許燕平　朱金蘭

摘 要 通過(guò)超高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蔬菜中吡蟲(chóng)啉、多菌靈、啶蟲(chóng)脒、嘧霉胺和阿維菌素的殘留量，確定最佳色譜條件。結(jié)果證實(shí)，超高效液相色譜法的準(zhǔn)確度高、耗時(shí)短，特別適用于批量蔬菜樣品的農(nóng)藥多殘留檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 超高效液相色譜法；農(nóng)藥多殘留；蔬菜檢測(cè)

中圖分類(lèi)號(hào)：TS255.7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1673-890X（2016）01--02

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：美國(guó)沃特世Acquity UPLC I-Class超高效液相色譜儀、配帶二極管陣列檢測(cè)器、電化學(xué)工作站等；超純水系、高速勻漿機(jī)、氮吹儀等。

試劑：吡蟲(chóng)啉、多菌靈、啶蟲(chóng)脒、嘧霉胺和阿維菌素等農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，濃度皆為1 000μg/mL；色譜純CH3OH（德國(guó)默克公司）；18.2 MΩ.cm超純水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)液配制

儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確吸取吡蟲(chóng)啉、多菌靈、啶蟲(chóng)脒、嘧霉胺和阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液各1 mL，均加甲醇稀釋至10 mL，制備濃度中等的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18 ℃條件下密封保存。

工作液：取適量?jī)?chǔ)備液，用CH3OH/H2O（體積比為3∶2）作溶劑，分別制取3種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，經(jīng)0.2 μm濾膜過(guò)濾后送入進(jìn)樣瓶，上機(jī)檢測(cè)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。

1.3 樣品處理

提?。簻?zhǔn)確稱(chēng)量25.0 g已備好的樣品，加入250 mL錐形瓶中，再加入50.0 mL CH3CN，高速勻漿處理2 min，經(jīng)過(guò)濾后加入100 mL具塞量筒之中，量筒內(nèi)已提前加入經(jīng)灼燒處理的氯化鈉4 g；用力震蕩1 min，然后靜置30 min，讓乙腈與水徹底分離；于上層乙腈層吸取溶液10 mL，加入150 mL燒杯中，將燒杯放在80 ℃水浴鍋上加熱，杯內(nèi)緩緩?fù)ㄟ^(guò)空氣流，蒸發(fā)近干。加入2.0 mL CH2Cl2/CH3OH（體積比為99∶1），使燒杯瓶?jī)?nèi)殘?jiān)俅稳芙狻?/p>

凈化：以4 mL CH2Cl2/CH3OH試劑對(duì)LC—NH2 SPE小柱進(jìn)行預(yù)淋洗，將流出液用玻璃刻度試管收集起來(lái)，流速以2 mL/min為宜。以2 mL CH2Cl2/CH3OH試劑對(duì)燒杯進(jìn)行洗滌，待SPE小柱中的液面上升至柱床表面后，向其中移入洗滌液，并重復(fù)一次；再將盛有淋洗液的刻度試管置于氮吹儀上，在水浴溫度50 ℃的條件下，氮吹蒸發(fā)至近干，加入1.5 mL CH3OH，然后渦旋處理，加入1 mL水，再次渦旋處理，經(jīng)0.2 μm濾膜過(guò)濾后送入進(jìn)樣瓶，留待上機(jī)檢測(cè)。

1.4 色譜條件設(shè)定

以CH3OH/H2O為流動(dòng)相，流速設(shè)為0.2 mL/min；采用Waters Acquity UPLC BEH C18色譜柱，規(guī)格為2.1 mm×50 mm，1.7 um i.d.；柱溫設(shè)定25℃；二極管陣列檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)為255 nm；進(jìn)樣量5.0 μL。

1.5 線性關(guān)系及檢出限

以CH3OH/H2O（體積比為3∶2）為溶劑制備標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為0.05、0.10、0.25、0.50、1.00 μg/mL，上機(jī)檢測(cè)，作濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出校正曲線，然后按照信噪比S/N=3算出每種農(nóng)藥的檢出限。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

以CH3OH/H2O為流動(dòng)相實(shí)施梯度洗脫時(shí)，5種待測(cè)組分的分離效果明顯，經(jīng)多次試驗(yàn)，得出最佳洗脫梯度，見(jiàn)表1。經(jīng)進(jìn)一步分析比較，用50 nm及100 nm兩種不同規(guī)格的色譜柱進(jìn)行洗脫時(shí)，分離效果未出現(xiàn)明顯差異，但100 nm色譜柱的耗時(shí)更長(zhǎng)，且柱壓接近50 nm色譜柱的2倍，從省時(shí)、系統(tǒng)安全等角度考慮，決定選用50 nm色譜柱。在上述優(yōu)化的基礎(chǔ)上，分別得到標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖以及豇豆、西紅柿的加標(biāo)色譜圖。

在CH3OH/H2O流動(dòng)相中，甲醇與水的比例隨時(shí)間而變化。為消除進(jìn)樣時(shí)的溶劑效應(yīng)影響，防止色譜峰發(fā)生漂移、變形等問(wèn)題，必須確定甲醇與水的合理比例。經(jīng)多次嘗試，最終確定標(biāo)準(zhǔn)工作液中甲醇∶水的比例為3∶2時(shí)，待測(cè)組分的保留時(shí)間相對(duì)穩(wěn)定，所得色譜峰的形狀尖銳而對(duì)稱(chēng)；而采用純甲醇或8∶2等比例時(shí)，出現(xiàn)保留時(shí)間漂移、譜帶展寬等問(wèn)題，其中采用純甲醇時(shí)該問(wèn)題尤其明顯。

2.2 線性關(guān)系及檢出限

相關(guān)性超過(guò)0.999，反映線性關(guān)系良好；檢出范圍為0.01～0.06 mg/kg。

根據(jù)國(guó)家有關(guān)規(guī)定，吡蟲(chóng)啉、多菌靈、啶蟲(chóng)脒、嘧霉胺和阿維菌素5種農(nóng)藥在豇豆、西紅柿等蔬菜中的殘留限量依次為，1、0.5、1、2、0.05 mg/kg，本試驗(yàn)方法能夠滿(mǎn)足上述幾種農(nóng)藥的檢測(cè)需求。

2.3 實(shí)際樣品分析

抽樣調(diào)取一批蔬菜樣品，包括白菜、辣椒和菜花等，通過(guò)本方法予以檢測(cè)，5種農(nóng)藥均有檢出，說(shuō)明此類(lèi)農(nóng)藥在我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的使用較為廣泛。盡管檢測(cè)結(jié)果并未超出國(guó)家規(guī)定的殘留上限，但仍然要強(qiáng)化監(jiān)管，避免因農(nóng)藥殘留超標(biāo)而引發(fā)食品安全事故[1]。

3 結(jié)論與討論

根據(jù)5種農(nóng)藥的回收率、變異系數(shù)及檢出限結(jié)果可知，該檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度及精密度均比較高，且操作容易、檢測(cè)迅速、易于推廣，能夠滿(mǎn)足當(dāng)前社會(huì)對(duì)蔬菜農(nóng)藥多殘留的檢測(cè)需求。

參考文獻(xiàn)

[1]李彤.高效液相色譜和超高效液相色譜儀器的一些最新發(fā)展[J].色譜，2015（10）.

（責(zé)任編輯：劉昀）