酸棗仁中酸棗仁皂苷A、B及斯皮諾素的動(dòng)態(tài)研究*

郭　慧，崔瑩瑩，焦夢(mèng)嬌，鄭玉光

(河北中醫(yī)學(xué)院，河北　石家莊　050200)

?

酸棗仁中酸棗仁皂苷A、B及斯皮諾素的動(dòng)態(tài)研究*

郭慧，崔瑩瑩，焦夢(mèng)嬌，鄭玉光

(河北中醫(yī)學(xué)院，河北石家莊050200)

建立了PHLC-UVD測(cè)定酸棗仁中酸棗仁皂苷A、B及斯皮諾素含量的方法。并對(duì)河北省北部地區(qū)和中南部地區(qū)8個(gè)不同采收時(shí)間酸棗仁中酸棗仁皂苷A、B及斯皮諾素的含量進(jìn)行測(cè)定。以期為確定河北產(chǎn)酸棗仁最佳采收期提供一些依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn)，不同采收時(shí)間酸棗仁中有效成分含量差別很大。結(jié)果表明，河北中南部地區(qū)酸棗仁的較佳采收期為9月中旬，北部地區(qū)為10月中旬；河北中南部產(chǎn)酸棗仁質(zhì)量較好。

酸棗仁；采收期；高效液相；酸棗仁皂苷；斯皮諾素

酸棗仁為鼠李科植物酸棗[Ziziphus jujube Mill.Var.spinosa(Bunge)Hu ex H.F.Chou]的干燥成熟種子。具有養(yǎng)心補(bǔ)肝，寧心安神，斂汗，生津的功效，用于驚悸多夢(mèng)，虛煩不眠，體虛多汗，津傷口渴等癥[1],為中醫(yī)首選安神藥。現(xiàn)代藥理研究表明，酸棗仁具有鎮(zhèn)靜催眠[2]、降壓[3]降脂[4]、抗脂質(zhì)過氧化[5]、抗心肌缺血[6]、護(hù)腦[7]、改善記憶障礙[8]等作用。由于酸棗仁自古以來的良好治療效果，以及現(xiàn)在人們生活水平提高對(duì)養(yǎng)生藥物需求的增加，因此市場(chǎng)對(duì)酸棗仁這種藥食同源品的需求量越來越大，關(guān)注度持續(xù)上升。

目前藥材市場(chǎng)的酸棗仁主要來源于野生品種。由于野生酸棗沒有歸屬權(quán)，因此野生酸棗在剛剛結(jié)出果實(shí)的時(shí)候便被當(dāng)?shù)氐拇迕駹?zhēng)相采收，當(dāng)?shù)胤Q之為“搶青”?！皳屒唷钡乃釛椚瘦^為干癟，出仁率低，臨床療效不理想。最終導(dǎo)致藥農(nóng)實(shí)際的經(jīng)濟(jì)收益降低，影響藥農(nóng)來年的采收積極性，這也是近幾年酸棗仁市場(chǎng)價(jià)格大幅波動(dòng)的原因之一。

此外，不同產(chǎn)地的中藥質(zhì)量也有很大差異。由于地形地貌、環(huán)境、海拔高度等因素的影響，也會(huì)影響酸棗仁質(zhì)量的差別。目前尚未建立酸棗仁的GAP基地標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)不同產(chǎn)地的酸棗仁進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，有助于建立酸棗仁藥材的標(biāo)準(zhǔn)化種植及道地藥材的質(zhì)量控制。

由于河北省南北緯度跨度較大，南部和北部地區(qū)節(jié)氣差距較大，因此本課題組對(duì)河北南部和北部產(chǎn)酸棗仁有效成分進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，為確定酸棗仁最佳采收期提供理論依據(jù)。

1　儀器和材料

LC-15C高效液相色譜儀，島津；SPD-15C紫外檢測(cè)器；MSE125P-100-DU分析天平。

乙腈(色譜純)，賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司；水為娃哈哈純凈水；其余試劑為分析純。

酸棗仁皂苷A、B和斯皮諾素對(duì)照品(批號(hào)分別為110734-200611、110814-200607、111869-201203，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所)；酸棗仁供試藥材去核、粉碎機(jī)粉碎，過60目篩。

2　方　法

2.1色譜條件

色譜柱為WondasilTMC18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；乙腈(A)-水(B)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫；斯皮諾素的運(yùn)行時(shí)間30 min，0～10 min，12%A～19%A，10～18 min，19%～20%，18 min～30 min，20%～50%；酸棗仁皂苷A、B的運(yùn)行時(shí)間38 min，0～15 min，20%A～35%A，15～35 min，35%～35%A，35～38 min，35%～70%A；柱溫均為25 ℃；流速均為1 mL·min-1；斯皮諾素的檢測(cè)波長(zhǎng)為335 nm，酸棗仁皂苷A和酸棗仁皂苷B的檢測(cè)波長(zhǎng)為204 nm；進(jìn)樣體積10 μL。

2.2供試品溶液的制備

取酸棗仁樣品約5 g，精密稱定，加石油醚(60～90 ℃)100 mL，超聲1 h，棄去石油醚液，藥渣揮去溶劑，轉(zhuǎn)移至250 mL 圓底燒瓶中，加入70%乙醇100 mL，加熱回流2 h，濾過，濾渣用70%乙醇25 mL洗滌，合并洗液與濾液。揮干溶劑，殘?jiān)铀?0 mL溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇萃取4次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

2.3對(duì)照品溶液的制備

分別取斯皮諾素、酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B適量，精密稱定，加甲醇溶解，定容，搖勻，分別制成對(duì)照品溶液，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液。

2.4系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

取供試品溶液10 μL，進(jìn)行含量測(cè)定，要求斯皮諾素、酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B的理論塔板數(shù)不低于7000，且與其他成分分離良好(見圖1、圖2)。

圖1　斯皮諾素高效液相色譜峰

圖2　酸棗仁皂苷高效液相色譜峰

2.5方法學(xué)考察

2.5.1線性關(guān)系考察

分別取干燥至恒重的斯皮諾素、酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B對(duì)照品1 mg定容于5 mL容量瓶，制備成對(duì)照品溶液。分別精密吸取斯皮諾素、酸棗仁皂苷A和B對(duì)照品溶液2、4、6、8、10、12 μL，在上述色譜條件下進(jìn)行檢測(cè)，以質(zhì)量對(duì)色譜峰面積進(jìn)行線性回歸，回歸方程分別為：Y=2399422X+11110.71，r=0.9998642；Y=53695.73X+10777.25，r=0.9998301；Y=55573.01X-3770.401，r=0.9994806。結(jié)果表明斯皮諾素、酸棗仁皂苷A和酸棗仁皂苷B分別在0.404～2.424 μg、0.468～4.68 μg、0.392～3.92 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.2精密度實(shí)驗(yàn)

取上述對(duì)照品溶液10 μL連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD值分別為0.6826%、0.6610%、2.7769%，表明本法精密度良好。

2.5.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

所測(cè)供試品溶液室溫放置0、3、6、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，斯皮諾素、酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B峰面積的RSD(n=5)值分別為2.1352%、1.1503%、2.3382%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.4重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

根據(jù)外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算同一批次酸棗仁5份樣品的中斯皮諾素、酸棗仁皂苷A和酸棗仁皂苷B的含量，其結(jié)果顯示斯皮諾素、酸棗仁皂苷A和酸棗仁皂苷B含量的RSD(n=5)值分別為0.7031%、1.8010%、2.1478%，表明該樣品制備方法的重復(fù)性較好。

2.5.5加樣回收實(shí)驗(yàn)

精密稱定酸棗仁藥材1 g，共6份，分別加入相同含量的對(duì)照品，測(cè)定斯皮諾、酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B的平均加樣回收率分別為101.42%、100.43%、100.99%；RSD(n=6)值分別為2.0118%、1.3865%、2.6826%，表明該方法具有良好的準(zhǔn)確度。

2.6樣品測(cè)定

分別精密稱定8份酸棗仁樣品粉末，按“2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，取供試品溶液10 μL，進(jìn)行測(cè)定，以外標(biāo)法、兩點(diǎn)法分別計(jì)算8份酸棗仁樣品中斯皮諾素、酸棗仁皂苷A和酸棗仁皂苷B的含量。結(jié)果見表1、表2。

表1　河北中南部產(chǎn)酸棗仁有效成分測(cè)定

表2　河北北部產(chǎn)酸棗仁有效成分測(cè)定

3　討　論

根據(jù)河北省所采8份樣品的測(cè)定結(jié)果分析，不同產(chǎn)地的酸棗仁中所含斯皮諾素、酸棗仁皂苷A和酸棗仁皂苷B的含量存在顯著差異，南部地區(qū)的成分含量高于北部地區(qū)。野生酸棗樹喜陽(yáng)，耐堿、耐寒、耐旱、耐瘠薄，不耐澇，適應(yīng)性強(qiáng)，一般在陡峭的山坡上比較常見，河北地區(qū)有燕山和太行山山地適合其生長(zhǎng)，而南北地區(qū)酸棗仁的質(zhì)量存在差異可能是經(jīng)緯度不同、氣候差異等原因所導(dǎo)致。河北南部地區(qū)，酸棗仁的較佳采收期為9月中旬；河北北部地區(qū)酸棗仁的較佳采收期為10月中旬。長(zhǎng)城是河北省氣溫分布的重要界限，長(zhǎng)城以北地區(qū)年平均氣溫低于10 ℃，長(zhǎng)城以南高于10 ℃，中南部地區(qū)年平均氣溫在12 ℃以上。野生酸棗樹喜陽(yáng)，河北中南部地區(qū)，年平均氣溫較北部地區(qū)高，這可能是影響酸棗仁采收期的因素，有待進(jìn)一步研究。有文獻(xiàn)報(bào)道，土壤和氣候是影響中藥材中次生代謝產(chǎn)物形成和積累的關(guān)鍵環(huán)境因素，而現(xiàn)階段中藥材采收期研究卻常常忽視環(huán)境因素的影響[6],造成酸棗仁的質(zhì)量差異因素的分析，還應(yīng)從多方面考慮。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(1部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010:343.

[2]郭勝民,范曉雯,何建偉,等. 酸棗仁總黃酮的中樞抑制作用[J]. 中藥材. 1998,21(11):578-579.

[3]張典,袁秉祥,孫紅. 酸棗仁總皂苷對(duì)原發(fā)性高血壓大鼠降壓作用[J]. 西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2003,24(1):59-60.

[4]袁秉祥,張慶. 酸棗仁總皂苷對(duì)大鼠血脂和血脂蛋白固醇的影響[J]. 中國(guó)藥理學(xué)報(bào), 1990,6(1):34-36.

[5]萬華印,丁力,孔祥平,等. 酸棗仁總皂苷抗脂質(zhì)過氧化作用[J]. 中草藥, 1996,27(3):103.

[6]陳興堅(jiān),余傳林,劉菊芳. 酸棗仁總皂苷對(duì)培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞的保護(hù)作用[J]. 中國(guó)藥理學(xué)報(bào), 1990,11(2):153.

[7]白曉玲，黃志光，莫志賢,等. 酸棗仁總皂甙對(duì)大鼠腦缺血損害及腦組織生化指標(biāo)的影響[J]. 中國(guó)中藥雜志， 1996,21(2):110-112.

[8]吳尚寐,袁秉祥,馬志義. 酸棗仁油對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響[J]. 中草藥, 2001,32(3):246-247.

Study on the Regulation of Dynamic Accumulation of Jujuboside A,B and Spinosin in Semen Ziziphi Spinosae*

GUOHui,CUIYing-ying,JIAOMeng-jiao,ZHENGYu-guang

(Hebei University of Chinese Medicine, Hebei Shijiazhuang 050200, China)

A HPLC-UVD method for determination of Jujuboside A, B and Spinosin in Semen Ziziphi Spinosae was established. Jujuboside A, B and Spinosin in the 8 different picking times Semen Ziziphi Spinosae from Northern Hebei and Central and Southern Hebei were determined. There were differences in the contents of the effective components in Semen Ziziphi Spinosae at different collecting time. The results showed that the optimal harvest time of Semen Ziziphi Spinosae was mid-September in Central and Southern Hebei, mid-October in Northern Hebei. The quality of Semen Ziziphi Spinosae from Central and Southern Hebei was good.

semen ziziphi spinosae; harvest period; HPLC; Jujuboside; Spinosin

2015年河北省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No: 201514432013)。

郭慧(1994-)，女，學(xué)生，中藥學(xué)專業(yè)。

崔瑩瑩(1980-)，女，講師，主要從事中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

R284.1

A

1001-9677(2016)07-0080-03