高 睿,馬 淼,,趙紅艷(石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,新疆石河子800;石河子大學(xué)甘草研究所,新疆石河子800;新疆師范大學(xué)圖書館,烏魯木齊80054)
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60Co-γ輻射對光果甘草種子耐鹽性影響的研究
高 睿1,馬 淼1,2,趙紅艷3
(1石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,新疆石河子832003;2石河子大學(xué)甘草研究所,新疆石河子832003;3新疆師范大學(xué)圖書館,烏魯木齊830054)
篩選有助于提升光果甘草種子耐鹽性能的最佳輻射劑量,為發(fā)展其在鹽堿荒漠和鹽漬化棄耕地中的人工種植提供重要指導(dǎo)建議。應(yīng)用輻射誘變技術(shù),研究經(jīng)不同劑量的60Co-γ射線輻射處理的光果甘草種子在高鹽脅迫條件下的萌發(fā)特性,比較不同處理下的種子在高濃度Na2SO4脅迫下的萌發(fā)率、累積萌發(fā)率和萌發(fā)指數(shù)。結(jié)果表明:未經(jīng)輻射處理的光果甘草種子的萌發(fā)率與鹽濃度之間呈負(fù)相關(guān),隨著鹽濃度的升高,萌發(fā)率顯著降低,起始萌發(fā)的時間推遲以及達(dá)到最大萌發(fā)率所需的時間延長。但經(jīng) 100 Gy 和300 Gy的60Co-γ輻射處理后的光果甘草種子,不僅在高鹽環(huán)境中的萌發(fā)率極顯著高于零輻射組,而且種子萌發(fā)時間明顯縮短。合適劑量的60Co-γ輻射處理確實能夠有效提高光果甘草種子在Na2SO4脅迫環(huán)境下的萌發(fā)率,在種植時,應(yīng)針對土壤中的Na2SO4濃度選擇相應(yīng)的60Co-γ輻射劑量進(jìn)行處理。
光果甘草;60Co-γ輻射;鹽脅迫;萌發(fā)率;萌發(fā)時間;發(fā)芽勢
光 果 甘 草 (GlycyrrhizaglabraL.)系 豆 科(Leguminosae)甘草屬(Glycyrrhiza)多年生草本植物[1],多生長于河岸階地,溝邊、田邊、路旁以及較干旱的輕微鹽漬化土壤[2]。在歐洲、地中海區(qū)域、哈薩克斯坦、烏茲別克斯坦、吉爾吉斯斯坦、塔吉克斯坦、俄羅斯西伯利亞地區(qū)以及蒙古有較為廣泛的分布,在中國僅分布于新疆[3]。甘草作為一味重要的中藥材,因其藥效突出以及在中藥方劑中應(yīng)用十分廣泛的特點,素有“中藥國老”和“十方九草”的稱謂[4-5]。光果甘草是中藥甘草的原植物之一[2],具有清熱解毒、潤肺止咳、消炎祛痰、平喘解痙、抗腫瘤、抗病毒和提高免疫力等諸多藥理功效[6-10],被廣泛應(yīng)用于藥品和保健品的生產(chǎn)。甘草中含有較高含量的甘草甜素和具有抗氧化活性的黃酮類與多酚類物質(zhì)[11-13],致使甘草在現(xiàn)代食品、保健品及化妝品行業(yè)中備受青睞,其中新疆甘草黃酮類成分含量較高[14]。近年來研究表明,光果甘草的根和根狀莖細(xì)胞內(nèi)存在著具有活性很強的皮膚美白功能成分——光果甘草定(Glabridin)及光果甘草素(Glabrene)[15],光果甘草定能深入皮膚內(nèi)部,有效抑制黑色素生成過程中多種酶(如抑制酪氨酸酶)的活性[16-18],是一種快速、高效、安全、綠色的美白祛斑化妝品添加劑[19],故光果甘草定有“美白黃金”的美譽[20-21]。市場需求巨大,而野生光果甘草卻因連年掠奪式的采挖瀕臨滅絕,因此,大力發(fā)展光果甘草的人工栽培技術(shù)勢在必行。然而隨著人口的迅猛增長、城市化進(jìn)程的加劇和農(nóng)田環(huán)境的不斷惡化,人口數(shù)量與耕地面積間的矛盾已經(jīng)日益凸顯。所以,培育抗逆性強的優(yōu)質(zhì)品種,研究已迫在眉睫。
鹽堿地是制約農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要因素之一[22-23],在鹽堿脅迫下,種子萌發(fā)是決定植物能否成功建植和生長的關(guān)鍵階段[24-25],新疆鹽堿地中以硫酸鹽為主的鹽分比例較大。故此,探尋提高光果甘草種子在高硫酸鹽環(huán)境下的耐受性對其在鹽堿地大面積種植具有重要意義。
輻射誘變育種是培育作物新品種的重要手段之一,很早就應(yīng)用于誘變育種研究領(lǐng)域[26-27]。60Co-γ射線誘發(fā)作物突變作為常規(guī)育種的補充手段,已被育種學(xué)家所廣為重視和利用,并且已取得顯著的成績[28-30],但以光果甘草種子為輻射材料的研究尚未見報道。
以不同劑量60Co-γ射線對光果甘草種子進(jìn)行輻射處理,并在不同濃度的Na2SO4環(huán)境中進(jìn)行種子萌發(fā)試驗,旨在探索60Co-γ射線輻射對鹽脅迫條件下光果甘草種子萌發(fā)特性的影響,以期探尋在鹽脅迫條件下能顯著促進(jìn)光果甘草種子萌發(fā)的60Co-γ射線輻射劑量,為光果甘草的輻射誘變育種和在鹽漬化土壤中的人工栽培提供理論依據(jù)。
1.1材料
試驗所用的光果甘草種子由石河子大學(xué)甘草研究所提供,種子千粒重為5.96 g。
1.2試驗方法
1.2.1種子處理 選取顆粒飽滿,大小均一的光果甘草種子置于燒杯中,加入98%的濃硫酸,用玻璃棒不斷地緩慢攪拌30 min,用自來水充分沖洗后陰干。
將陰干的種子送往新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院輻射中心,進(jìn)行60Co-γ射線輻射處理,輻射劑量率為2.75 Gy/min,輻射劑量分別為0、100、200、300 Gy共4組(其中稱未經(jīng)輻射的處理為零輻射組)。
將不同輻射處理后的種子分別置于不同濃度的Na2SO4溶液中,在25℃條件下浸泡24 h。Na2SO4濃度分別為:0、320、360、400 mmol/L,共16個處理(其中稱0 mmol/L Na2SO4處理組為零鹽組)。
1.2.2室內(nèi)發(fā)芽試驗 將經(jīng)預(yù)處理后的種子均勻地擺放于鋪有2層濾紙的透明萌發(fā)盒內(nèi),加入25 mL相應(yīng)濃度的Na2SO4鹽溶液(與預(yù)處理浸種時的鹽溶液濃度一致),將萌發(fā)盒置于光照培養(yǎng)箱(25℃,光照12 h/d,光照強度為450 μmol/(m2·s)內(nèi)培養(yǎng)。每組處理30粒種子,設(shè)3次重復(fù),用稱重法每天補充經(jīng)蒸發(fā)損失的水分,以保持萌發(fā)盒中鹽溶液濃度的恒定。
1.2.3萌發(fā)率統(tǒng)計 從種子置床之日開始,每隔24 h觀察種子萌發(fā)情況并記錄萌發(fā)種子數(shù)(以胚根突出種皮2 mm為標(biāo)準(zhǔn)),連續(xù)統(tǒng)計7天。并按下列公式統(tǒng)計萌發(fā)率、累積萌發(fā)率及萌發(fā)指數(shù)。
其中,NT表示每個處理供試種子總數(shù),∑Gti表示第i天的種子發(fā)芽總粒數(shù),Gt為逐日發(fā)芽粒數(shù),Dt為Gt對應(yīng)的萌發(fā)天數(shù)。
1.3數(shù)據(jù)處理
采用Excel和SPSS 13.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。用單因素試驗統(tǒng)計分析方法,對光果甘草不同處理的試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性檢測。
2.1不同劑量的60Co-γ輻射對光果甘草種子萌發(fā)率的影響
由圖1可以看出,在零輻射處理條件下,光果甘草種子在蒸餾水中的萌發(fā)率為93.33%,隨著溶液中Na2SO4濃度的增加,種子萌發(fā)率均呈顯著下降趨勢。在320、360 mmol/L的鹽濃度下,其萌發(fā)率分別僅為64.4%和48.9%,當(dāng)Na2SO4濃度增加至400 mmol/L時,光果甘草種子的萌發(fā)率下降為零。可見,環(huán)境鹽濃度對光果甘草的種子萌發(fā)具有顯著的抑制效應(yīng),隨鹽濃度的升高,抑制效應(yīng)逐漸增強,未經(jīng)60Co-γ射線輻射的光果甘草種子在400 mmol/L的Na2SO4濃度下將不能萌發(fā)。
60Co-γ射線輻射對光果甘草種子萌發(fā)率具有極顯著的的影響效應(yīng)(如圖1所示)。在零鹽處理組中,當(dāng)輻射劑量為100和300 Gy時,萌發(fā)率分別為91.11%和92.22%,與零輻射組之間無顯著性差異,而200 Gy的60Co-γ輻射處理下其種子萌發(fā)率極顯著降低(P<0.01),僅為48.89%。說明光果甘草的種子萌發(fā)率與輻射劑量之間不存在線性的劑量效應(yīng)關(guān)系。
在320 mmol/L和360 mmol/L的Na2SO4脅迫下,200 Gy60Co-γ射線輻射處理下的甘草種子萌發(fā)率分別為31.11%和6.67%,相較于零輻射組相同濃度Na2SO4脅迫下的64%和49%的種子萌發(fā)率,分別下降了33.32%和42.23%(P<0.01);然而經(jīng)100、300 Gy的60Coγ射線輻射處理的甘草種子的萌發(fā)率卻得到了顯著提升(P<0.05),100 Gy輻射下萌發(fā)率分別達(dá)到了80%和71%,遠(yuǎn)高于零輻射組64%的種子萌發(fā)率;300 Gy輻射下種子萌發(fā)率達(dá)到了65%和61%,遠(yuǎn)高于零輻射組49%的種子萌發(fā)率。在400 mmol/L Na2SO4脅迫下,零輻射組的光果甘草種子萌發(fā)率為零,而100、300 Gy輻射組的萌發(fā)率分別為66.67%和44.44%,說明輻射處理能極顯著地提高光果甘草種子的萌發(fā)率(P<0.01)。
2.260Co-γ輻射對Na2SO4脅迫下光果甘草種子累積萌發(fā)率的影響
萌發(fā)率這一指標(biāo)僅涉及種子群體中能萌發(fā)的種子數(shù)目,而沒有考慮種子萌發(fā)的速度和整齊度。累積萌發(fā)率可以比較全面的看到種子發(fā)芽速度快慢及出芽高峰期的時間先后。特定時間累積萌發(fā)率的高低,能夠更清晰地反映出輻射處理對種子萌發(fā)所產(chǎn)生的影響。
隨萌發(fā)天數(shù)的增加,各濃度Na2SO4脅迫處理下甘草種子累積萌發(fā)率的變化趨勢一致,均呈現(xiàn)逐漸增加并最終趨于穩(wěn)定的變化格局。未經(jīng)輻射處理的種子隨著鹽脅迫濃度的增加,種子萌發(fā)的起始時間和萌發(fā)高峰期的時間均呈現(xiàn)極顯著地推遲效應(yīng),萌發(fā)率降低,不同濃度的Na2SO4脅迫處理之間顯示出較大的差異(圖2)。
圖1 60Co-γ輻射對Na2SO4脅迫下光果甘草種子萌發(fā)率的影響
圖2 不同濃度Na2SO4脅迫下對零輻照組光果甘草種子累積萌發(fā)率的影響
而60Co-γ射線輻射處理能顯著提高鹽脅迫條件下光果甘草種子的萌發(fā)速度,縮短種子萌發(fā)的時間(圖3)。零鹽處理組的光果甘草種子,各劑量輻射處理下的累積萌發(fā)率在第1天后均趨于穩(wěn)定。隨著Na2SO4鹽脅迫濃度的增加,不同劑量輻射處理種子萌發(fā)的起始時間和發(fā)芽高峰期的時間均出現(xiàn)推遲,萌發(fā)率降低。
在320 mmol/L Na2SO4脅迫下,100 Gy處理的種子于第2天后開始萌發(fā),前3天的累計萌發(fā)率已經(jīng)達(dá)到41.44%,而未輻射的對照組種子第3天才開始萌發(fā),其前3天的累積萌發(fā)率僅為4.44%(圖3),100 Gy輻射處理下的光果甘草種子萌發(fā)速度和累積萌發(fā)率均顯著高于零輻射組及其他輻射處理組。經(jīng)100 Gy輻射處理的光果甘草種子在第5天即已達(dá)到最大萌發(fā)率(77.78%),其種子萌發(fā)的整齊程度顯著優(yōu)于對照組。在360 mmol/L Na2SO4脅迫下,100 Gy與300 Gy輻射處理的種子于第3天即開始萌發(fā),前5天的累積萌發(fā)率分別為48.89%和43.33%,未經(jīng)輻射處理的對照組種子雖然也于第3天開始萌發(fā),但其前5天的累計萌發(fā)率僅為10.00%,100和300 Gy處理的種子累積萌發(fā)率顯著高于對照組。在400 mmol/L Na2SO4脅迫下,零輻射組的種子7天內(nèi)無種子萌發(fā);而輻射處理組種子自第4天開始陸續(xù)萌發(fā),100、300和200 Gy輻射處理的種子前7天的累積萌發(fā)率分別為66.67%、32.22%和44.44%,經(jīng)輻射處理的種子無論萌發(fā)速度還是累積萌發(fā)率均顯著高于對照組。
2.360Co-γ輻射對Na2SO4脅迫下光果甘草種子萌發(fā)指數(shù)的影響
圖3 60Co-γ輻射對Na2SO4脅迫下光果甘草種子累積萌發(fā)率的影響
萌發(fā)指數(shù)也是表征種子萌發(fā)速度快慢的一個指標(biāo),如圖4所示,隨著Na2SO4濃度的增大,未輻射組種子的萌發(fā)指數(shù)呈現(xiàn)快速下降的趨勢。而經(jīng)100 Gy和300 Gy輻射處理的種子的萌發(fā)指數(shù)則始終顯著高于對照組。這表明:鹽脅迫會降低種子的萌發(fā)速度,但合適的輻射劑量可以提高種子的萌發(fā)指數(shù),提高甘草種子在鹽脅迫條件下的萌發(fā)速度。
表1為不同劑量的60Co-γ輻射處理對4組不同濃度的Na2SO4脅迫下光果甘草種子萌發(fā)高峰期的影響。零鹽組的光果甘草種子萌發(fā)高峰期均為第1天。隨著Na2SO4濃度的升高,甘草種子的萌發(fā)高峰期有明顯推遲的趨勢,320 mmol/L Na2SO4處理下,零輻射組和200 Gy輻射處理下的光果甘草種子萌發(fā)高峰期延遲至第6天,然而100、300 Gy輻射處理下的種子萌發(fā)高峰期分別出現(xiàn)在第3和第5天;360 mmol/L Na2SO4處理下,零輻射組和200 Gy輻射處理下的光果甘草種子萌發(fā)高峰期均延遲至第6天,100、300 Gy輻射處理下的種子萌發(fā)高峰期均為第5天;400 mmol/L Na2SO4處理下,零輻射組甘草種子7天內(nèi)未見萌發(fā),而100、200、300 Gy輻射處理下種子萌發(fā)高峰期分別在第5、6和第7天。表中統(tǒng)計結(jié)果顯示:鹽脅迫會顯著推遲種子萌發(fā)高峰期的出現(xiàn),但100、300 Gy的輻射可以改善鹽脅迫對種子萌發(fā)高峰期的延遲效應(yīng)。
圖4 60Co-γ輻射對Na2SO4脅迫下光果甘草種子萌發(fā)指數(shù)的影響
表1 60Co-γ輻射對Na2SO4脅迫下光果甘草種子萌發(fā)高峰期出現(xiàn)天數(shù)的影響 d
本研究應(yīng)用輻射誘變技術(shù),研究經(jīng)輻射處理的光果甘草種子在鹽堿脅迫條件下的萌發(fā)狀況,篩選出有助于提高光果甘草種子萌發(fā)能力的最佳輻射劑量,對在鹽堿荒漠和鹽漬化棄耕地中發(fā)展光果甘草的人工種植具有十分重要的指導(dǎo)意義。對絕大多數(shù)種子植物而言,種子萌發(fā)階段對環(huán)境脅迫最為敏感,所以常用脅迫條件下種子的萌發(fā)狀況來評價植物抗逆性的強弱[31]。在鹽漬環(huán)境中,種子能夠正常萌發(fā)是植株在鹽堿脅迫環(huán)境中能夠進(jìn)一步生長發(fā)育的前提,鹽脅迫下的種子萌發(fā)狀況是評價植物耐鹽性的一個重要指標(biāo)[32]。
適量的60Co-γ射線輻照能夠提高光果甘草種子的萌發(fā)率,縮短發(fā)芽時間,提高芽的生長速度,這與60Co-γ輻照對烏拉爾甘草種子萌發(fā)特性研究的結(jié)果相似[33]。在同一濃度的Na2SO4脅迫下,經(jīng)輻射處理的種子無論萌發(fā)速度還是累積萌發(fā)率均顯著高于零輻照組,故此,認(rèn)為輻射處理能顯著提高鹽脅迫條件下光果甘草種子的萌發(fā)速度,縮短種子萌發(fā)的時間,促進(jìn)種子在鹽堿環(huán)境下的快速定植。其中,在高鹽濃度脅迫環(huán)境下,100、300 Gy的60Co-γ射線輻射處理均能顯著提高光果甘草種子的萌發(fā)率和萌發(fā)速度,且促進(jìn)效應(yīng)隨鹽濃度的增加而愈加顯著;而200 Gy的輻射處理則會顯著抑制光果甘草種子的萌發(fā)率。100、300 Gy的輻射處理能提高光果甘草種子對高鹽環(huán)境的耐受能力,這可能是由于輻射引起了種子內(nèi)部生物自由基或有關(guān)酶活性的變化,從而提高了種子的新陳代謝水平,進(jìn)而促進(jìn)種子的萌發(fā)。
輻照射線對烏拉爾甘草、脹果甘草、菘藍(lán)、白花草木樨、黃花草木樨等中藥材植物種子在鹽脅迫環(huán)境下的萌發(fā)特性研究中也有相似結(jié)果[27]。其中光果甘草、烏拉爾甘草和脹果甘草種子的適宜輻照劑量均不具連續(xù)性,于200 Gy的60Co-γ射線輻照處理下均表現(xiàn)出種子萌發(fā)受抑制的現(xiàn)象,其對適宜輻照劑量的選擇具有一定的特殊性。由此可見,當(dāng)60Co-γ射線輻射劑量在100 Gy或300 Gy時,對光果甘草種子在高濃度Na2SO4溶液中耐鹽性能的提升有顯著且穩(wěn)定地促進(jìn)效應(yīng)。由于時間和試驗條件限制,本研究對光果甘草種子萌發(fā)適宜輻照劑量的選擇特殊性未做探討,200 Gy的60Coγ射線輻照處理抑制萌發(fā)率降低的機制還有待進(jìn)一步研究。
試驗結(jié)果表明,不同劑量的60Co-γ射線輻射對光果甘草種子萌發(fā)能力產(chǎn)生的影響效果不同,種子萌發(fā)率與輻射劑量間不存在簡單的線性劑量效應(yīng)。播前用100或300 Gy的60Co-γ射線輻射光果甘草種子,對其在鹽漬化土壤環(huán)境中的萌發(fā)有積極的促進(jìn)作用,因此,在生產(chǎn)過程中推薦應(yīng)用輻射處理種子的方法來提高光果甘草種子發(fā)芽階段的耐鹽性能。而輻射處理對光果甘草幼苗耐鹽能力的影響以及經(jīng)輻照處理的光果甘草對不同鹽分環(huán)境的耐受性能還有待進(jìn)一步探討。
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Effect of60Co-γ Radiation on Salt Resistance of Glycyrrhiza glabra Seed
Gao Rui1,Ma Miao1,2,Zhao Hongyan3
(1College of Life Science,Shihezi University,Shihezi 832003,Xinjiang,China;
2Institute of Glycyrrhiza Uralensis,Shihezi University,Shihezi 832003,Xinjiang,China;3The Library of Xinjiang Normal University,Urumqi 830054,Xinjiang,China)
The purpose of the study was to select the optimal radiation dosage,which was very important to improve the salt resistance of Glycyrrhiza glabra seed,and to provide guidance for the development of artificial cultivation of licorice in saline-alkali desert soil.Radiation induced mutation technology was used to investigate the germination pattern of Glycyrrhiza glabra seed under severe salt stress after60Co-γ radiation with different doses.The seed germination rate,cumulative germination rate and germination index under high concentration of Na2SO4stress were compared.The results showed that there was a negative correlation between salt concentration and the germination rate of Glycyrrhiza glabra seed without radiation,with the increase of salt concentration,the germination rate significantly decreased,initial germination time was postponed,and the time to reach the maximum germination rate was extended.The seed which was treated by 100 Gy and 300 Gy60Co-γ radiation had significantly higher germination rate than the seed without radiation treatment,and the germination time was significantly shorter under Na2SO4stress environment.The appropriate doses of60Co-γ radiation treatment could effectively improve seeds germination of Glycyrrhiza glabra under severe salt stress condition.In conclusion,seeds should be treated with certain doses of60Co-γ according to theconcentration of Na2SO4in soil before sowing.
Glycyrrhiza Glabra;60Co-γ Radiation;Salt Stress;Germination Rate;Germination Time;Germination Index
S567.23+9
A論文編號:cjas16010008
國家自然科學(xué)基金項目“高鹽環(huán)境下烏拉甘草葉片氣孔泌鹽與光合氣體交換的利益沖突及權(quán)衡策略的研究”(31360047);石河子大學(xué)重大科技攻關(guān)項目“耐鹽甘草種質(zhì)的篩選與人工創(chuàng)制”(gxjs2012-zdgg06)。
高睿,女,1992年出生,研究生,主要從事甘草耐鹽性的研究。通信地址:832000新疆維吾爾自治區(qū)石河子市石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,E-mail:1473211643@qq.com。
馬淼,男,1970年出生,教授,博士,從事甘草耐鹽機理的研究。通信地址:832000新疆維吾爾自治區(qū)石河子市石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,E-mail:mamiaogg@126.com。
2016-01-12,
2016-03-21。