●周小麗 趙媛 關(guān)圓圓

地黃飲子腦脊液藥物化學(xué)研究

●周小麗 趙媛 關(guān)圓圓

目的：研究地黃飲子腦脊液藥物化學(xué)特性。方法：應(yīng)用UPLC-MS分析地黃飲子用藥后血清樣品情況，對(duì)比不同樣品結(jié)果，將血中移行成分、代謝產(chǎn)物與生藥來(lái)源確定下來(lái)。結(jié)果：經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)家兔血清中有9個(gè)血中移行成分，有1個(gè)產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，2個(gè)為黃飲子的原型成分，遠(yuǎn)志、五味子藥物貢獻(xiàn)最大，其次為山茱萸、肉芙蓉、附子、麥冬、石菖蒲。結(jié)論：深入研究地黃飲子血中移行成分與代謝情況，為藥物正確使用提供了依據(jù)，有助于進(jìn)一步分析藥物有效成分與作用。

地黃飲子；腦脊液；藥物化學(xué)

傳統(tǒng)藥物化學(xué)方法是中藥血清藥物化學(xué)的基礎(chǔ)，使用現(xiàn)代科技，可以有效對(duì)口服中藥后血清成分進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)藥效相關(guān)性進(jìn)行研究，是一門研究中藥藥效的科學(xué)。地黃飲子最早出現(xiàn)在《黃帝素問(wèn)宣明論方》記載中，用于痰濁上乏、元虛衰的治療。當(dāng)前，地黃飲子已被當(dāng)成一種中藥使用，從黃飲子成分著手，分析其中藥血清藥物化學(xué)，明確代謝產(chǎn)物，可將藥效物質(zhì)基礎(chǔ)確定下來(lái)，為臨床應(yīng)用提供指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 應(yīng)用儀器

儀器：應(yīng)用超高效液相色譜儀、三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀、UPLC-MS聯(lián)用系統(tǒng)，應(yīng)用XR-ODSII（3.0mm×65mm）色普柱（SHIMADZU），高速冷凍離心機(jī)（TGL-15G-C），H56MC型超聲震蕩儀；SK-I快速混合器[1]。藥材與試劑：所有藥材有熟地黃、山茱萸、五味子、石斛、肉桂、大棗、生姜、石菖蒲、薄荷等；甲酸胺與五味子醇甲適量。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為家養(yǎng)白兔，體重1.7～3.2kg。

1.2 方法

（1）制備地黃飲子與單味藥材取黃飲子8味藥材，每個(gè)藥材10g，各藥材充分混合然后研磨成粉末，將研磨好的混合粉末放到烤箱中，烘烤片刻，使藥物保持恒重，取2g粉末與單味藥材粉末50g，放置在12mL的稱量瓶?jī)?nèi)，滴入適量甲醇溶液，讓甲醇充分浸泡30min，然后超聲20min，分離出清液，保持2000r·min-1離心頻率，12min后調(diào)整為0.55um濾膜，選取濾出液作為標(biāo)本溶液。

（2）制備五味子甲醇對(duì)照溶液稱重10mg的五味子，將其放置在40mL的稱量瓶?jī)?nèi)，添加適當(dāng)?shù)募状既芤?，充分搖晃量瓶，使溶液混合稀釋[2]，得到對(duì)照溶液。

（3）制備血清樣品。稱取15g的黃飲子組方藥材，混合后滴入1200mL的乙醇試劑，充分對(duì)藥液進(jìn)行浸泡，第二天對(duì)藥液進(jìn)行超聲離心20min，過(guò)濾藥液時(shí)應(yīng)用3層紗布，對(duì)濃縮后的藥液添加蒸餾水再次稀釋，稀釋出200mL藥液作為復(fù)方灌胃藥液。取單味藥各10g，混合后添加乙醇溶液100mL，超聲離心20min[3]，后使用紗布過(guò)濾，添加蒸餾水稀釋出200mL，將此部分溶液作為單味藥灌胃藥液。

1.3 樣本分析

取以上樣品，在相同環(huán)境下應(yīng)用UPLC-MS分析并確定血中移行成分與來(lái)源。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)地黃飲子血中移行成分進(jìn)行認(rèn)定

對(duì)比地黃飲子復(fù)方血清樣品與空白血清樣品，繪制色譜圖，對(duì)不同色譜段保留時(shí)間與分子峰數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)黃飲子復(fù)方血清樣品中存在9個(gè)移動(dòng)成分，其保留時(shí)間為6.12min，有510個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量的成分；保留時(shí)間為5.06min，其中有154個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量成分；保留時(shí)間6.02min，相對(duì)分子質(zhì)量為215的成分[4]。圖1為某段UPLC-MS分析提取離子色譜。

圖1 地黃飲子復(fù)方給藥血清與空白血清樣品UPLC-MS分析提取離子色譜

2.2 地黃飲子血中移行成分來(lái)源

通過(guò)對(duì)比復(fù)方樣本與單味藥材樣本、血清樣本，可以對(duì)地黃飲子血中移行成分生藥來(lái)源與歸屬進(jìn)行辨別與確認(rèn)。經(jīng)過(guò)五味子樣品、血清本品、無(wú)味子醇甲與對(duì)照樣品的對(duì)比，6號(hào)五味子醇甲保留時(shí)間無(wú)差異，在相對(duì)分子質(zhì)量上兩者相同，可以確定生藥來(lái)源于五味子醇甲（詳見圖2）。剩余地黃飲子血中移行成分歸屬與6號(hào)存在相似性。其中，1號(hào)成分進(jìn)入血液以后，產(chǎn)生了代謝產(chǎn)物，而2號(hào)成分進(jìn)入血液中的成為為石菖蒲；3號(hào)成分為遠(yuǎn)志；4號(hào)成為與5號(hào)成分分別來(lái)源于麥冬與遠(yuǎn)志與附子；7、8號(hào)成分來(lái)源于巴戟天與山茱萸[5]；9號(hào)成為來(lái)源于肉蓯蓉。從以上來(lái)源藥物上看，五味子與遠(yuǎn)志成分貢獻(xiàn)最大。

圖2 五味子醇甲、體外樣本、血清樣本、地黃飲子復(fù)方給藥血清與空白血清樣品UPLC-MS分析提取離子色譜

3 討論

本次研究對(duì)黃飲子的血清藥物化學(xué)成分與作用機(jī)制進(jìn)行了闡明，分析了地黃飲子血中移行成分，發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志與五味子是最重要的兩個(gè)來(lái)源藥材。地黃飲子最早出自《黃帝內(nèi)經(jīng)》的相關(guān)描述中，功效較多，以滋腎陰、開竅化痰、補(bǔ)腎陽(yáng)為主可以有效治療冠心病、腦血栓等心腦血管疾?。粚?duì)中風(fēng)、神經(jīng)性皮炎以及腦血管意外有顯著預(yù)防與治療作用；五味子在生津、收汗以及澀精等方面有著顯著效果，可有效改善中樞神經(jīng)功能，預(yù)防心血管疾病，抗血栓的功效也非常顯著，在抗鎮(zhèn)靜、催眠上功效已達(dá)到認(rèn)可；藥物成分中，遠(yuǎn)志的安神補(bǔ)腦與開竅化痰的效果顯著，相關(guān)報(bào)道還顯示消腫功效與遠(yuǎn)志成分有關(guān)。而對(duì)神經(jīng)的作用則體現(xiàn)在體力、智力提升，鎮(zhèn)靜、抗驚厥、抗癡呆上。本次研究顯示，地黃飲子中五味子與遠(yuǎn)志發(fā)揮了重要功效，也是地黃飲子藥效顯著的重要原因。本次研究證實(shí)了這一結(jié)論，可以確定五味子與遠(yuǎn)志是治療心腦血管疾病的有效藥物、這一結(jié)果為藥效判定提供了更為科學(xué)依據(jù)，為其他相關(guān)研究提供了更為可靠支持。

綜上所述，經(jīng)過(guò)以上臨床研究表明，地黃飲子在治療心腦血管疾病與老年癡呆上作用顯著，可有效改善中樞神經(jīng)功能，減少產(chǎn)生退行性疾病，減少認(rèn)知障礙。

（作者單位：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院三全學(xué)院）