回顧性分析抗核抗體單一熒光核型與抗核抗體譜分型的關(guān)系

黃琳淋，張松照

(1.重慶市涪陵中心醫(yī)院檢驗(yàn)科　408000；2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，杭州 310009)

?

回顧性分析抗核抗體單一熒光核型與抗核抗體譜分型的關(guān)系

黃琳淋1，張松照2

(1.重慶市涪陵中心醫(yī)院檢驗(yàn)科408000；2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，杭州 310009)

摘要:目的分析抗核抗體(ANA)單一熒光模型陽性的樣本免疫印跡法檢測(cè)的結(jié)果，探討兩者的相關(guān)性，并研究是否能通過熒光模型初步判斷其特異性抗體。方法回顧性分析347例ANA單一熒光模型陽性標(biāo)本，對(duì)比間接免疫熒光法和免疫印跡法檢測(cè)的符合率。結(jié)果347例間接熒光法ANA陽性標(biāo)本，其中自身免疫性疾病標(biāo)本137例，非自身免疫性疾病標(biāo)本210例，免疫印跡法檢測(cè)ANA陽性例數(shù)分別為100、60例，符合率分別為73.0%、28.6%。核型主要以核顆粒型為主，多出現(xiàn)抗SSA、抗SSB、抗Ro52抗體，高爾基體型、肌動(dòng)蛋白型核型等核型少見。僅有3例標(biāo)本的核仁型在分型中出現(xiàn)條帶。著絲點(diǎn)型多會(huì)出現(xiàn)抗著絲點(diǎn)抗體，特異性高。結(jié)論在自身免疫性疾病患者中，間接免疫熒光法和免疫印跡法兩者具有較高的相關(guān)性，但因其具有各自的局限性，應(yīng)將兩者結(jié)合起來，報(bào)告熒光核型。

關(guān)鍵詞:抗核抗體；間接免疫熒光法；免疫印跡法；核型

由于機(jī)體免疫功能異常，常出現(xiàn)針對(duì)自身細(xì)胞內(nèi)各種成分的自身抗體，這類抗體總稱為抗核抗體(ANA)，而自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑浪狼瘡、混合型結(jié)締組織病等，常常能檢測(cè)出與疾病相關(guān)的自身抗體。這些自身抗體在鑒別診斷自身免疫性疾病上具有十分重要的意義。臨床常用間接免疫熒光法(IIF)作為檢測(cè)ANA的篩查方法，針對(duì)細(xì)胞成分的總抗體，檢測(cè)靈敏度高，但特異性較低；同時(shí)用免疫印跡法對(duì)自身可溶性抗原分型，具有較高特異度。本文主要分析IIF與免疫印記法在ANA檢測(cè)中的相關(guān)性，探討兩種方法在疾病診斷中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料回顧性分析來自浙江省浙江大學(xué)附屬第二醫(yī)院就診患者，IIF檢測(cè)ANA為陽性(滴度≥1∶100)，單一熒光模型的樣本347例。

1.2方法IIF檢測(cè)采用歐蒙抗核抗體IgG試劑盒，以Hep-2細(xì)胞和猴肝為抗原基質(zhì)，血清稀釋度為1∶100、1∶320、1∶1 000，以滴度≥1∶100為陽性；免疫印跡法檢測(cè)采用抗核抗體歐蒙印跡法試劑盒，抗原包括：抗nRP/Sm、抗Sm、抗SSA、抗Ro52、抗SSB、抗Scl-70、抗PM-Scl、抗Jo-1、抗CNEP B、抗PCNA、抗核小體、抗組蛋白、抗核糖體P蛋白、抗AMA M2、抗dsDNA抗體。儀器采用全自動(dòng)免疫印記儀EUROBlotMasterⅡ、掃描儀、OLYMPUS熒光顯微鏡、EUROLineScan自動(dòng)判別軟件。IIF和免疫印跡法嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行檢測(cè)。

2結(jié)果

2.1347例IIF檢測(cè)ANA陽性的患者中，自身免疫性疾病137例，占39.5%，非自身免疫性疾病210例，占60.5%。

2.2IIF檢測(cè)ANA陽性的137例自身免疫性疾病患者中，免疫印跡法檢測(cè)ANA陽性100例，ANA陰性37例，IIF與免疫印跡法符合率為73.0%，IIF檢測(cè)ANA陽性的210例非自身免疫性疾病患者中，免疫印跡法檢測(cè)ANA陽性60例，符合率為28.6%。

2.3IIF檢測(cè)ANA陽性標(biāo)本各類熒光核型構(gòu)成比，見表1。

2.4自身免疫性疾病ANA熒光核型與分型的比較，見表2。非自身免疫性疾病ANA熒光核型與分型的比較，見表3。

2.5IIF與免疫印記法檢測(cè)同時(shí)為ANA陽性時(shí)，ANA熒光模型與分型檢測(cè)結(jié)果比較，見表4。

表1　　IIF檢測(cè)ANA陽性標(biāo)本中各類熒光核型的分布(n)

表2　　自身免疫性疾病ANA熒光核型與分型的比較(n)

表3　　非自身免疫性疾病ANA熒光核型與分型的比較(n)

表4　　ANA熒光核型與分型條帶的比較(n)

3討論

ANA是一組以真核細(xì)胞核成分為靶抗原的自身抗體的總稱，無器官特異性和種屬特異性[1]。目前臨床上檢測(cè)ANA最常用的方法有IIF、免疫印跡法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等，其中IIF是檢測(cè)ANA的篩查方法，也被認(rèn)為是“金標(biāo)準(zhǔn)”，其基質(zhì)含有完整的細(xì)胞成分抗原譜，如細(xì)胞核抗原、細(xì)胞質(zhì)抗原、細(xì)胞骨架抗原等，能夠針對(duì)細(xì)胞中抗原出現(xiàn)特異性的熒光核型，靈敏度很高，已在實(shí)驗(yàn)室被廣泛地使用[2]，但它有自身缺陷，即IIF不能提示具體的靶抗原，特異性低[3-4]。免疫印跡法則在反應(yīng)膜條上包被多種高純化抗原，具有更高的特異性，缺點(diǎn)是抗原種類有限，只能檢測(cè)出有限的抗體。因此，在臨床工作中，常常出現(xiàn)熒光核型與免疫印跡法不相符合的情況[5]。本研究主要針對(duì)于單一熒光核型的樣本，避免混合型核型的中多種抗體的干擾，分析其免疫印跡法的條帶，探討兩者相關(guān)性。

從本研究結(jié)果可見，在IIF檢測(cè)為ANA陽性的標(biāo)本中，有一部分的標(biāo)本為非自身免疫性疾病，如腦梗死、間質(zhì)性肺炎等，但這些標(biāo)本在免疫印跡法中陽性率低，僅為28.6%，這表明非自身免疫性疾病患者雖會(huì)出現(xiàn)熒光滴度，但大部分不會(huì)有免疫分型，有學(xué)者認(rèn)為正常人群，尤其是女性，也可出現(xiàn)ANA陽性[6]。而自身免疫性疾病標(biāo)本中，IIF和免疫印跡法同時(shí)為陽性的標(biāo)本占73.0%，兩者符合率高，但仍會(huì)出現(xiàn)IIF與免疫印記法不相符合的情況，這可能是因?yàn)镮IF覆蓋的自身抗體遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于免疫印跡法所檢測(cè)的抗體。在收集的標(biāo)本中，核顆粒型核型最為常見，以抗SSA、抗SSB、抗Ro52為主，周邊型、高爾基體型和肌動(dòng)蛋白型核型等少見。核仁型核型也較為常見，多出現(xiàn)在非自身免疫性疾病中(n=30)，且僅有2例的核仁型在分型中出現(xiàn)條帶，這可能是由于大多數(shù)核仁型熒光模型出現(xiàn)在非自身免疫性疾病，也有可能存在與核型相關(guān)抗體[7]，如抗核仁低相對(duì)分子質(zhì)量的RNA、抗RNA聚合酶-1、抗U3RNP、抗PM-Scl等抗體之外的未知抗體，可做進(jìn)一步的研究。著絲點(diǎn)型核型特異性高，出現(xiàn)著絲點(diǎn)型核型的樣本都有分型結(jié)果(n=24)，并多會(huì)出現(xiàn)抗著絲點(diǎn)抗體。胞漿型核型以抗線粒體M2抗體最多，有3例。另外，由本文結(jié)果可見，1種熒光核型可以出現(xiàn)多個(gè)條帶，同一條帶可以出現(xiàn)在不同熒光核型中。

綜上所述，IIF可以作為檢測(cè)ANA的篩查方法，但在非自身免疫性疾病患者中也有一定的陽性率；在自身免疫行疾病中，IIF檢測(cè)ANA與免疫印跡法檢測(cè)ENA具有較高的符合率，不同的熒光核型，其抗可溶性抗原抗體不同，如核顆粒型，多與抗SSA、抗Ro52、抗SSB有關(guān)；著絲點(diǎn)型，多與抗著絲點(diǎn)抗體有關(guān)。1種自身抗體可以出現(xiàn)不同的熒光模型，不同的自身抗體也可以出現(xiàn)相同的熒光模型。因此，在臨床工作中，應(yīng)當(dāng)將IIF與免疫印跡法結(jié)合起來，同時(shí)報(bào)告熒光核型。對(duì)于只有熒光核型的病例，需與臨床診斷結(jié)合，避免漏檢和誤診。

參考文獻(xiàn)

[1]李炎梅,莫思健,梁太英,等.抗核抗體熒光模型特異性抗體譜及滴度與自身免疫性疾病的關(guān)聯(lián)性研究[J].中國臨床新醫(yī)學(xué),2014,7(11):1006-1009.

[2]易萍.間接免疫熒光法與印跡法檢測(cè)抗核抗體的相關(guān)性研究[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2015，19(6):981-982.

[3]譚婕.297例自身免疫性疾病ANA和抗ENA抗體聯(lián)合檢測(cè)分析[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2015，36(12):1735-1736.

[4]王蘭蘭．自身抗體檢測(cè)的應(yīng)用與質(zhì)量保障原則[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，28(10)：987-990．

[5]蔡鵬程,胡國云,王雪萍,等.抗核抗體與抗可溶性抗原抗體的相關(guān)性分析[J].臨床血液學(xué)雜志:輸血與檢驗(yàn),2015，28(2):326-328.

[6]曾燕坤,吳杰.抗核抗體、抗核抗體譜及抗雙鏈DNA抗體的聯(lián)合檢測(cè)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷價(jià)值[J].醫(yī)學(xué)臨床研究,2014,31(11):2081-2083.

[7]張道強(qiáng),譚建華,隋秀梅.抗核抗體及特異性抗核抗體譜檢測(cè)在自身免疫性疾病中的意義[J].醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床,2009,20(6):59-61.

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.14.054

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)14-2023-03

(收稿日期：2016-01-16修回日期：2016-03-25)