朱巖

哈藥集團(tuán)三精兒童制藥廠 黑龍江省哈爾濱市

小兒咳喘靈顆粒中金銀花的質(zhì)量研究

朱巖

哈藥集團(tuán)三精兒童制藥廠 黑龍江省哈爾濱市

目的：對(duì)不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的小兒咳喘靈顆粒中所含有的金銀花質(zhì)量進(jìn)行檢驗(yàn)。方法：在對(duì)金銀花進(jìn)行定性鑒定的過(guò)程中，主要采用的是薄層色譜法，在對(duì)金銀花的綠原酸含量進(jìn)行檢驗(yàn)的過(guò)程中，主要采用HPLC法進(jìn)行檢定，對(duì)于灰氈毛忍冬皂苷乙進(jìn)行含有量檢定的過(guò)程中，采用的方法是HPLC-ELSD法。結(jié)果：本文主要選擇了26個(gè)藥廠生產(chǎn)的小兒咳喘靈顆粒，在這26個(gè)批次的產(chǎn)品中，主要有12個(gè)批次的產(chǎn)品中含有灰氈毛忍冬皂苷乙，由此可以推斷原料中有金銀花的存在。結(jié)論：通過(guò)對(duì)小兒咳喘靈顆粒進(jìn)行檢測(cè)可以發(fā)現(xiàn)有綠原酸以及灰氈毛忍冬皂苷乙的存在，能夠有效的幫助對(duì)金銀花進(jìn)行質(zhì)量控制。

小兒咳喘靈顆粒；金銀花；綠原酸；灰氈毛忍冬皂苷乙

在小兒咳喘靈顆粒中，主要的原料有金銀花、麻黃以及甘草等七味藥材，主要的作用是止咳，能夠治療肺炎以及支氣管炎等，其最主要的特點(diǎn)就是副作用小，并且并沒(méi)有不良反應(yīng)現(xiàn)象的出現(xiàn)，在當(dāng)前的生產(chǎn)企業(yè)中，大約有一百多家的企業(yè)生產(chǎn)小兒咳喘靈顆粒，但是在質(zhì)量檢測(cè)方面卻存在一定的難度，不能有效的對(duì)質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，并且在不同的檢測(cè)項(xiàng)目上具有不同的標(biāo)準(zhǔn)，通常情況下金銀花具有抗菌作用，其抗菌成分為綠原酸以及異綠原酸，而判定金銀花質(zhì)量主要是以綠原酸為基礎(chǔ)的，因此本文重點(diǎn)對(duì)金銀花質(zhì)量進(jìn)行檢定，希望能夠促進(jìn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步提高。

1、儀器與試藥

1.1 儀器

MettlerXS105DU電子天平；Waterse2695高效液相色譜儀，包括XbridgeC18色譜柱、Waters2489紫外檢測(cè)器；Agilen1200高效液相色譜儀，包括KromasilC18色譜柱、Varian380-LC蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。

1.2 試藥

選取適量的金銀花以及綠原酸為對(duì)照品，純度為92.8%的灰氈毛忍冬皂苷乙為對(duì)照品，對(duì)其含有量進(jìn)行檢測(cè)，色譜純?yōu)榧状寂c乙腈，分析純?yōu)橐宜岫□?、醋酸、甲酸、磷酸。水為超純水。小兒咳喘靈顆粒共26批樣品，均為山東省17地市市售品種，來(lái)自26個(gè)不同生產(chǎn)企業(yè)。

2、方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

26批樣品各取2g，研細(xì)，加甲醇20mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液濃縮至5mL，作為供試品溶液。另取金銀花對(duì)照藥材0.2g，加甲醇5mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液作為對(duì)照藥材溶液。再取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μL、對(duì)照品溶液10μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上層溶液為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。

2.2 綠原酸成分測(cè)定

C18色譜柱(250mm×4.6mm×5μm)；流動(dòng)相為乙腈-水溶液(用磷酸調(diào)pH至3.0，15∶85)；體積流量1.0mL/min；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)327nm；進(jìn)樣量20μL。

對(duì)照品溶液的制備。精密稱取綠原酸對(duì)照品9.92mg(純度96.6%)，置100mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，制成每1mL含95.83 μg的貯備液(10℃以下保存)。供試品溶液的制備。取本品適量，研細(xì)，精密稱取約1g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率300W、頻率40kHz)30min，放冷，再稱定質(zhì)量，50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1mL，置10mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

線性關(guān)系與檢出限。精密量取綠原酸對(duì)照品貯備液1mL，置25mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1.0、5.0、10.0、20.0、50.0μL，在色譜條件下依次進(jìn)樣。以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=2898949X－6996，r=1.0000，線性范圍為0.0038～0.1917μg。按信噪比3∶1計(jì)，檢出限為1.86ng。

精密度試驗(yàn)。精密吸取同一對(duì)照品溶液10μL，在色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。計(jì)算RSD為0.87%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批次樣品 6份，制備供試品溶液，在色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)定綠原酸峰面積。結(jié)果RSD值為2.1%。

穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一供試品溶液，分別在制備后 0、2、4、8、12、24h進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果綠原酸峰面積的RSD值為0.92%，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收率試驗(yàn)。精密稱取含有量已知的樣品0.5g共6份，分別加入相同量的質(zhì)量濃度為0.2124mg/mL的對(duì)照品溶液。制備供試品溶液，在色譜條件下進(jìn)樣，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

樣品測(cè)定。取26批小兒咳喘靈顆粒樣品，精密稱定制備供試品溶液，在色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 小兒咳喘靈顆粒含有量測(cè)定(n=6)

2.3 灰氈毛忍冬皂苷乙成分測(cè)定

色譜條件AgilentC18色譜柱(250mm×4.6mm×5μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.4%醋酸溶液，梯度洗脫(0～10min，11.5%～15%乙腈；10～12min，15%～29%乙腈；12～18min，29%～33%乙腈；18～30min，33%～45%乙腈)；載氣體積流量1.6mL/min；柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)；霧化器溫度35℃；蒸發(fā)器40℃。

溶液的制備。對(duì)照品溶液的制備。取灰氈毛忍冬皂苷乙對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1mL含灰氈毛忍冬皂苷乙0.6mg的溶液。供試品溶液的制備。精密稱取本品粉末(過(guò)四號(hào)篩)約0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率 300W，頻率 40kHz)40min，放冷，再稱定質(zhì)量，50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。樣品測(cè)定。取26批小兒咳喘靈顆粒樣品，精密稱定，制備供試品溶液，在色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。

3、討論

本文采用的檢測(cè)方法為薄層色譜方法，這種方法能夠有效的對(duì)小兒咳喘靈顆粒中所含有的金銀花質(zhì)量進(jìn)行檢驗(yàn)，在26個(gè)批次的樣品檢驗(yàn)過(guò)程中，其中有23個(gè)批次出現(xiàn)主斑點(diǎn)，有4個(gè)批次的主斑點(diǎn)并不十分明顯。由此可見(jiàn)，這四個(gè)生產(chǎn)廠家在金銀花的投料方面存在一定的問(wèn)題。山銀花中也含有綠原酸，這與金銀花的構(gòu)成是相似的，所以在22個(gè)批次的樣品中都檢驗(yàn)出含有綠原酸的存在，這就無(wú)法有效的分辨到底是山銀花還是金銀花，所以薄層色譜法具有一定的局限性。在此基礎(chǔ)上，又對(duì)乙酸乙酯、丙酮以及甲酸、水之間的比例進(jìn)行判斷，以此作為展開(kāi)劑，并且采用含有1%的三氯化鐵溶液以及1%的鐵氰化鉀溶液進(jìn)行混合使用，將其當(dāng)作顯色劑，這樣的實(shí)驗(yàn)方法更加便捷，采用這種方法以后能夠更加清楚的顯現(xiàn)出綠原酸斑點(diǎn)。

在對(duì)小兒咳喘靈顆粒的26個(gè)批次產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)的過(guò)程中，采用HPLC的方法對(duì)金銀花中的綠原酸含量進(jìn)行考察，綠原酸自身具有不穩(wěn)定的特點(diǎn)，并且見(jiàn)到光以后就十分容易分解，所以在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該對(duì)瓶子的顏色進(jìn)行區(qū)分，以棕色瓶為宜，并且需要在避光的環(huán)境下進(jìn)行操作，在對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行確定的過(guò)程中，不同的企業(yè)具有較大的差異，因此可以推斷藥材具有較大的質(zhì)量差異，而且有些企業(yè)在金銀花投料的過(guò)程中也沒(méi)有按照規(guī)定進(jìn)行，所得出的結(jié)果與金銀花薄層色譜得到的結(jié)果是相一致的。

在當(dāng)前對(duì)小兒咳喘靈顆粒進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)的過(guò)程中具有不同的標(biāo)準(zhǔn)，但是很多企業(yè)具有較低的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，所以時(shí)無(wú)法對(duì)藥物質(zhì)量進(jìn)行有效控制的。當(dāng)前國(guó)家藥監(jiān)局在試行標(biāo)準(zhǔn)中也是不盡相同的，在項(xiàng)目檢查以及限度方面也具有一定的差異性，所以對(duì)小兒咳喘靈顆粒的質(zhì)量是無(wú)法得到有效控制的。在檢驗(yàn)的過(guò)程中，應(yīng)該對(duì)金銀花以及山銀花進(jìn)行合理的區(qū)分，因?yàn)槠鋪?lái)源以及成分都是不相同的，但是在實(shí)際應(yīng)用的過(guò)程中還存在一定的差異性，所以只有促進(jìn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平的提高，才能保證小兒咳喘靈顆粒更加安全。

[1]倪友香,趙伏梅.小兒咳喘靈顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］.醫(yī)學(xué)信息，2014，27(3):133-134.

[2]洪美華，卓小萍，何世柯，等.小兒咳喘靈顆粒中鹽酸麻黃堿含量測(cè)定的2種HPLC法比較［J］.中國(guó)藥房，2008.

R246.4

A

1672-5018（2016）12-029-02