孔雀石綠單克隆抗體制備和酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的建立

王宇 楊金易 徐振林 戚平 沈玉棟

摘 要 針對(duì)孔雀石綠三苯環(huán)特征結(jié)構(gòu)，設(shè)計(jì)合成1種高質(zhì)量半抗原。通過(guò)偶聯(lián)載體蛋白、動(dòng)物免疫和細(xì)胞融合， 制備出一株高質(zhì)量的單克隆抗體MGDA4C7，亞類為IgG1，輕鏈為κ型。 通過(guò)對(duì)包被原濃度、抗體濃度、二抗?jié)舛鹊膬?yōu)化，建立了孔雀石綠間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法。方法半抑制濃度（IC50）為0.96 μg/L，線性檢測(cè)范圍（IC20～C80）為0.1～8.1 μg/L，LOD（IC10）為0.05 μg/L，回歸方程y=

Symbolm@@ 0.3274lgx+0.4698（R2=0.9891）。 本方法特異性高，與代謝物隱孔雀石綠交叉反應(yīng)小于0.1%，與結(jié)晶紫、燦爛綠交叉反應(yīng)率分別為18.1%和26.5%； 實(shí)際樣品添加回收率為87.3%～107.3%。 本方法測(cè)定結(jié)果經(jīng)HPLCMS/MS方法確證，二者相關(guān)系數(shù)達(dá)0.999。本方法可用于魚(yú)類等水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留的實(shí)際檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 孔雀石綠； 半抗原； 單克隆抗體； 抗原識(shí)別； 酶聯(lián)免疫分析