虎　婕，山　曦，張偉宏

(1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院老年病科，河南 鄭州 450052；2.鄭州大學(xué)護(hù)理學(xué)院，河南 鄭州 450052)

?

MicroRNA-181在食管癌組織中的表達(dá)

虎婕1，山曦1，張偉宏2

(1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院老年病科，河南 鄭州 450052；2.鄭州大學(xué)護(hù)理學(xué)院，河南 鄭州 450052)

[摘要]目的探討microRNA-181(miR-181)在食管癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)及其與食管癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法RT-PCR檢測56對食管鱗癌、癌旁正常組織及食管癌細(xì)胞系KYSE450、EC109中miR-181的表達(dá)，并分析其表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)及生存的關(guān)系。結(jié)果與癌旁正常組織比較，食管鱗癌組織中miR-181表達(dá)明顯升高(P<0.05)，食管鱗癌細(xì)胞系KYSE450、EC109中miR-181表達(dá)水平與正常永生化食管上皮細(xì)胞Het-1a中表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。食管鱗癌組織中miR-181的表達(dá)量與患者的腫瘤大小、分化程度及轉(zhuǎn)移情況有關(guān)。結(jié)論miR-181在食管癌組織及食管癌細(xì)胞系中高表達(dá)，并與腫瘤大小、分化程度及轉(zhuǎn)移情況相關(guān)，提示miR-181能夠作為食管癌治療的新靶點(diǎn)。

[關(guān)鍵詞]miR-181；食管鱗癌；轉(zhuǎn)移

食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，在世界范圍內(nèi)腫瘤發(fā)病率位居第8位，腫瘤相關(guān)致死率則位居第6位[1]。我國食管鱗癌約占到食管癌總數(shù)的90%，盡管越來越多的技術(shù)被用于食管癌的診斷和治療，但其5 a生存率仍然不能讓人滿意，約為15%～25%[2]。因此，研究食管癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制并尋找新的治療靶點(diǎn)，將對提高食管癌的療效具有重要的臨床意義。

microRNA(miRNA)是一類長度約18～25個核苷酸的非編碼RNA，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因的表達(dá)。miRNA通過與靶mRNA的3’-UTR區(qū)結(jié)合，導(dǎo)致靶mRNA降解或翻譯抑制，下調(diào)靶蛋白的表達(dá)，從而達(dá)到調(diào)控靶基因表達(dá)的目的。miRNA可以通過抑制腫瘤特定靶基因的表達(dá)來作為癌基因或抑癌基因。大量研究[3]表明，miRNA可以作為一種新型的標(biāo)志物來評估腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和對治療的反應(yīng)。研究者發(fā)現(xiàn)mir-181在結(jié)腸癌組織和耐藥乳腺癌小鼠模型中高表達(dá)并與其轉(zhuǎn)移及耐藥相關(guān)，但尚無其在食管癌中的研究，因此該研究探討了食管癌組織及食管癌細(xì)胞系中miR-181的表達(dá)情況及miR-181與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。

1材料與方法

1.1實(shí)驗材料

1.1.1標(biāo)本收集2012年3月至2014年5月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院胸外科手術(shù)切除的新鮮食管鱗癌標(biāo)本及相對應(yīng)的癌旁組織56對，腫瘤組織均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。標(biāo)本采集后，采用液氮凍存，然后于-80 ℃儲存以備提取組織總RNA。

1.1.2細(xì)胞人食管上皮細(xì)胞系Het-1a和人食管鱗癌細(xì)胞系KYSE450、EC109均購于上海細(xì)胞庫。

1.1.3主要試劑DMEM/HIGH GLUCOSE培養(yǎng)基購自美國HyClone公司；胎牛血清購自美國Gibco公司；RNAiso plus、cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及SYBR Premix Ex TaqTM II購自日本Takara公司；miR-181 mimics和inhibitor由上海吉瑪設(shè)計；RT-PCR引物由上海生工合成。

1.2細(xì)胞培養(yǎng)Het-1a、KYSE450、EC109均為貼壁細(xì)胞，培養(yǎng)于含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清、100 u·mL-1青霉素和100 u·mL-1鏈霉素的DMEM/HIGH GLUCOSE完全培養(yǎng)基中，在37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3RT-PCRTRIzol法提取Het-1a及食管癌細(xì)胞和食管癌及癌旁正常食管組織中總RNA，檢測RNA的純度及濃度。結(jié)果顯示OD260/OD280比值在1.80～2.0之間，符合實(shí)驗要求。按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書合成cDNA，按SYBR Green試劑說明書用實(shí)時熒光定量PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。

2結(jié)果

2.1miR-181在食管鱗癌組織及食管癌細(xì)胞系中的表達(dá)食管癌組織、癌旁正常食管組織中miR-181的相對表達(dá)量分別為2.951 0±0.608 9、0.285 3±0.098 4，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.322，P<0.05)。食管鱗癌細(xì)胞系KYSE450和EC109中miR-181的相對表達(dá)量分別為Het-1a的2.21倍和2.71倍，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。見圖1、2。

圖1　miR-181在食管鱗癌及相應(yīng)癌旁正常食管組織中的表達(dá)

圖2　miR-181在不同食管鱗癌細(xì)胞系中的表達(dá)

2.2miR-181的表達(dá)與食管鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系食管鱗癌組織中miR-181的表達(dá)量與患者的腫瘤大小、分化程度及轉(zhuǎn)移情況有關(guān)。見表1。

3討論

腫瘤與miRNAs相關(guān)的研究正在受到越來越多的重視，研究者發(fā)現(xiàn)miRNAs在多種腫瘤的致癌和抑癌中發(fā)揮著重要的作用。miRNAs能夠參與腫瘤的進(jìn)展，并影響其預(yù)后。例如，上調(diào)miR-143可以降低口腔鱗癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力，增加其凋亡率。低表達(dá)的miR-143與口腔鱗癌較差的預(yù)后密切相關(guān)[4]。miR-153能夠通過靶向SNAI1來抑制細(xì)胞的侵襲和遷移，并且能用來預(yù)測胰腺導(dǎo)管腺癌患者的預(yù)后[5]。對于食管鱗癌來說，許多miRNAs被證明可以作為新型的預(yù)測標(biāo)志物，例如miR-382、miR-1294的低表達(dá)和miR-142-3p、miR-503的高表達(dá)與食管鱗癌差的預(yù)后相關(guān)[6-7]。我們的研究證明，與癌旁正常食管組織比較，miR-181在食管鱗癌組織中高表達(dá)，并且食管鱗癌細(xì)胞系與正常食管上皮細(xì)胞系相比，也顯示出了相同的趨勢。在食管鱗癌中miR-181與患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析中發(fā)現(xiàn)，其表達(dá)與腫瘤大小、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),而與性別、年齡無相關(guān)性。這就證明了miR-181可能在食管癌的發(fā)生、發(fā)展及臨床預(yù)后方面發(fā)揮著重要的作用，能夠為食管癌的診斷提供新型的標(biāo)志物。

表1miR-181的表達(dá)與食管鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

臨床病理參數(shù)nmiR-181高表達(dá)低表達(dá)P性別 男3220120.578 女24177年齡/歲 <60211290.565 ≥60352311腫瘤直徑/cm <52914150.029 ≥527216分化程度 高分化211110 中分化171250.005 低分化18162轉(zhuǎn)移 有211830.041 無352115

miR-181最早發(fā)現(xiàn)是在神經(jīng)元細(xì)胞中高表達(dá)，后來在肌肉和造血系統(tǒng)中也被發(fā)現(xiàn)表達(dá)升高[8]。而miR-181在肝臟干細(xì)胞和在B淋巴細(xì)胞存在預(yù)示著其在調(diào)節(jié)分化狀態(tài)方面發(fā)揮著重要的作用[9]。有研究[10-11]發(fā)現(xiàn)miR-181在多種腫瘤中高表達(dá)，包括慢性淋巴細(xì)胞白血病和乳腺癌，但是在一些腫瘤中則表現(xiàn)為表達(dá)下調(diào)，例如膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和垂體腺瘤等。Huang等[12]證明了miR-181可以通過靶向Bcl-2來抑制肺癌細(xì)胞增殖侵襲和遷移，從而證明了miR-181在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。Tong等證明了mir-181在前列腺癌中高表達(dá)，可以通過靶向DAX-1來促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的增殖和細(xì)胞周期的進(jìn)程，從而說明了miR-181在前列腺癌中是促癌miRNA[13]。

綜上所述，miR-181在食管鱗癌組織及食管鱗癌細(xì)胞系中高表達(dá)，并且與食管鱗癌患者的臨床病理參數(shù)密切相關(guān)，miR-181可能作為食管癌新型的診斷指標(biāo)和潛在的治療靶點(diǎn)。本課題組下一步的工作是研究mir-181在食管癌中的作用機(jī)制，為其在食管癌治療中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Napier KJ,Scheerer M,Misra S.Esophageal cancer: A Review of epidemiology,pathogenesis,staging workup and treatment modalities[J].World J Gastrointest Oncol,2014,6(5):112-120.

[2]Pennathur A,Farkas A,Krasinskas AM,et al.Esophagectomy for T1 esophageal cancer: outcomes in 100 patients and implications for endoscopic therapy[J].Ann Thorac Surg,2009,87(4):1048-1055.

[3]Reddy KB.MicroRNA (miRNA) in cancer[J].Cancer Cell Int,2015,15:38.

[4]Ni ZY,Lin FO,Liu DF,et al.Decreased microRNA-143 expression and its tumor suppressive function in human oral squamous cell carcinoma[J].Genet Mol Res,2015,14(2):6943-6952.

[5]Bai Z,Sun J,Wang X,et al.MicroRNA-153 is a prognostic marker and inhibits cell migration and invasion by targeting SNAI1 in human pancreatic ductal adenocarcinoma[J].Oncol Rep,2015,34(2):595-602.

[6]Qi B,Lu JG,Yao WJ,et al.Downregulation of microRNA-382 is associated with poor outcome of esophageal squamous cell carcinoma[J].World J Gastroenterol,2015,21(22):6884-6891.

[7]Liu K,Li L,Rusidanmu A,et al.Down-Regulation of MiR-1294 is Related to Dismal Prognosis of Patients with Esophageal Squamous Cell Carcinoma through Elevating C-MYC Expression[J].Cell Physiol Biochem,2015,36(1):100-110.

[8]Dostie J,Mourelatos Z,Yang M,et al.Numerous microRNPs in neuronal cells containing novel microRNAs[J].RNA,2003,9(2):180-186.

[9]Chen CZ,Li L,Lodish HF,et al.MicroRNAs modulate hematopoietic lineage differentiation[J].Science,2004,303(5654):83-86.

[10]Shi L,Cheng Z,Zhang J,et al.hsa-mir-181a and hsa-mir-181b function as tumor suppressors in human glioma cells[J].Brain Res,2008,1236:185-193.

[11]Visone R,Rassenti LZ,Veronese A,et al.Karyotype-specific microRNA signature in chronic lymphocytic leukemia[J].Blood,2009,114(18):3872-3879.

[12]Huang P,Ye B,Yang Y,et al.MicroRNA-181 functions as a tumor suppressor in non-small cell lung cancer (NSCLC) by targeting Bcl-2[J].Tumour Biol,2015,36(5):3381-3387.

[13]Tong S J,Liu J,Wang X,et al.microRNA-181 promotes prostate cancer cell proliferation by regulating DAX-1 expression[J].Exp Ther Med,2014,8(4):1296-1300.

Expression of MicroRNA-181 in the Esophageal Cancer

Hu Jie1,Shan Xi1,Zhang Weihong2

(1.DepartmentofGerontology,theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China;2.TheNursingCollege,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of miR-181 in the esophageal cancer and cell line,and the relationship between miR-181 with the clinical significance of esophageal cancer.MethodsThe expression level of miR-181 was determined by RT-PCR in the 56 human esophageal cancer tissue specimens and matched tumor-adjacent esophageal tissue specimens,and esophageal cancer cell line KYSE450,EC109.The association of miR-181 expression with clinicopathological characteristics in the patients with esophageal cancer was analyzed.ResultsCompared with the tumor-adjacent esophageal specimens,miR-181 was significantly high-regulated in the esophageal cancer tissue specimens (P<0.05).The miR-181 expression was elevated in the esophageal cell line KYSE450,EC109 compared with the Het-1a cell line (P<0.05).In the esophageal cancer tissue,the miR-181 expression was related with tumor size,pathological differentiation and metastasis.ConclusionHighly-expressed miR-181 is observed in the esophageal cancer tissues and cell lines,and it has significant correlation with tumor size,pathological differentiation and metastasis.The miR-181 represents a new potential therapeutic target for esophageal cancer treatment.

[Key words]miR-181; esophageal cancer; metastasis

(收稿日期：2015-12-10)

[中圖分類號]R735.1；R730.23

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]1673-5412(2016)02-0116-03

DOI:10.3969/j.issn.1673-5412.2016.02.007

作者簡介：虎婕(1985-)，女，主管護(hù)師，主要從事臨床護(hù)理研究工作。E-mail：xixibaby0329@126.com通信作者：張偉宏(1974-)，男，博士，副教授，主要從事社區(qū)老年病基礎(chǔ)與臨床護(hù)理研究工作。E-mail：zwhong306@zzu.edu.cn