汪　琳,　張　濤,　白克鎮(zhèn)

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MTHFR基因C677T位點(diǎn)突變及高同型半胱氨酸血癥和血管性癡呆的發(fā)生相關(guān)性

汪琳,張濤,白克鎮(zhèn)

目的研究血漿同型半胱氨酸(Hcy)濃度及亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因多態(tài)性與血管性癡呆(VaD) 的關(guān)系。方法選取83例VaD患者作為觀(guān)察組和81例非癡呆腦梗死患者作為對(duì)照組，分別測(cè)定兩組患者的MTHFR基因多態(tài)性、Hcy濃度、維生素B12和葉酸水平，根據(jù)簡(jiǎn)易精神狀態(tài)檢查量表(MMSE)評(píng)定VaD患者癡呆程度，對(duì)指標(biāo)進(jìn)行比較和相關(guān)性分析。結(jié)果MTHFR基因TT純合子在觀(guān)察組VaD患者的分布頻率明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組患者的MTHFR基因C、T等位基因分布頻率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。觀(guān)察組VaD患者的血漿Hcy濃度明顯高于對(duì)照組，其血清葉酸與維生素B12濃度明顯低于對(duì)照組，VaD患者的血漿 Hcy 水平隨著癡呆程度的增加而明顯提高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。VaD患者血漿Hcy水平與自身癡呆程度呈正相關(guān)(r=0.452，P<0.05)，與MMSE評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.246，P<0.05)。結(jié)論MTHFR基因C677T突變及高水平Hcy與VaD的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，高Hcy血癥是VaD發(fā)病的一個(gè)重要因素。

亞甲基四氫葉酸還原酶;同型半胱氨酸;血管性癡呆;相關(guān)性

血管性癡呆 (vascular dementia，VaD) 是指由缺血性卒中、出血性卒中和造成記憶、認(rèn)知和行為等腦區(qū)低灌注的腦血管疾病所致的嚴(yán)重認(rèn)知功能障礙綜合征，在我國(guó)患病率為1.1%～3.0%。早期研究認(rèn)為亞甲基四氫葉酸還原酶(methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR)基因C677T突變與血管性癡呆相關(guān)[1]。近年來(lái)有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)高同型半胱氨酸(Hcy)血癥是腦梗死發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一[2]，Hcy代謝的限速酶MTHFR的C677T堿基突變會(huì)較弱其自身活性，導(dǎo)致高Hcy血癥。鑒于此，本文分析MTHFR的C677T基因突變及高同型半胱氨酸(Hcy)血癥與血管性癡呆發(fā)生的相關(guān)性，旨在探討這兩者對(duì)血管性癡呆發(fā)生的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　材料和方法

1.1研究對(duì)象選取2013年10月-2015年9月在我院神經(jīng)內(nèi)科及精神科病房住院治療的VaD患者83例作為觀(guān)察組，其中男45例，女38例，年齡61～87歲，平均年齡(68.6±6.7)歲。另選取同期在我院接受治療的81例非癡呆腦梗死患者作為對(duì)照組，其中男43例，女38例，年齡58～83歲，平均年齡(65.3±5.9)歲。兩組患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)第四屆全國(guó)腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議通過(guò)的各項(xiàng)腦血管病診斷要點(diǎn)[3]，腦卒中時(shí)間>3個(gè)月。VaD患者符合美國(guó)精神病學(xué)會(huì)制定的《精神病的診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè) (DSM-IV)》中老年性癡呆診斷標(biāo)準(zhǔn)；精神狀態(tài)簡(jiǎn)易量表(MMSE)評(píng)分≤24分；Hachinski缺血量表評(píng)分≥7分；所有患者及家屬簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有嚴(yán)重心、肝、腎、肺疾病者；神經(jīng)系統(tǒng)其他疾病引發(fā)的癡呆；精神疾病患者；惡性腫瘤患者。

1.2檢測(cè)指標(biāo)及方法 兩組患者入院次日清晨空腹抽取外周靜脈血，從中抽取2 ml血液，血漿分離后，使用OLYMPUS AU5400全自動(dòng)生化分析儀深圳奧薩制藥公司提供的Hcy檢測(cè)試劑盒，采用速率法測(cè)定血漿Hcy濃度。抽取2 ml血液分離血清后，使用西門(mén)子公司生產(chǎn)的CP葉酸分析儀和維生素B12分析儀，采用直接化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)葉酸和維生素B12濃度。提取DNA后，采用MTHFR C677T 檢測(cè)試劑盒，使用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RFLP)技術(shù)檢測(cè)MTHFR C677T 位單核苷酸多態(tài)性。

2　結(jié)　果

2.1兩組患者的MTHFR基因型與等位基因分布MTHFR基因包括TT純合子、CT雜合子、CC純合子3種類(lèi)型。兩組患者經(jīng)過(guò)Hardy-Weinberg擬合優(yōu)度檢驗(yàn)均符合遺傳平衡規(guī)則(P>0.05)，具有群體代表性。MTHFR基因TT純合子在觀(guān)察組VaD患者的分布頻率明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。觀(guān)察組VaD患者的MTHFR基因C、T等位基因分布頻率與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表1)。

2.2兩組患者血漿Hcy及血清葉酸、維生素B12水平觀(guān)察組VaD患者的血漿Hcy濃度明顯高于對(duì)照組，其血清葉酸與維生素B12的濃度明顯低于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表2)。

2.3VaD患者癡呆程度與血漿Hcy水平的相關(guān)性根據(jù)簡(jiǎn)易精神狀態(tài)檢查量表(MMSE)評(píng)分將VaD患者分為輕度癡呆(MMSE≥21分)、中度癡呆(10分≤MMSE<21分)和重度癡呆(MMSE<10分)3組。VaD患者的血漿Hcy水平隨著癡呆程度的增加而逐漸提高，MMSE評(píng)分隨著癡呆程度的增加而逐漸下降，而且3種不同癡呆程度VaD患者之間的Hcy 水平和MMSE評(píng)分差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表3)。Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，VaD患者血漿Hcy水平與自身癡呆程度呈正相關(guān)(r=0.452，P<0.05)，與MMSE評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.614，P<0.05)。

2.4兩組患者M(jìn)THFR不同基因型之間血漿Hcy水平兩組中MTHFR基因TT純合子型和CT雜合子型患者的血漿Hcy水平均明顯高于本組的CC純合子型患者，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表4)。

表1　兩組患者的MTHFR基因型與等位基因頻率比較[n(%)]

表2　兩組患者Hcy、葉酸、維生素B12水平比較

表3　不同癡呆程度下VaD患者Hcy 水平比較

表4　MTHFR不同基因型之間血漿Hcy水平比較

與本組CC型比較*P<0.05

3　討　論

人體MTHFR基因具有多態(tài)性，MTHFR基因C677T突變是指該基因的第4個(gè)外顯子的第677個(gè)核苷酸堿基產(chǎn)生C→T突變[3]。該突變會(huì)導(dǎo)致MTHFR的酶活性和熱穩(wěn)定性下降，直接促進(jìn)Hcy在人體內(nèi)積累儲(chǔ)存，導(dǎo)致高Hcy血癥。蔣萍等[4]研究報(bào)道急性腦梗死患者M(jìn)THFR基因C677T突變與Hcy水平顯著相關(guān),MTHFR基因C677T突變可能是引起高Hcy的一個(gè)重要因素。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MTHFR基因TT純合子在VaD患者的分布頻率明顯高于非癡呆腦梗死患者，VaD患者的血漿Hcy濃度明顯高于非癡呆腦梗死患者，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示VaD患者的MTHFR基因C677T突變發(fā)生可能性更高；而且研究還發(fā)現(xiàn)兩組中MTHFR基因TT純合子型和CT雜合子型患者的Hcy水平均明顯高于本組的CC純合子型患者，提示MTHFR基因中C677T的C→T突變與高Hcy癥有關(guān)系，這與以往相關(guān)的研究結(jié)果基本一致[4,5]。

早期研究報(bào)道高水平Hcy會(huì)產(chǎn)生神經(jīng)細(xì)胞毒性，引發(fā)海馬部神經(jīng)元死亡或者對(duì)其產(chǎn)生興奮毒性作用[6]；進(jìn)而導(dǎo)致患者智力、認(rèn)知能力、記憶力等遭到損害，導(dǎo)致患者癡呆。Ravaglia等[7]研究發(fā)現(xiàn)隨著Hcy水平升高，簡(jiǎn)易精神狀況檢查評(píng)分逐漸下降，Hcy是患者認(rèn)知功能損害的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，VaD患者的血漿Hcy水平隨著癡呆程度的增加而逐漸提高，MMSE評(píng)分隨著癡呆程度的增加而逐漸下降，Hcy水平與自身癡呆程度呈正相關(guān)(r=0.452，P<0.05)，與MMSE評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.614，P<0.05)，這與上述研究結(jié)果基本一致。Hcy的代謝需要維生素B12和MTHFR參與，通過(guò)甲基化轉(zhuǎn)化為甲硫氨酸[3]。葉酸是調(diào)節(jié)Hcy代謝的關(guān)鍵酶，其水平的下降可引起血清Hcy水平的升高[8]。若葉酸、維生素B12缺乏，會(huì)導(dǎo)致Hcy代謝受阻而產(chǎn)生高Hcy血癥。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，VaD患者的血漿Hcy濃度明顯高于非癡呆腦梗死患者，其血清葉酸與維生素B12濃度明顯低于非癡呆腦梗死患者，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示低葉酸和低維生素B12血癥可引發(fā)高Hcy血癥。而且有學(xué)者研究提出[9]，通過(guò)補(bǔ)充葉酸和維生素B12可有效降低患者Hcy水平，進(jìn)而降低腦血管病的發(fā)生率。

綜上所述，MTHFR基因C677T突變及高Hcy血癥與VaD的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，高Hcy是VaD發(fā)病的一個(gè)重要因素，及時(shí)補(bǔ)充葉酸和維生素B12可降低Hcy水平，尋找MTHFR基因C677T突變的原因并予以防治，從而為防治VaD提供一些新的手段。

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The relationship between the plasma homocysteine levels,the MTHFR gene polymorphism and vascular dementia

WANGLin,ZHANGTao,BAIKezhen.

(DepartmentofPsychiatry,TheAffiliatedHospitalofSouthwestMedicalUniversity,SichuanLuzhou64600,China)

ObjectiveTo study on the association between the plasma homocysteine (Hcy) concentration,the methylene tetrahydrofolate reductase gene polymorphism(MTHFR) and vascular dementia (VAD).Method83 patients with VaD were selected as the observation group and 81 patients with non dementia cerebral infarction were selected as control group,MTHFR gene polymorphism,Hcy concentration,Vitamin B12 and folic acid levels in two groups of patients were measured,the degree of dementia in patients with VaD were assessed according to the mini mental state examination scale (MMSE),the indicators were compared and correlation were was analyzed.ResultsThe distribution frequency of MTHFR gene TT in the observation group was significantly higher than that in the control group,the difference was statistically significant (P<0.05).The distribution frequency of C and T allele of the MTHFR gene in the two groups had statistical significance(P<0.05).The plasma Hcy concentration of VaD patients in observation group was significantly higher than that in control group,the serum folate and vitamin B12 concentrations were significantly lower than those of the control group,the level of plasma Hcy in VaD patients was significantly increased with the increase of the degree of dementia,the differences were statistically significant (P<0.05).The level of plasma Hcy in VaD patients was positively correlated with the degree of dementia (r=0.452，P<0.05),and negatively correlated with the MMSE score(r=-0.246，P<0.05).ConclusionMTHFR gene C677T mutation and high level of Hcy are correlated with the occurrence and development of VaD,high plasma Hcy blood disease is an important factor for the occurrence of VaD.

Methylene tetrahydrofolate reductase;Homocysteine;Vascular dementia;Correlation

1003-2754(2016)08-0696-03

2016-04-14；

2016-08-03

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院精神科，四川 瀘州 646000)

汪琳，E-mail：cedirt@163.com

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