王俐梅, 郭健敏, 汪巨峰 楊 威

(1. 廣東省生物資源應(yīng)用研究所藥物非臨床評價研究中心, 廣州 510990; 2. 廣東萊恩醫(yī)藥研究院有限公司, 廣州 510990)

符合AAALAC 要求的實驗猴飼養(yǎng)和集群化管理

王俐梅1,2, 郭健敏1,2, 汪巨峰1, 楊 威1,2

(1. 廣東省生物資源應(yīng)用研究所藥物非臨床評價研究中心, 廣州 510990; 2. 廣東萊恩醫(yī)藥研究院有限公司, 廣州 510990)

建立符合國際實驗動物評估和認(rèn)可委員會(AAALAC)要求的實驗猴飼養(yǎng)和集群化管理程序有利于研究機(jī)構(gòu)人道和科學(xué)地對待動物，最大程度表達(dá)動物的天性，從而保障動物的健康和福利。本文總結(jié)了AAALAC要求下的實驗猴的飼養(yǎng)程序和集群化管理程序，具體包括實驗猴的基本飼養(yǎng)程序、實驗猴集群化管理等方面。并進(jìn)一步探討了符合國際動物福利標(biāo)準(zhǔn)的實驗猴集群化管理對于確保動物健康，為實驗提供可靠而準(zhǔn)確資料的重要性。

國際實驗動物評估和認(rèn)可委員會(AAALAC); 實驗猴; 集群化管理

國際實驗動物評估和認(rèn)可委員會(AAALAC)是一個權(quán)威的評估和認(rèn)證動物飼養(yǎng)和使用標(biāo)準(zhǔn)的國際機(jī)構(gòu), 它的宗旨是要求使用實驗動物的科研單位人道、科學(xué)地對待動物, 確保實驗動物福利[1]。目前, AAALAC已經(jīng)得到國際普遍認(rèn)可。我國也在逐漸向國際接軌, 越來越多的機(jī)構(gòu)取得了AAALAC的認(rèn)證。隨著現(xiàn)代生物醫(yī)藥的發(fā)展, 以非人靈長類動物作為實驗動物的研究日益增多。因此, 如何開展符合AAALAC要求的實驗猴集群化管理, 并最終使實驗猴表達(dá)其特有的天性[2], 有效地防止異常行為的發(fā)生是當(dāng)下一個非常值得探討的問題。獼猴是自然界中最常見、分布最廣的一種猴, 也是最常用的實驗用猴品種[3-7]。因此本文對于AAALAC要求下的實驗猴飼養(yǎng)和集群化管理的探討主要以獼猴為例進(jìn)行說明。

1 實驗猴基本飼養(yǎng)程序

獼猴屬于社會化動物，有社會需求，為了保護(hù)實驗猴的福利，確保實驗研究的有效性，應(yīng)該考慮將實驗猴進(jìn)行生活豐富化飼養(yǎng)，以滿足其基本的社會需求，避免因為生活空間的限制和生活的單調(diào)而使動物變得無動于衷或焦躁不安，最后發(fā)展到行為呆板[7,8]。

1.1 生活環(huán)境的管理

研究機(jī)構(gòu)提供的生活條件應(yīng)滿足獼猴基本的生存和活動需求，主要包括以下幾點[9]。首先是環(huán)境溫度，由于獼猴無法保持體溫，因此應(yīng)該避免過冷過熱,以及環(huán)境溫度波動過大。根據(jù)AAALAC的實驗動物飼養(yǎng)管理和使用指南(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals，簡稱“ 指南”)的要求，建議研究機(jī)構(gòu)應(yīng)為實驗猴的飼養(yǎng)環(huán)境提供18～28 ℃的溫度和40%～70%的相對濕度[10,11]。其次是光照，獼猴屬于日間活動夜晚棲息的動物，因此室內(nèi)飼養(yǎng)的實驗猴應(yīng)該遵循它們的基本生活習(xí)性，給予均勻分布的、足量的光照強(qiáng)度和光照時間, 根據(jù)指南要求, 動物光照強(qiáng)度控制在100～200 lx為宜，晝夜時間以10 h/14 h或12 h/12 h為宜。最后是動物所占用的空間，應(yīng)綜合考慮其體質(zhì)量、大小、生長特征、動物需求等因素。大多情況下幼年實驗猴較活躍，因此研究機(jī)構(gòu)不能因動物的大小、體質(zhì)量而改變籠內(nèi)空間的大小。根據(jù)指南中的建議，研究機(jī)構(gòu)應(yīng)提供合適的非人靈長類動物的空間大小, 例如體質(zhì)量低于4 kg的非人靈長類動物，籠底面積應(yīng)至少為0.5 m2, 高度不低于0.8 m, 并隨著動物體質(zhì)量的增加而增加籠底面積和高度[10,11], 保證每只動物有足夠的空間, 使動物能轉(zhuǎn)身、調(diào)整正常體位、自由采食和飲水, 給予動物舒適的空間。

1.2 飲食管理

雖然獼猴的食物種類繁多，但它們對食物的愛好程度不一，這與食物出現(xiàn)的次數(shù)、食物的口感、食物獲取的難易程度有關(guān)。當(dāng)多種食物同時提供給動物時，它們會挑選喜歡的食物，而其他的少吃或不吃或用于玩耍。此外，實驗猴用于玩耍損耗的食物較多，飼養(yǎng)過程中若飼料投喂過多易造成大量浪費(fèi)，因此飼養(yǎng)實驗猴應(yīng)合理安排飼喂的時間、頻率及種類等。室內(nèi)飼養(yǎng)使獼猴失去了自由攝取食物的機(jī)會，完全依賴飼養(yǎng)人員的供給，因此，必須供給其充足的營養(yǎng)物質(zhì)。獼猴的基礎(chǔ)代謝量與體質(zhì)量、性別、體溫和運(yùn)動有明顯相關(guān)性。對于實驗猴的喂養(yǎng)可根據(jù)其生長狀況作出適當(dāng)調(diào)整。投喂的水果或蔬菜應(yīng)該分成小塊提供，以防浪費(fèi)，并且要經(jīng)常更換種類，增加動物的興趣。除定期給予水果或蔬菜外，在動物產(chǎn)生緊張焦慮的情況下，如保定、給藥操作后，也應(yīng)給予水果作為獎勵來安撫其情緒。

1.3 環(huán)境的豐富化(含生活環(huán)境和行為表達(dá))

室內(nèi)飼養(yǎng)實驗猴應(yīng)該最大化利用房間的高度，安裝可攀爬的結(jié)構(gòu)，滿足實驗猴在不同高度的場所休息，還能提供豐富的環(huán)境，使動物大多時間棲息在高處[12]。例如在籠內(nèi)上方可以添加橫梁，方便動物看到外面。當(dāng)工作人員穿戴防護(hù)服裝接近動物時，動物會變得緊張與好斗。為了減少這種情況，應(yīng)該有足夠高的地方便于實驗猴立即爬向高處找到高于人類視線的安全地方。另外也可以通過在房間內(nèi)掛上假樹葉、假水果等營造樹林的氛圍。

由于獼猴天性喜歡大多時間聚在一起處理食物，食物豐富化也可以作為動物豐富化飼養(yǎng)的一種方式[13]。當(dāng)食物正常放于食槽內(nèi)使猴容易獲取時，它們的興趣不在于食物本身，而在于如何玩耍食物，例如扔食物給其他猴作為樂趣。當(dāng)把食物放在有孔的物品內(nèi)或者放在籠子上方比放在食槽中更能激發(fā)猴覓食探索行為[14]，可以放正常飼料也可以放補(bǔ)充食物例如水果蔬菜等。也可以將食槽上取出食物的通道縮小或用網(wǎng)隔開，使猴無法大量獲得食物，增加其探索食物的過程。這些方法可以作為供給猴主要日常飼料的途徑，可以大大減少食物浪費(fèi)。另外也可以使用小塊水果例如葡萄混合到干凈的木糠中誘使實驗猴尋找并分離食物，這樣既降低成本又容易使其參與到覓食活動中。例如在一些管道中填入粘性的食物例如蘋果醬等也能鼓勵動物的覓食行為。也可以把食物分成小塊放在食槽內(nèi)。小塊的食物能增強(qiáng)手動的靈巧性，延長動物探索和吃食的時間[15]。

此外，還有多種豐富猴生活環(huán)境的方法。其中提供玩具是比較推薦的一種。對于功能簡單的玩具，猴能夠很快發(fā)掘其功能，并失去興趣。因此應(yīng)該更換不同的玩具以保持猴對玩具的好奇性。構(gòu)造復(fù)雜且操作性較強(qiáng)的玩具也可以提供給猴，使其保持長時間的興趣，但是會大大增加玩具的清潔維護(hù)工作量，因此機(jī)構(gòu)應(yīng)根據(jù)實際情況為猴選取合適的玩具。獼猴有色覺，建議購買不同顏色、不同形狀和質(zhì)地的玩具。猴也會時常咀嚼玩具，因此玩具應(yīng)耐咬、持久。當(dāng)玩具已被損壞時, 應(yīng)及時將玩具撤出, 避免實驗猴誤吞或受傷。鏡子也是一種可行且易操作的環(huán)境豐富化形式，可以認(rèn)為是視覺豐富化的一種。鏡子的材質(zhì)不建議使用玻璃, 獼猴的好斗性會很快會破壞鏡子并使其受傷，最好的材質(zhì)是不銹鋼, 不易損壞、生銹且易于清洗。飼養(yǎng)于房間內(nèi)猴, 必須使猴在視覺上、聽覺上及觸覺上能感知到其他同類的存在，以便相互間交流。同時音樂或視頻的播放對動物也是一種刺激[16]。輕柔的音樂能夠幫助動物減輕緊張、焦慮情緒，例如陌生的實驗人員靠近時會引起動物的警惕、緊張行為，試驗進(jìn)行過程中也會引起動物的焦慮情緒，輕柔的音樂使動物能盡快放松并熟悉這些行為[17]。

2 實驗猴集群管理

2.1 成對飼養(yǎng)

一般來說，群體飼養(yǎng)是對獼猴正常發(fā)育最理想的狀態(tài)。但群體飼養(yǎng)往往造成爭斗，搶食等行為，使得部分猴經(jīng)常受傷或處于饑餓狀態(tài)，不利于實驗猴的健康成長，也無法保障試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。因此成對飼養(yǎng)成為目前最適合研究機(jī)構(gòu)使用的方法，既能滿足試驗需求，又能保障動物健康。但成對飼養(yǎng)需要完整的配對計劃和配對后的密切監(jiān)控計劃以確保配對成功，無論在前期還是后期都需要大量的觀察工作。

2.2 選擇同伴

在進(jìn)行實驗猴成對飼養(yǎng)前，首要工作是確保動物都是健康，無異常行為。在猴完全接觸之前需要由獸醫(yī)或經(jīng)驗豐富的工作人員合理選擇潛在的同伴，評估它們之間的相容性，例如有支配性的動物會與服從性的動物更容易相容，兩只雌性不好斗的動物也能相容，成年動物與幼年動物容易相容。另外通過觀察動物之間的面部表情、聲音等也能判斷動物之間是否友好。

2.3 配對熟悉

大多數(shù)經(jīng)過熟悉期的成對飼養(yǎng)猴很少會發(fā)生相互傷害，而且相互間會生活得更加和諧。通?？梢酝ㄟ^兩種方式建立動物的配對熟悉過程。第一種是使用非接觸式熟悉方法，將2只猴單籠飼養(yǎng)于同一房間內(nèi)無法直接接觸，但兩者可以使用非接觸式的交流如視覺、聽覺交流，該方法能夠防止猴因直接接觸而造成損傷。第二種方法是接觸式熟悉，2只實驗猴單籠飼養(yǎng)于同一房間內(nèi)，通過網(wǎng)狀隔板分開，允許兩者之間部分接觸，飼養(yǎng)人員通過觀察兩者之間的互動行為來判斷相容性[18]。例如，通過2只猴有相互捉虱、梳毛等行為，說明可以成對飼養(yǎng)；當(dāng)一只對另一只顯示出高傲的姿態(tài)，而另一只則后退到角落里，說明兩者也可以相容；在2只猴的相等距離位置上提供水果，強(qiáng)勢的首先搶到水果，而順從的那只則看著遠(yuǎn)處，也可認(rèn)為這兩只實驗猴可以相容[19,20]。

2.4 配對過程

當(dāng)確認(rèn)猴之間的相容性時，應(yīng)將配對的2只猴相鄰放置，慢慢拉開中間的隔板，使他們能自由通過。一旦2只猴完全接觸，需要密切關(guān)注確保它們能夠和諧相處。當(dāng)2只猴無法和諧相處或出現(xiàn)嚴(yán)重的爭斗行為時，應(yīng)立即使用隔板將其分開。

2.5 配對監(jiān)控

通常在配對后30 min內(nèi)即可判斷配對是否成功，但還需在配對后24 h內(nèi)密切觀察。猴的多種姿態(tài)都能表現(xiàn)出是否相容，例如分享食物、相互梳毛、彼此擁抱、一起咀嚼、共同防守、一起面向工作人員或者其中一只動物維持順從另一只動物的姿勢等。在實際飼養(yǎng)中，出于對研究方案的要求或動物健康問題的考慮，有時需要將動物分開飼養(yǎng)一段時間。在這種情況下，應(yīng)該使用多種方法補(bǔ)償同伴的缺失，例如將同伴緊鄰放置，使它們之間能夠互見或部分接觸; 給予視頻播放或音樂播放; 給予水果補(bǔ)償; 獸醫(yī)或其他工作人員的介入，加強(qiáng)與動物的溝通和交流，減輕動物的失落感。當(dāng)然，猴之間的相容并不是一成不變的，可能過一段時間會出現(xiàn)爭斗行為，也可能本來不相容的變得和諧相處。因此需要長期持續(xù)的觀察。

3 小結(jié)

實驗猴的飼養(yǎng)和管理與國際接軌是今后的必然趨勢, 符合AAALAC要求的實驗猴飼養(yǎng)和集群化管理必將有利于實驗猴的身心健康, 有利于實驗猴表達(dá)天性，進(jìn)而使實驗結(jié)果更為客觀可靠。本文針對這個問題進(jìn)行了探討, 希望能夠為國內(nèi)的相關(guān)研究機(jī)構(gòu)在試驗猴飼養(yǎng)管理方面提供參考。

[1] 史光華, 呂京, 葛紅梅, 等. 北美實驗動物認(rèn)可管理現(xiàn)狀[J].實驗動物與比較醫(yī)學(xué), 2015, 35(2):138-141.

[2] Mallapur A, Choudhury BC. Behavioral abnormalities in captive nonhuman primates[J]. J Appl Anim Welf Sci, 2003, 6(4):275-284.

[3] 陳元霖, 白壽昌, 曾中興. 獼猴[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 1985.

[4] 李鵬飛. 野生獼猴生物學(xué)特性觀察[J]. 山西林業(yè)科技, 1994, 3:28-30.

[5] 陳景軒, 魏盛, 薛玲. 非人靈長類動物情緒的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述, 2013, 19(24):4423-4426.

[6] 徐玉蕊. 安徽野生獼猴實驗動物化及其種質(zhì)特異性研究[D]. 合肥: 安徽大學(xué), 2013.

[7] Schapiro SJ. A few new developments in primate housing and husbandry[J]. Scand J Lab Anim Sci, 2000, 27(2):103-110.

[8] Mallapur A. Managing primates in zoos: Lessons from animal behaviour[J]. Currentence, 2005, 89(7):1214-1219.

[9] Rennie AE, Buchanansmith HM. Refinement of the use of nonhuman primates in scientific research. Part II: housing, husbandry and acquisition[J]. Anim Welf, 2006, 15(3):215-238.

[10] GB14925-2010.實驗動物環(huán)境及設(shè)施[S].

[11] Albus U. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th Ed[J]. Lab Anim, 2012, 46(3):267-268.

[12] Buchanan-Smith HM. Environmental enrichment for primates in laboratories[J]. Adv Sci Res, 2010, 5(1):41-56.

[13] Schapiro SJ. Effects of social manipulations and environmental enrichment on behavior and cell-mediated immune responses in rhesus macaques[J]. Pharmacol Biochem Behav, 2002, 73(1):271-278.

[14] Reinhardt V, Institute AW. Comfortable quarters for labora-tory animals[J]. J Appl Anim Welf Sci, 1999, 2(3):247-250.

[15] Baker KC, Weed JL, Crockett CM, et al. Survey of environmental enhancement programs for laboratory primates[J]. Am J Primatol, 2007, 69(4):377-394.

[16] Lee GL, Yi MJ, Crockett CM, et al. Assessing video presentation as enrichment for captive male pigtailed macaques (Macaca nemestrina)[J]. Lab Prim Newsl, 2011, 50(4):7-9.

[17] Lutz CK, Novak MA. Environmental enrichment for nonhuman primates: theory and application[J]. ILAR J, 2005, 46 (2):178-191.

[18] Lee GH, Thom JP, Chu KL, et al. Comparing the relative benefits of grooming-contact and full-contact pairing for laboratory-housed adult female Macaca fascicularis [J]. Appl Anim Behav Sci, 2012, 137(3-4):157-165.

[19] Reinhardt V. Group formation of previously single-caged adult rhesus macaques for the purpose of environmental enrichment[J]. J Exp Anim Sci, 1991, 34(3):110-115.

[20] DiVincenti J, Wyatt JD. Pair housing of macaques in research facilities: a science-based review of benefits and risks[J]. J Am Assoc Lab Anim Sci , 2011, 50(6):856-863.

Q95-33

C

1674-5817(2016)05-0396-04

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.05.016

2016-04-09

廣東省級財政專項資金項目——廣東省創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)團(tuán)隊(405-2016-XMZC-0002-0004)

王俐梅(1986-), 女, 主治獸醫(yī), 執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師, 主要從事實驗動物管理。E-mail: door20@126.com

楊 威(1978-), 男, 客座教授, 研究方向: 新藥藥理毒理。E-mail: yangwei0719@163.com