時間準確，能反映豬群抗體變化規(guī)律，但對按一定生產(chǎn)周期為單位設(shè)計豬欄(舍)數(shù)量，嚴格執(zhí)行全進全出和分區(qū)飼養(yǎng)的規(guī)模豬場生產(chǎn)指導卻有一定欠缺，因為這些豬場豬群轉(zhuǎn)入下一個生產(chǎn)區(qū)時一般也是按同一欄或同一棟(間)豬轉(zhuǎn)入相應的欄舍飼養(yǎng)，豬的免疫也是按欄或棟為單位進行免疫，每一欄或一棟(間)豬舍中的豬出生日期有一定的時間跨度，實際操作中無法做到按準確出生天數(shù)進行免疫接種。因此，本研究采樣是按豬場實際生產(chǎn)流程，采集的每一階段樣品即為免疫接種時間為同一天的同一豬群，所以出生時間有相應的跨度，按此采樣方式檢測的數(shù)據(jù)代表了該批次豬群整體抗體水平和變化規(guī)律，對優(yōu)化免疫程序參考價值更大。

本研究選擇的該豬場生產(chǎn)是以“周”為單位設(shè)計，即每周出生的哺乳仔豬斷奶后轉(zhuǎn)入相應的保育舍，每間保育舍豬再轉(zhuǎn)入相應的生長育肥豬舍，但根據(jù)實際生產(chǎn)記錄和免疫接種信息查閱發(fā)現(xiàn)，在實際生產(chǎn)中每批豬的出生時間跨度相差較大，基本都超過7 d，跨度最大的達到12 d，導致和生產(chǎn)流程設(shè)計誤差較大的原因是同一時間段內(nèi)(7 d)分娩母豬數(shù)不均衡，同一欄豬出生時間跨度較大，這也成為導致該豬場豬瘟免疫效果不理想，抗體水平不均勻，變異系數(shù)較高的重要原因。要想提高規(guī)模豬場群體免疫的效果，必須有科學合理的生產(chǎn)流程和管理措施作為保障。

疫苗免疫接種仍是控制豬瘟主要手段，科學的免疫程序?qū)μ岣哓i瘟疫苗免疫效果至關(guān)重要。對不同豬場豬瘟免疫監(jiān)測研究確定的免疫程序都不相同[8-9]，因此，豬場要重視豬瘟疫苗抗體監(jiān)測，根據(jù)抗體消長情況對免疫接種方案及時做出調(diào)整優(yōu)化，提高疫苗免疫效果。養(yǎng)豬生產(chǎn)是一個系統(tǒng)工程，疫苗免疫效果和豬舍設(shè)計，配種分娩、轉(zhuǎn)欄轉(zhuǎn)群、飼養(yǎng)管理等關(guān)系密切，要樹立群體免疫理念，重視群體免疫接種技術(shù)研究與應用，提高疫苗免疫效果，才能提高豬群抵御病原微生物侵襲的能力。

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Monitoring of Classical Swine Fever Antibody Level in a Large Scale Pig Farm

NAN Wen-jin1，3，HUANG Jian-qiang1，3， HU Hong-hui1，3， WU Jing-bo，3， PENG Guo-liang2，3

(1.LaboratoryofAnimalDisease，ShaoguanUniversity,Shaoguan,Guangdong,512005,China;2.SchoolofAgriculturalScienceandEngineering，ShaoguanUniversity,Shaoguan,Guangdong,512005,China;3.NorthGuangdongCollaborativeInnovationandDevelopmentCenterofPigFarmingandDiseaseControl,Shaoguan,Guangdong,512005,China)

Abstract:In order to make immune effect evaluation and further optimize the immune procedure of classical swine fever virus(CSFV)vaccine in a pig farm，the blood samples of different day age of piglets and fattening pigs were collected from the farm and detected by CSFV antibody blocking ELSIA kit.Based on antibody qualified rate,average blocking rate and coefficient of variation,combined with CSFV immunization program,the testing data showed that the pig farm immunity blank period was too long,the antibody qualified rate was low,which increased the risk of CSFV infection，the CSF vaccine immunization program timely should be optimized.Antibody level monitoring is important to CSF prevention and control.The experiment can provide reference for detection antibody and making reasonable immune procedure against CSF.

Key words:Classical swine fever;antibody level;immune procedure；monitoring

文章編號:1007-5038(2016)03-0120-04

中圖分類號:S852.651

文獻標識碼:B

作者簡介：南文金(1981-)，男，河南靈寶人，助理研究員，碩士，主要從事動物疫病防控技術(shù)研究。

基金項目：廣東省科技計劃項目(2011B020305009)；韶關(guān)市科技計劃項目(2013CX/N09)

收稿日期：2015-05-10